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文檔簡介

1、2021/6/161利用16S rDNA鑒定細菌的種屬1.什么是 16S rDNA？ 16SrRNA為原核生物核糖體RNA的一個亞基，16SrDNA就是編碼該亞基的基因。 原核生物的rRNA含有3種類型：23S、16S、5S rRNA，它們分別含有2900、1540和120個核苷酸。2.用16S rDNA進行細菌鑒定的原因 16S rDNA在原核生物中普遍存在。 16 S rDNA的相對分子量大小適中，約1500 bp，便于序列分析。 在16S rRNA分子中， 既含有高度保守的序列區(qū)域，又有中度保守和高度變化的序列區(qū)域，因而它適用于進化距離不同的各類生物親緣關(guān)系的研究。 bp=base pa

2、ir 圖16SrDNA基因組成（灰色為保守區(qū)，綠色為可變區(qū)）16S rDNA基因全長1542 bp，由9個可變區(qū)和10個保守區(qū)組成。其中保守區(qū)反映了生物物種間的親緣關(guān)系，而可變區(qū)則表明物種間的差異，且變異程度與細菌的系統(tǒng)發(fā)育密切相關(guān)。DNA的提取 挑取單菌落,然后置于裝有100 LPrepMan Ultra的離心管中,渦旋震蕩混勻30s左右，然后100水浴10min 后，以離心機最大轉(zhuǎn)速離心3min，取10L上清液與490L ddH2O（即稀釋50 倍），混勻作為下步PCR 的模板DNA 。提取的DNA 于-20保存。檢測：核酸蛋白儀/瓊脂糖凝膠電泳1525R 5 AAG GAG GTG WT

3、C CAR CC 3PCR 反應(yīng)條件反應(yīng)條件試劑使用量（試劑使用量（ 20L體系）體系）模板模板DNA （10ng100ng） 2LTaq 酶酶(5U/L) 0.2 L10Taq Buffer(Mg2+) 2 LdNTPs(2.5mM) 1 L引物引物F(10 M) 0.5 L引物引物R(10 M) 0.5 LddH2O 13.8 L1min30s判斷16Sr DNA序列擴增是否成功:經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳在1500 bp附近出現(xiàn)條帶，說明16s rDNA已經(jīng)擴增成功。/2021/6/16142021/6/16152021/6/16162021/6/16172021/6/16182021/6/16192021/6/16212021/6/16222021/6/16232021/6/16242021/6/16252021/6/16262021/6/16272021/6/16

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