血細(xì)胞計數(shù)板相關(guān)知識及練習(xí)

1、血細(xì)胞計數(shù)板一、血細(xì)胞計數(shù)板的構(gòu)造血細(xì)胞計數(shù)板被用以對人體內(nèi)紅、白血細(xì)胞進(jìn)行顯微計數(shù)之用，也常用于計算一些細(xì)菌、真菌、酵母等微生物的數(shù)量，是一種常見的生物學(xué)工具。血細(xì)胞計數(shù)板是由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四條下凹的槽,構(gòu)成三個平臺。中間的平臺較寬,其中間又被一短橫槽隔為兩半,每半邊上面,刻有一個方格網(wǎng)。方格網(wǎng)上刻有9個大方格,其中只有中間的一個大方格為計數(shù)室,供微生物計數(shù)用。這一大方格的長和寬各為1mm,深度為0.1mm,其體積為0.1mm3。計數(shù)室通常有兩種規(guī)格.一種是大方格內(nèi)分為16中格,每一中格又分為25小格；另一種是大方格內(nèi)分為25中格,每一中格又分為16小格。但是不

2、管計數(shù)室是哪一種構(gòu)造，它們都有一個共同的特點(diǎn),即每一大方格都是由16×25=25×16=400個小方格組成,見圖：  血細(xì)胞計數(shù)板（25格×16格）二、血細(xì)胞計數(shù)板的使用以計數(shù)酵母菌為例1.使用 (1)用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)酵母菌懸液的酵母菌個數(shù)。 (2)樣品稀釋的目的是便于酵母菌懸液的計數(shù),以每小方格內(nèi)含有4-5個酵母細(xì)胞為宜,一般稀釋10倍即可。 (3)將血細(xì)胞計數(shù)板用擦鏡紙擦凈,在中央的計數(shù)室上加蓋專用的厚玻片。 (4)將稀釋后的酵母菌懸液,用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣,使菌液緩緩滲入,多余的菌液用吸水紙吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血

3、細(xì)胞計數(shù)室內(nèi)。 (5)計數(shù)時,如果使用16格×25格規(guī)格的計數(shù)室,要按對角線位,取左上,右上,左下,右下4個中格(即100個小格)的酵母菌數(shù).如果規(guī)格為25格×16格的計數(shù)板,除了取其4個對角方位外,還需再數(shù)中央的一個中格(即80個小方格)的酵母菌數(shù)。 (6)當(dāng)遇到位于大格線上的酵母菌,一般只計數(shù)大方格的上方和右方線上的酵母細(xì)胞(或只計數(shù)下方和左方線上的酵母細(xì)胞) 。 (7)對每個樣品計數(shù)三次,取其平均值,按下列公式計算每1ml菌液中所含的酵母菌個數(shù)。、計算公式： (1)16格×25格的血細(xì)胞計數(shù)板計算公式:酵母細(xì)胞數(shù)/ml=100小格內(nèi)酵母細(xì)胞個數(shù)/100

4、15;400×10四次方×稀釋倍數(shù) (2)25格x16格的血細(xì)胞計數(shù)板計算公式:酵母細(xì)胞數(shù)/ml=80小格內(nèi)酵母細(xì)胞個數(shù)/80×400×10四次方×稀釋倍數(shù).血細(xì)胞計數(shù)板的清潔：血細(xì)胞汁數(shù)板使用后,用自來水沖洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,或用95%的乙醇,無水乙醇,丙酮等有機(jī)溶劑脫水使其干燥.通過鏡檢觀察每小格內(nèi)是否殘留菌體或其他沉淀物.若不干凈,則必須重復(fù)清洗直到干凈為止.三、不足之處血細(xì)胞計數(shù)板在顯微鏡下直接進(jìn)行測定。它觀察在一定的容積中的微生物的個體數(shù)目，然后推算出含菌數(shù)，簡便快捷。但是在計數(shù)時包括死活細(xì)胞均被計算在內(nèi)，

