骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)

1、l o g o骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)v 微核試驗(yàn)是用于染色體損傷和干擾細(xì)胞有絲分裂的化學(xué)毒微核試驗(yàn)是用于染色體損傷和干擾細(xì)胞有絲分裂的化學(xué)毒物的快速檢測(cè)方法。物的快速檢測(cè)方法。v 微核微核(micronucleus,mcn)是指細(xì)胞中主核之外的顆粒，染是指細(xì)胞中主核之外的顆粒，染色與細(xì)胞核一致，相當(dāng)于細(xì)胞直徑的色與細(xì)胞核一致，相當(dāng)于細(xì)胞直徑的1/20-1/5，呈圓形或，呈圓形或杏仁狀。是細(xì)胞內(nèi)染色體斷裂或紡錘絲受影響而在細(xì)胞有杏仁狀。是細(xì)胞內(nèi)染色體斷裂或紡錘絲受影響而在細(xì)胞有絲分裂時(shí)滯留在細(xì)胞核外的遺傳物質(zhì)。絲分裂時(shí)滯留在細(xì)胞核外的遺傳物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理機(jī)理：機(jī)理：1 1 有絲分

2、裂毒物的作用使個(gè)別染色體或帶著絲點(diǎn)的染色體有絲分裂毒物的作用使個(gè)別染色體或帶著絲點(diǎn)的染色體環(huán)和斷片在細(xì)胞分裂后期被滯留在細(xì)胞質(zhì)中環(huán)和斷片在細(xì)胞分裂后期被滯留在細(xì)胞質(zhì)中2 2 斷片或無著絲點(diǎn)染色體在細(xì)胞分裂后期不能定向移動(dòng)，斷片或無著絲點(diǎn)染色體在細(xì)胞分裂后期不能定向移動(dòng)，從而遺留在細(xì)胞質(zhì)中從而遺留在細(xì)胞質(zhì)中結(jié)論：結(jié)論： 微核試驗(yàn)?zāi)軝z測(cè)化學(xué)或其他物質(zhì)因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的微核試驗(yàn)?zāi)軝z測(cè)化學(xué)或其他物質(zhì)因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的染色體染色體完整性改變完整性改變和和染色體分離改變?nèi)旧w分離改變這兩種遺傳學(xué)終點(diǎn)這兩種遺傳學(xué)終點(diǎn)實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理無核細(xì)胞無核細(xì)胞紅細(xì)胞紅細(xì)胞有核細(xì)胞中有核細(xì)胞中微核難與正常核分葉微核難與正常核分葉

3、及核突出物區(qū)別及核突出物區(qū)別微微核核實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)紅細(xì)胞的分化成熟過程紅細(xì)胞的分化成熟過程小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的形成小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的形成8環(huán)磷酰胺（環(huán)磷酰胺（ctxctx）v 最常用的烷化劑類抗腫瘤藥。最常用的烷化劑類抗腫瘤藥。v 在體外無抗腫瘤活性，進(jìn)入體內(nèi)經(jīng)轉(zhuǎn)化、分解，生成酰在體外無抗腫瘤活性，進(jìn)入體內(nèi)經(jīng)轉(zhuǎn)化、分解，生成酰胺氮芥對(duì)腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒作用。胺氮芥對(duì)腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒作用。v 副作用明顯，有惡心、食欲減退、脫發(fā)、白細(xì)胞減少、副作用明顯，有惡心、食欲減退、脫發(fā)、白細(xì)胞減少、中毒性膀胱炎、肝功能損傷等。中毒性膀胱炎、肝功能損傷等。v 具有顯著的遺傳、生殖毒性：停經(jīng)或精子缺乏，妊

4、娠初具有顯著的遺傳、生殖毒性：停經(jīng)或精子缺乏，妊娠初期時(shí)給予可致畸胎。期時(shí)給予可致畸胎。 v 用藥后用藥后24-3024-30小時(shí)，骨髓中微核形成達(dá)峰。小時(shí)，骨髓中微核形成達(dá)峰。9結(jié)果結(jié)果示小鼠骨髓嗜多染示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中一個(gè)微核紅細(xì)胞中一個(gè)微核示小鼠骨髓正常示小鼠骨髓正常嗜多染紅細(xì)胞嗜多染紅細(xì)胞10示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中兩個(gè)微核示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中兩個(gè)微核11示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中多個(gè)微核示小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞中多個(gè)微核giemsagiemsa染色染色v pcepce胞質(zhì)內(nèi)含胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，染有核糖體，染色呈灰藍(lán)色；色呈灰藍(lán)色；mcnmcn多數(shù)為圓多數(shù)為圓形，嗜色性與形，嗜色

