瓊脂糖凝膠電泳課件

1、瓊脂糖凝膠電泳課件瓊瓊 脂脂 糖糖 凝凝 膠膠 電電 泳泳瓊脂糖凝膠電泳課件一一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳分離學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳分離DNA的原理和方法的原理和方法 檢測(cè)水稻總檢測(cè)水稻總DNA的純度與分子量的純度與分子量 檢測(cè)檢測(cè)PCR的結(jié)果的結(jié)果瓊脂糖凝膠電泳課件二二 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 電泳是分離和純化電泳是分離和純化DNA片段的最常用技術(shù)片段的最常用技術(shù) 瓊脂糖是一種天然聚合長(zhǎng)鏈狀分子，沸水中溶解，瓊脂糖是一種天然聚合長(zhǎng)鏈狀分子，沸水中溶解，45 開(kāi)始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小開(kāi)始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度決定于瓊脂糖的濃度 DNA分子在堿性環(huán)境

2、中帶負(fù)電荷，在外加電場(chǎng)作用分子在堿性環(huán)境中帶負(fù)電荷，在外加電場(chǎng)作用下向正極泳動(dòng)下向正極泳動(dòng)瓊脂糖凝膠電泳課件二二 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)，有電荷效應(yīng)與分分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)，有電荷效應(yīng)與分子篩效應(yīng)。不同的子篩效應(yīng)。不同的DNA，分子量大小及構(gòu)型不同，分子量大小及構(gòu)型不同，電泳時(shí)的泳動(dòng)率就不同，從而分出不同的區(qū)帶電泳時(shí)的泳動(dòng)率就不同，從而分出不同的區(qū)帶 瓊脂糖凝膠電泳法分離瓊脂糖凝膠電泳法分離DNA，是利用分子篩效應(yīng)，是利用分子篩效應(yīng)，遷移速度與分子量的對(duì)數(shù)值成反比關(guān)系遷移速度與分子量的對(duì)數(shù)值成反比關(guān)系 可依據(jù)可依據(jù)DNA分子的大小使其分離分子的大小使其分離瓊脂糖凝

3、膠電泳課件DNA分子在電泳條件下的遷移演示分子在電泳條件下的遷移演示.exe瓊脂糖凝膠電泳課件 Goodview可與可與DNA分子形成復(fù)合物，發(fā)射的熒分子形成復(fù)合物，發(fā)射的熒光強(qiáng)度較游離的光強(qiáng)度較游離的Goodview強(qiáng)度大強(qiáng)度大10倍以上，且倍以上，且熒光強(qiáng)度與熒光強(qiáng)度與DAN含量成正比含量成正比 示蹤染料和分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物示蹤染料和分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物二二 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理瓊脂糖凝膠電泳課件M 1 2 3 4PCR產(chǎn)物的產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳課件三三 實(shí)驗(yàn)材料、用具及試劑實(shí)驗(yàn)材料、用具及試劑 提取的水稻總提取的水稻總DNA和和PCR產(chǎn)物產(chǎn)物 電泳儀，電泳槽，電子水平，

4、移液器，槍頭，三角電泳儀，電泳槽，電子水平，移液器，槍頭，三角瓶、點(diǎn)樣板，微波爐等瓶、點(diǎn)樣板，微波爐等 瓊脂糖，瓊脂糖，TAE電泳緩沖液，電泳緩沖液， Goodview，載樣緩沖，載樣緩沖液（液（Loading buffer）瓊脂糖凝膠電泳課件四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1 制膠制膠： 100ml(0.5TAE)+0.8g瓊脂糖瓊脂糖 三角瓶三角瓶(1/3) 煮膠煮膠 溶解，冷卻至溶解，冷卻至60(不燙手不燙手)，加，加Goodview，倒板，倒板(4-6mm)，室溫下充分凝固，豎，室溫下充分凝固，豎直拔下梳子直拔下梳子 瓊脂糖凝膠電泳課件2 點(diǎn)樣點(diǎn)樣： 5l水稻總水稻總DNA+12 loadin

5、g buffer=7l PCR產(chǎn)物產(chǎn)物+3l loading buffer，混勻，吸取，混勻，吸取10l 10l Mark DNA( DNA-Hind )3 電泳電泳：電壓電壓3-5V/cm，約，約80-90V，注意電極方向，注意電極方向4 觀(guān)察觀(guān)察：紫外透射分析儀下觀(guān)察，時(shí)間不要太久紫外透射分析儀下觀(guān)察，時(shí)間不要太久四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟瓊脂糖凝膠電泳課件五五 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1 倒膠時(shí)把握好膠的溫度，不要高于倒膠時(shí)把握好膠的溫度，不要高于60 ，否則溫度，否則溫度太高會(huì)使制板變形太高會(huì)使制板變形2 膠一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要豎直向上，膠一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要豎直向上，不要弄壞點(diǎn)樣孔不要弄壞點(diǎn)樣孔3 點(diǎn)樣時(shí)槍頭下伸，點(diǎn)樣孔內(nèi)不能有氣泡，緩沖液不點(diǎn)樣時(shí)槍頭下伸，點(diǎn)樣孔內(nèi)不能有氣泡，緩沖液不要太多要太多4 Goodview有毒，切勿用手接觸，更不要污染環(huán)境，有毒，切勿用