5、還有微小雜物也被計算在內(nèi)。這樣得出結(jié)果往往偏高，因此適用于對形態(tài)個體較大的菌體或孢子進(jìn)行計數(shù)。四、相關(guān)練習(xí)：1在一定量的酵母菌培養(yǎng)液中放人活酵母菌若干，抽樣鏡檢，視野下如圖甲所示（圖中小點(diǎn)代表酵母菌）。將容器放在適宜溫度下恒溫培養(yǎng)5小時后，稀釋100倍，再抽樣鏡檢，視野下如乙圖所示。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷，以下敘述正確的是（ ）a培養(yǎng)5小時后，酵母菌種群密度增加200倍左右b探究酵母菌的種群數(shù)量變化可以用標(biāo)志重捕法c用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)酵母菌數(shù)量時只統(tǒng)計方格內(nèi)菌體d培養(yǎng)5小時后，酵母菌種群數(shù)量已經(jīng)達(dá)到k值解析：比較甲、乙兩圖中央兩格酵母菌數(shù)，乙是甲的兩倍，乙是稀釋100倍后的鏡檢結(jié)果，故培養(yǎng)5小時后，

6、酵母菌種群密度增加200倍左右。標(biāo)志重捕法適用于活動能力強(qiáng)、體型較大的動物，酵母菌的種群數(shù)量計數(shù)不能用標(biāo)志重捕法。用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)酵母菌數(shù)量時應(yīng)統(tǒng)計方格內(nèi)和壓在相鄰兩邊上的菌體。培養(yǎng)5小時后，酵母菌種群數(shù)量并不能確定是否已經(jīng)達(dá)到k值。答案：a2某研究性學(xué)習(xí)小組探究酵母菌種群在不同的培養(yǎng)液濃度和溫度條件下種群密度的動態(tài)變化，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)操作步驟如下：第一步：配制無菌馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液和活化酵母菌液。第二步：利用相同多套裝置，按下表步驟操作。第三步：用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)裝置中起始酵母菌數(shù)目，做好記錄。第四步：將各裝置放在其他條件相同且適宜的條件下培養(yǎng)第五步：連續(xù)7天，每天隨機(jī)抽時間取樣計數(shù)

7、，做好記錄?；卮鹣铝袉栴}：(1)改正實(shí)驗(yàn)操作步驟中的一處錯誤： 。(2)某同學(xué)第5天在使用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)時做法如下：振蕩搖勻試管，取1ml培養(yǎng)液并適當(dāng)稀釋（稀釋樣液的無菌水中加入了幾滴臺盼藍(lán)染液）。先將 放在計數(shù)室上，用吸管吸取稀釋后的培養(yǎng)液滴于其邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入，多余培養(yǎng)液 ，制作好臨時裝片。顯微鏡下觀察計數(shù)：在觀察計數(shù)時只記 （填“被”或“不被”）染成藍(lán)色的酵母菌。(3)如所使用的血細(xì)胞計數(shù)板有16個中方格，每1個中方格中有25個小方格，每1個大方格容積為01mm3(1 ml=1000mm3)。請推導(dǎo)出1毫升培養(yǎng)液中酵母菌細(xì)胞的計算公式：酵母細(xì)胞個數(shù)mi= 。解析：(1)實(shí)驗(yàn)中要注

8、意遵循單一變量和對照原則，該實(shí)驗(yàn)中要注意在每天同一時間取樣，否則由于時間不同而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。(2)計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格，另一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格。但無論是哪種規(guī)格的計數(shù)板，每一個大方格中的小方格數(shù)都是相同的，即16×25=400個小方格。每一個大方格邊長為1mm，則每一大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后，載玻片與蓋玻片之間的高度為01 mm，所以計數(shù)室的容積為01mm3。在計數(shù)時，通常數(shù)五個中方格的總菌數(shù)，然后求得每個中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一個大方

9、格中的總菌數(shù)，然后再換算成1ml菌液中的總菌數(shù)。(3)計數(shù)時，如果使用16格×25格規(guī)格的計數(shù)室，要按對角線位，取左上、右上、左下、右下4個中格（即100個小格）的酵母菌數(shù)。如果規(guī)格為25格×16格的計數(shù)板，除了取其4個對角方位外，還需再數(shù)中央的一個中格（即80個小方格）的酵母菌數(shù)。對每個樣品計數(shù)三次，取其平均值，按下列公式計算每1毫升菌液中所含的酵母菌個數(shù)。16格×25格的血細(xì)胞計數(shù)板計算公式：酵母細(xì)胞數(shù)/ml=（100個小格內(nèi)酵母細(xì)胞個數(shù)/100）×400×104×稀釋倍數(shù)。25格×16格的血細(xì)胞計數(shù)板計算公式：酵母細(xì)胞

