免疫層析法檢測原理分類介紹

1、免疫層析法檢測原理分類介紹作者：佚名    文章來源：艾康生物技術（杭州）有限公司    點擊數(shù)： 88    更新時間：2005-10-16雙抗體夾心 ·以 hCG試劑為例金標為鼠源性抗-hCG單克隆抗體與膠體金的復合物，測試線包被羊抗-hCG多克隆抗體，控制線包被羊抗鼠多克隆抗體。婦女受孕的“指示劑” hCG是一種肽，包含一條和FSH（促卵泡成熟激素），F(xiàn)LH 具有同源性的鏈和一條高度特異的鏈。當待測尿液或血清中含有一定量的hCG時，樣本通過層析作用到

2、達金標位置hCG的鏈和單抗-hCG發(fā)生免疫反應，再層析到測試線位置，hCG的鏈和多抗-hCG 發(fā)生免疫反應，這樣就把金標通過hCG橋連到測試線上，達到一定量后，金標顯色為肉眼可見的水平，多余的金標繼續(xù)泳動到控制線位置，由于多抗鼠和鼠源性抗-hCG 單抗發(fā)生免疫反應，從而橋連膠體金顯色，這樣就得到陽性結(jié)果。當尿液或血清中不含 hCG時，金標和測試線抗體不發(fā)生橋連，而控制線則顯色，這樣就得到了陰性結(jié)果。當測試線和控制線均不顯色時，表示試劑盒無效。  該產(chǎn)品檢驗靈敏度25mIU/ml hCG。測HbsAg的HbsAg產(chǎn)品的檢測原理是雙抗體夾心。 競爭反應原理  

3、3;以 MOP 為例（BSA 為牛血清白蛋白）金標為鼠源性抗體Morphine單抗和膠體金的復合物，T線（為取得較強的免疫應答，故免疫原采用Morphine-BSA 偶聯(lián)物）包被Morphine-BSA。C 線包被羊抗鼠抗體。  當待測尿液中含一定量以上的 Morphine時，樣本到達金標位置，和單抗Morphine-BSA發(fā)生免疫反應并完全飽和之，再層析到T線位置時，由于單抗Morphine-BSA lgG膠體金復合物已無空余的位點和測試線上的Morphine-BSA結(jié)合，故T線不顯色，C線顯色，這樣得到的是陽性結(jié)果。當待測尿液中不含 Morphine時，樣本與金標不反應

4、，再層析到T線位置時，固定在NC膜上的Morphine-BSA會“捕捉”單抗 Morphine-BSA膠體金復合物，故T線顯色，C線也顯色，得到陰性結(jié)果。當無C、T線時，表示試劑盒失效。其它產(chǎn)品如 DPC、DTH、DME、DAM、DCO等依次類推。  應用proteinA金標的試劑盒檢測原理 蛋白 A是金黃色葡萄球菌的一種胞壁蛋白，有與哺乳動物的lgG結(jié)合的特性，親和力根據(jù)物種的差異而有區(qū)別。而人體中所有的抗體均是lgG因此能用來檢測人體血液中的抗體用已知抗原測未知抗體。  ·以IHI為例說明HIV試劑盒金標為protein A-金標復合物,T

5、線包被HIV抗原。C線包被雞抗protein A多克隆抗體。當待測血清中含有HIV抗體時，該抗體先和protein A膠體金復合物免疫結(jié)合，到T線位置時，該抗體又和固定在NC膜上的HIV抗原免疫結(jié)合，從而橋連protein A膠體金，T線顯色。到達C線位置時，固定在NC膜上的雞抗protein A 多抗橋連protein A多抗橋連protein A膠體金，C線顯色，得到陽性結(jié)果。若待測血清中不含HIV抗體，則T線上的HIV抗原和protein A不發(fā)生免疫結(jié)合，T線不顯色，C線顯色，得到陰性結(jié)果。若無C、T線，說明試劑盒已失效。應用此原理的產(chǎn)品還有IHC及測HbsAb的等產(chǎn)品。艾康HIV1/

6、2型抗體診斷試劑說明書作者：佚名    文章來源：艾康生物技術（杭州）有限公司    點擊數(shù)： 85    更新時間：2005-10-16HIV艾滋病毒1/2 型抗體乳膠層析法全血/血清/血漿快速檢測試劑盒使用說明書（產(chǎn)品編號： IHI-402）本品是一種不需要任何儀器設備的全血檢測法，是利用免疫層析分析原理、雙抗原夾心法快速檢測血液中是否含有HIV1/2 抗體，從而用于臨床判斷人體是否受到HIV1/2 型病毒的感染?！緶y定原理】ACON HIV1/2 試劑盒采用高度特異性的