5、性與核質(zhì)一致，呈核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍(lán)紫紫紅色或藍(lán)紫色色v ncence的核糖體的核糖體已消失，被染已消失，被染成淡桔紅色。成淡桔紅色。nce pce & mcn實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?. 用化療藥（環(huán)磷酰胺）制備突變模型用化療藥（環(huán)磷酰胺）制備突變模型2. 觀察小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞（觀察小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞（pce）微）微核核v【animal】 小鼠是微核試驗(yàn)的常規(guī)動(dòng)物，通常用小鼠是微核試驗(yàn)的常規(guī)動(dòng)物，通常用7 71212周齡，周齡，體重體重181820g20g的小鼠。的小鼠。v【reagents 】 小牛血清小牛血清 giemsa染液染液 環(huán)磷酰胺環(huán)磷酰胺實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑實(shí)驗(yàn)分組和染

6、毒方法實(shí)驗(yàn)分組和染毒方法環(huán)磷酰胺環(huán)磷酰胺40mg/kg 模型組模型組等體積溶劑等體積溶劑對(duì)照組對(duì)照組染毒方法（染毒方法（30h兩次給藥法）：兩次給受兩次給藥法）：兩次給受試物間隔試物間隔24h，第二次給藥后，第二次給藥后6h取材取材處死處死：小鼠頸椎脫臼處死；：小鼠頸椎脫臼處死；取股骨取股骨：防止出血；：防止出血；取骨髓取骨髓：小牛血清：小牛血清1滴滴推片推片：30度角；度角；晾干晾干：一定要干；：一定要干；固定固定：甲醇固定：甲醇固定10min, 需要晾干；需要晾干；染色染色：gimesa染液染色（染液染色（1015min）沖洗：沖洗：蒸餾水沖洗，晾干蒸餾水沖洗，晾干閱片閱片: : 觀察微核

7、。觀察微核。 推推 片片 方方 法法觀察與計(jì)數(shù)：低倍鏡下選擇分布均勻，染色較好的區(qū)域觀察與計(jì)數(shù)：低倍鏡下選擇分布均勻，染色較好的區(qū)域 油鏡下觀察計(jì)數(shù)油鏡下觀察計(jì)數(shù)f 多染紅細(xì)胞（多染紅細(xì)胞（pcepce）呈灰藍(lán)色，正染紅細(xì)胞（）呈灰藍(lán)色，正染紅細(xì)胞（ncence）呈）呈橘黃色。典型的微核多為單個(gè)、圓形、邊緣光滑整齊，橘黃色。典型的微核多為單個(gè)、圓形、邊緣光滑整齊，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍(lán)紫色嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍(lán)紫色 。f 計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)10001000個(gè)個(gè)pcepce中含微核的中含微核的pcepce數(shù)，并且計(jì)數(shù)數(shù)，并且計(jì)數(shù)200200個(gè)細(xì)個(gè)細(xì)胞中胞中pcepce與與ncence的比值。的比值。微核率（微核率（）= =含微核含微核pcepce細(xì)胞數(shù)細(xì)胞數(shù)pcepce細(xì)胞總數(shù)細(xì)胞總數(shù)1000實(shí)驗(yàn)方法和步驟實(shí)驗(yàn)方法和步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果組別組別動(dòng)物數(shù)動(dòng)物數(shù)受檢受檢pcepce總數(shù)總數(shù)含微核含微核pcepce數(shù)數(shù)微核率微核率陰性對(duì)照組陰性對(duì)照組模型組模型組結(jié)果分析與評(píng)價(jià)v本試驗(yàn)中只計(jì)數(shù)本試驗(yàn)中只計(jì)數(shù)pcepce中微核，微核率以千分率表示中微核，微核率以千分率表示. .vpce/ncepce/nce為評(píng)價(jià)細(xì)胞毒性的指標(biāo)：為評(píng)價(jià)細(xì)胞毒性的指標(biāo)：f正常正常pce/ncepce/nce比值約為比值約為l(l(正常范圍為正常范圍為0.60.61.2)1.2)；f如如pce/nc