10、數(shù)/ml=(80小格內(nèi)酵母細(xì)胞個數(shù)80)×400×1 04×稀釋倍數(shù)。答案：(1)第五步中應(yīng)每天同一時間（定時）取樣(2)蓋玻片 用濾紙（吸水紙）吸去 不被(3)平均每個小方格的酵母菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)3藍(lán)藻、綠藻和硅藻是湖泊中常見藻類。某課題組研究了不同ph對3種藻類的生長及光合作用的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1、圖2。請回答下列問題： (1)根據(jù)圖1和圖2分析：3種藻類中ph適應(yīng)范圍最廣的是 ；在ph=80時，3種藻類中利用c02能力最強(qiáng)的是 。(2)在培養(yǎng)液中需加入緩沖劑以穩(wěn)定ph，其原因是 。(3)在實(shí)驗(yàn)中需每天定時對藻細(xì)胞

11、進(jìn)行取樣計數(shù)，請回答以下問題：取出的樣液中需立即加入固定液，其目的是 。在計數(shù)前通常需要將樣液稀釋，這是因?yàn)?。將樣液稀釋100倍，采用血細(xì)胞計數(shù)板（規(guī)格為1 mm x l mm x 0.1 mm)計數(shù)，觀察到的計數(shù)室中細(xì)胞分布見圖3，則培養(yǎng)液中藻細(xì)胞的密度是 個/ml。答案 (1)綠藻 藍(lán)藻 (2)藻類生長代謝會改變培養(yǎng)液ph (3)維持藻細(xì)胞數(shù)量不變 藻細(xì)胞密度過大1×l08解析 (1)比較圖1和圖2中的三條曲線，代表綠藻的曲線最平緩，變化幅度最小，說明ph對綠藻的生長和光合作用速的影響最小，綠藻對ph適應(yīng)范圍最廣。比較圖2的三條曲線，ph為8.0時，藍(lán)藻的光合速率為4.0 um

12、olmg-1mln-1，為三種藻類中最大，c02是光合作用的原料之一，因此其吸收利用c02的能力也就最強(qiáng)。(2)由于三種藻類呼吸作用過程中會產(chǎn)生c02，光合作用過程中需要吸收c02，而c02會導(dǎo)致培養(yǎng)液的ph改變，從而影響三種藻類的生長速率和光合速率，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，實(shí)驗(yàn)前需要在培養(yǎng)液中加入ph緩沖液以維持反應(yīng)溶液的ph穩(wěn)定。(3)由于上述藻類繁殖周期短，在取樣后到計數(shù)這段時間內(nèi)有些個體很可能完成了增殖，從而影響計數(shù)結(jié)果，所以取樣后應(yīng)立即進(jìn)行殺死固定。利用血細(xì)胞計數(shù)板進(jìn)行計數(shù)時，每個中格中的細(xì)胞數(shù)目不能太多，一般不超過5個，否則細(xì)胞可能有相互遮蓋現(xiàn)象。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目過多，應(yīng)對培養(yǎng)液進(jìn)行以

13、1 0倍為單位的稀釋。從圖3知道，血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)室體積為1 mm xl mm x0.1 mm =0.l(mm)3 = 10 4 ml。每個計數(shù)室包括25個中格，每個中格包括16個小格。這種規(guī)格的計數(shù)板在計數(shù)時，除了取其4個對角處的中格（左上、右上、左下、右下）外，還需再取中央的一個中格，即80個小方格。如果使用計數(shù)室為16中格×25小格規(guī)格的計數(shù)板，計數(shù)時只要取4個對角處的中格（即100個小格）。當(dāng)遇到位于中格線上的細(xì)胞，一般只計數(shù)中格的上方和左方線上以及左角處的細(xì)胞，也可以只計數(shù)中格的下方和右方線上以及右角處的細(xì)胞，只要滿足兩線夾一角就行了。對每個樣品應(yīng)計數(shù)三次，取其平均值。計數(shù)結(jié)果為：左上中格為5個（左線3+內(nèi)部2），右上中格為4個（全部在內(nèi)部），中央中格為3個(左線1+內(nèi)部2)，左下中格為4個（