7、抗體抗原反應及免疫層析分析技術來定性檢測血液中是否含有HIV1/2抗體，試劑盒中含有被事先固定于膜上測試區(qū)(T)的重組HIV 抗原和質(zhì)控區(qū)(C)的相應抗體。測試時，血標本滴入試劑盒加樣孔（S）內(nèi)，血標本中的HIV1/2抗體與預包被在膜上的重組抗原-乳膠結(jié)合物反應。然后，混合物隨之在毛細效應下向上層析，在測試區(qū)（T）與固定在膜上的重組HIV抗原反應。如果血液中含有抗HIV-1或HIV-2抗體，在測試區(qū)內(nèi)（T）會出現(xiàn)一條紅色條帶，表明是陽性結(jié)果。如果在測試區(qū)內(nèi)（T）沒有出現(xiàn)紅色條帶，則血液中不含有抗HIV1/2 抗體，表明是陰性結(jié)果。無論抗-HIV1/2抗體是否存在于血液中，混合物都會繼續(xù)向上層析

8、至質(zhì)控區(qū)（C），質(zhì)控區(qū)的相應抗體與乳膠結(jié)合物反應出現(xiàn)一條紅色條帶。質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）所顯現(xiàn)的紅色條帶是判定層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑的內(nèi)控標準?！景b組成】l  ACON HIV1/2 乳膠層析法全血/血清/血漿/檢測試劑盒(40人份)l  反應緩沖液（5ml）l  使用說明書一份l  一次性使用吸管(40支)【檢測所需設備】l  采血針l  秒表l  止血棉球【標本收集】血標本的采集：指尖、耳垂末梢或靜脈標本采集后應盡可能立即使用，抗凝血應在24小時內(nèi)使用以避免融血。血清/血漿標本的收集：血清/血漿標本由靜脈采血后

9、離心獲得，標本在2-8°C可保存一周。如長期保存需冷凍。避免反復凍融【操作步驟】在進行任何測試前必須先完整閱讀使用說明，使用前將檢測試劑盒和全血/血清/血漿標本恢復至室溫（20-30oC），取出反應緩沖液并放置20分鐘使其恢復至室溫。1 從原包裝鋁箔袋中取出試劑盒（注意：在打開鋁箔袋前應先恢復至室溫）。在1小時內(nèi)應盡快地使用，特別是在室溫高于30°C或是在高度潮濕的環(huán)境中應盡快地使用。在一小時內(nèi)測試將會得到最佳效果。2 將試劑盒置于干凈平坦的臺面上，用吸管吸取指尖血或靜脈血后滴入1滴全血/血清/血漿（約25ml）于加樣孔S中，隨后加入1 滴緩沖液于加樣孔S 中。切勿將指尖血

10、直接滴入加樣孔內(nèi)。3 等待紅色條帶的出現(xiàn)，在15分鐘左右讀取測試結(jié)果。關鍵要注意，在紅色條帶出現(xiàn)以前，背景要清晰，特別當樣本中含有低滴度的抗-HIV1/2抗體，會導致出現(xiàn)的T線顏色很淡，此時更需注意背景要清晰。在20分鐘后讀取的結(jié)果無效?！窘Y(jié)果判定】陽性（+）：兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)內(nèi)（T），另一條位于質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）。陰性（-）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶，在測試區(qū)內(nèi)（T）無紅色條帶出現(xiàn)。無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已變質(zhì)損壞。在任何情況下，應重新測試。如果問題仍然存在，應立即停止使用此批號產(chǎn)品，并與當?shù)毓搪?lián)系。注意：由于樣本中抗-HIV 抗

11、體滴度的不同，測試區(qū)（T）內(nèi)的紅色條帶會顯現(xiàn)出不同深淺的顏色。但是，本試劑盒的測試結(jié)果不能做為判定樣本中抗體滴度高低的依據(jù)?！眷`敏度】ACON HIV乳膠層析法全血/血清/血漿檢測試劑盒在臨床標本中用HIV 的EIA 的檢測試劑盒進行比較，結(jié)果表明ACON HIV 乳膠層析法全血/血清/血漿檢測試劑盒對HIV-1和HIV-2抗體具有很高的靈敏度，其相對靈敏度達100%。【特異性】運用在ACON HIV乳膠層析法全血/血清/血漿檢測試劑盒中的重組HIV抗原為病毒包膜上的糖蛋白。同EIA檢測試劑盒相比，ACON HIV 乳膠層析法檢測試劑盒對HIV-1 和HIV-2抗體具有很高的特異性，其相對特異

12、性達99.6%?！臼褂孟拗啤縧  ACON HIV1/2乳膠層析法檢測試劑盒僅用于體外診斷，并適用于檢測全血/血清/血漿樣本中的抗-HIV1/2抗體。l  這項測試僅表示樣本中抗-HIV1/2 抗體的存在，而不能作為機體感染HIV-1或HIV-2的標準。l  為了確保結(jié)果的準確性，可對樣本用ELISA 或Western Blot 作進一步的分析。l  同所有的診斷試劑一樣，檢測結(jié)果必須結(jié)合內(nèi)科醫(yī)生得出的其它臨床癥狀進行診斷。l  如果測試結(jié)果呈陰性并有臨床癥狀存在，可建議使用其他臨床方法進行測試。陰性結(jié)果并不能排除感染HIV-1或HIV-2的可

13、能性?！敬鎯头€(wěn)定性】原包裝儲存于2-30°C，并裝在密封的袋中。反應緩沖液保存于2-30°C。試劑盒在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的，切忌冷凍或超過有效期后使用。（有效期見包裝袋）Experience Simple Testing艾康生物技術（杭州）有限公司制造地址：中國杭州市古蕩工業(yè)園區(qū)（天目山路398號）郵編：310023電話：(0571)87960387(總機轉(zhuǎn))傳真：(0571)87963009網(wǎng)址：編號:R015310-03 免疫層析類產(chǎn)品特殊情況及處理原則作者：佚名    文章來源：艾康生物技術（杭州）有限公司  

14、  點擊數(shù)： 49    更新時間：2005-10-16·Q:1.跑板異乎尋常的慢或無樣本跑動現(xiàn)象（在反應窗內(nèi)不見有液體在膜上流動） 可能的原因:建議:1.加入的標本量或全血加緩沖液的量不夠。（乙肝全血產(chǎn)品加樣時滴加一滴指尖血是不夠的，兩滴才能保證50l的加樣量） 用新產(chǎn)品重新檢測，加入正確的樣本或緩沖液的量，避免氣泡產(chǎn)生。（如果兒童的指尖血連續(xù)擠兩滴比較困難，可以從掌向指方向擠壓過去，血量可以明顯增加）。 2.包裝袋破損或筒裝試紙條長時間放在冰箱中保存（快診試劑對環(huán)境的相對濕度敏感，一般常溫保存，避免受潮）。 用包裝完整的

15、診斷試劑重新測試/一般室溫保存即可，太熱或太冷需要保證適宜的溫度除外。 3.從冷環(huán)境取出后沒復溫。從冷環(huán)境中取出復溫2030分鐘。4.樣本不適合于檢測（如樣本中有小血塊）。 血清/血漿重新離心后使用，全血需重新取樣。 5.診斷試劑裝配不當。與供貨商聯(lián)系。 6.全血產(chǎn)品加全血標本以后幾分鐘再加緩沖液（血液比較粘稠，在幾分鐘時間內(nèi)已經(jīng)接近凝固，再加緩沖液，不能幫助血液層析） 加血后立即加緩沖液 7.誤操作，特別是針對個人消費者（將樣本如尿液加到測試窗口或者有尿液濺到測試窗口） 改正操作，注意正確的操作方法，把尿液加到加樣區(qū)。 8.試劑條的玻纖（海綿狀）翹起換用新的試劑檢測。·Q:2.層析

16、時沒有紅色背景可能的原因:建議:1.產(chǎn)品有問題。 用新的產(chǎn)品重新進行檢測并與供貨商聯(lián)系。  ·Q:3.在反應窗內(nèi)見到紅色豎線 可能的原因:建議:1.當樣本在膜上流動時可能發(fā)生。該情況不會影響檢測結(jié)果，但保證背景清晰的情況下在規(guī)定時間內(nèi)讀取結(jié)果。2.可能使用了已溶血樣本。用新鮮標本重新測試。  ·Q:4.規(guī)定的結(jié)果讀取時間時未見C線 可能的原因:建議:1.加入的樣本量不夠。重新測試，按說明書要求加入足夠的樣本量。 2.加入的樣本量太多，導致產(chǎn)品流動不正常。嚴格按照說明書要求滴加樣本量。3.樣本不流動。血清/血漿重新離心后使用，全血需重新取樣。 4.試劑未復

17、溫就進行檢測。冷藏的試劑檢測前應復溫。5.試劑有問題。與供貨商聯(lián)系。6.用血清血漿試劑檢測全血。用對應的標本檢測 。 ·Q:5.C線不完整，出現(xiàn)顏色不均一或者線條中部短開的現(xiàn)象可能的原因:建議:1.標本在試紙條上層析不均勻。出現(xiàn)這樣的情況并不影響判斷結(jié)果，仍然可以按一般的C線判斷，請將該產(chǎn)品的批號告知供應商。·Q:6.T線處出現(xiàn)比正常狀況下的T/C線要窄得多的一根或兩根線條可能的原因:建議:1.標本在試紙條上層析不均勻。這樣的情況應該判沒有T線·Q:7.在規(guī)定的讀數(shù)時間后出現(xiàn)了T線 可能的原因:建議:1.金標或乳膠（有色標記物）持續(xù)釋放。1.這個結(jié)果是無

18、效的。注意請在規(guī)定的時間讀取結(jié)果。·Q:8.檢測后出現(xiàn)假陰性結(jié)果 可能的原因:建議:1.樣本中被檢樣本濃度低于檢測閾值或者快診試劑檢測與復核實驗檢測的不是同一標記物 （例如丙肝抗體檢測和 HCV RNA 檢測） 用其它檢測方法確認該患者的實際含量。  2.該樣本含有的亞型較為特殊或者病毒變異能力強。 用其它檢測方法確認該患者是否為陽性。 3.測試者的樣本被稀釋。 樣本應不加稀釋。 4.針對乙肝兩對半檢測板第四、五項的原理為競爭法，T線處沒有線條判為陽性。 按照說明書判斷結(jié)果 5.沙眼衣原體產(chǎn)品取樣失誤或使用的不是配套提供的滌綸棉簽。參閱說明書正確取樣，使用配套的滌綸棉簽。

19、6.很淡的線條客戶判為陰性。（一般背景干凈的情況下，T線處有正常寬度的線條即判陽性，特殊判斷方法的除外） 仔細閱讀說明書，按照指定的判讀方法判斷。 7.乙肝表面抗體全血檢測試劑每一條都加緩沖液或者緩沖液加入的量超過說明書的規(guī)定。 根據(jù)全血試紙條的層析狀況決定是否滴加緩沖液。8.試劑受潮 換用新的試劑檢測 。 9.如果使用排卵試劑連續(xù)幾個月檢測不出陽性結(jié)果，可能的原因有：隔天檢測錯過了排卵期；連續(xù)檢測的時間太短，還沒到排卵期就停止檢測；激素分泌不正常。 連續(xù)檢測 / 建議您去醫(yī)院向?qū)I(yè)醫(yī)生咨詢。  ·Q:9.檢測后出現(xiàn)假陽性結(jié)果 可能的原因:建議:1.血清/血漿樣本中含有特殊

20、干擾物質(zhì)。用另外的方法確診檢測結(jié)果。2.在超過規(guī)定時間后讀取結(jié)果。 不要在說明書規(guī)定讀數(shù)時間后讀取檢測結(jié)果。 3.該加緩沖液的沒有加或者加入檢測樣本后幾分鐘才加入緩沖液，導致非特異性結(jié)合沒有被屏蔽 按照說明書加入緩沖液 4.不使用與產(chǎn)品配套提供的吸管，加樣量嚴重超過說明書規(guī)定的樣本體積（例如艾滋全血產(chǎn)品） 盡量使用與產(chǎn)品配套的吸管。 5.針對排卵檢測試劑，使用了早上第一次的尿液或幾個小時睡眠后的尿液檢測。 使用一天中其他時間的尿液。  ·Q:10.用陰性標本檢測時測試區(qū)出現(xiàn)兩條線 可能的原因:建議:1.產(chǎn)品質(zhì)量問題用新的產(chǎn)品重新檢測該血液樣本，并將該事件通報公司。 

21、0;·Q:11.用水檢測后測試區(qū)出現(xiàn)線條 可能的原因:建議:1.在金標記物上行過程中，未反應的金顆粒滯留在測試區(qū)顯現(xiàn)線條。 ACON 的產(chǎn)品設計為使用全血 / 血清 / 血漿 / 大便 / 宮頸感染細胞等樣本進行檢測，請勿用水作為陰性對照品進行實驗。建議您使用陰性標本作為對照。因為陰性標本的內(nèi)環(huán)境與水存在較大差異，如 PH ，蛋白濃度，電解質(zhì)濃度。 ACON 部分產(chǎn)品配套提供緩沖液或裂解液，保證穩(wěn)定的反應環(huán)境。 艾康產(chǎn)品常見問題解答測試標本作者：佚名    文章來源：艾康生物技術（杭州）有限公司    點

22、擊數(shù)： 75    更新時間：2005-10-16Q:1.艾康的產(chǎn)品一般用什么標本檢測？      A:根據(jù)艾康檢測產(chǎn)品與要求的不同，使用較多的檢測標本有尿液，指尖、耳垂末梢血，靜脈血，血清，血漿，陰道分泌物，尿道分泌物，大便。  Q:2.艾康的產(chǎn)品對標本的采集、保存有什么要求？      A: 指尖，耳垂末梢血采集后應該盡快使用，防止凝血；靜脈采血過程盡量避免溶血；抗凝血在 24小時內(nèi)使用，避免溶血；血清/血漿標本由靜脈采血后離心獲得，標本在2-8可保存一周；如長期保存需冷凍至-20

23、，避免反復凍融；尿液標本必須采集新鮮尿液，若尿樣呈可見的渾濁狀，需要先離心、過濾或待其沉淀后去上清檢測；宮頸取樣時棉簽事前不要用生理鹽水浸潤，這樣會減少標本獲得量，標本收集前應將陰道內(nèi)粘性物質(zhì)去除；取糞便標本時，在新鮮糞便的不同部位取樣三次，保證取樣具有代表性。  Q:3.全血/血清/血漿試劑使用指尖、耳垂末梢血和使用靜脈血是否相同？     A:通常情況下，各種標本檢測效果是相同的。指尖、耳垂末梢血量較少，檢測時需加緩沖液，而且末梢血中含有一些組織液的成分，血液濃度較靜脈血低。   Q:4.全血標本里加入抗凝劑時是否對檢測結(jié)果有影響？

24、0;     A: 加入各種抗凝劑不會影響試劑的正常使用。 Q:5.當全血產(chǎn)生融血現(xiàn)象后是否可以繼續(xù)檢測？     A: 不可以。應避免使用融血標本的檢測，會導致背景變深，從而影響判讀結(jié)果。  Q:6.血清 /血漿產(chǎn)品可以檢測全血嗎？全血產(chǎn)品可以檢測血清/血漿嗎？      A: 所有艾康全血產(chǎn)品除 Malaria檢測試劑外均可使用血清/血漿標本進行檢測；全血產(chǎn)品不適合用血清/血漿標本進行檢測艾康產(chǎn)品常見問題解答 結(jié)果判定作者：佚名    文章來源：艾康生物技術（杭

25、州）有限公司    點擊數(shù)： 67    更新時間：2005-10-16Q:1.測試時，若未到判讀時間出現(xiàn)的陰性結(jié)果，可否判為陰性？      A: 不可以。測試結(jié)果應按照說明書規(guī)定的時間判讀，以防止漏檢！例如用乙肝表面抗原血清 /血漿測試條檢測時，強陽性結(jié)果會在15分鐘內(nèi)出現(xiàn)，弱陽性結(jié)果可能在15分鐘以后出現(xiàn)，所以在說明書規(guī)定的判讀時間內(nèi)結(jié)果都是有效的。   Q:2.超過了判讀時間結(jié)果還準確嗎？     A:結(jié)果不準確，應按照說明書規(guī)定的時間判讀。如果到判讀時間為止，結(jié)果為陰性，判讀時間以后，出現(xiàn)淡淡的線條，可能是有色標記物持續(xù)釋放造成的，但是這種結(jié)果是無效的。   Q:3.當試劑進行檢測時，可見紅色的液體在膜上移動，這種情況正常嗎？     A:這是標本在試劑上層析的正?，F(xiàn)象，只要判讀結(jié)果時，背景清晰就可以了。