醫(yī)學(xué)標(biāo)書(shū)例文

1、河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目申 請(qǐng) 書(shū)姓 名： Luo Binjie 項(xiàng)目名稱： miRNA與膀胱癌診斷，臨床治療的相關(guān)研究 單 位： 鄭州大學(xué) 聯(lián)系電話： 填 報(bào) 說(shuō) 明 請(qǐng)根據(jù)自己的專(zhuān)業(yè)及研究方向，針對(duì)某具體臨床問(wèn)題，結(jié)合所學(xué)習(xí)臨床科研方法的一種或幾種寫(xiě)出一份科研設(shè)計(jì)。完成后，文件以個(gè)人姓名命名，發(fā)至：?？己顺煽?jī)依設(shè)計(jì)書(shū)優(yōu)略評(píng)定。截至日期2013年11月8日。一、項(xiàng)目的立項(xiàng)依據(jù)和意義（說(shuō)明國(guó)內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)發(fā)展水平和趨勢(shì)等）全國(guó)腫瘤登記地區(qū)膀胱癌發(fā)病率為7.49/10萬(wàn)，世界人口標(biāo)化發(fā)病率（世標(biāo)率）為4.53/10萬(wàn)，膀胱癌居中國(guó)男性泌尿生殖系惡性腫瘤發(fā)病率第1位, 居中國(guó)惡性腫瘤發(fā)病率第8位，

2、居中國(guó)男性惡性腫瘤發(fā)病率第6位 ，全國(guó)腫瘤登記人口膀胱癌發(fā)病率,呈現(xiàn)逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)1。孫思邈千金要方卷一診候：“古之善為醫(yī)者，上醫(yī)醫(yī)未病之病，中醫(yī)醫(yī)欲病之病，下醫(yī)醫(yī)已病之病。在醫(yī)學(xué)如此高速發(fā)展的今天，我們顯然不會(huì)滿足大多數(shù)“發(fā)現(xiàn)無(wú)痛性肉眼血尿-進(jìn)行膀胱鏡檢-再行手術(shù)切除膀胱灌注”的這一套最常見(jiàn)的膀胱癌診治流程。介入科韓新巍教授說(shuō)過(guò)未來(lái)醫(yī)學(xué)是微創(chuàng)和介入醫(yī)學(xué)的為主導(dǎo)的，內(nèi)外科為輔助的醫(yī)學(xué)。顯然對(duì)miRNA的探求能對(duì)膀胱癌的診治帶來(lái)前所未有的契機(jī)。微小核糖核酸（microRNA ，miRNA）在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。miRNA 在膀胱癌的演進(jìn)過(guò)程中發(fā)揮著類(lèi)似于癌基因或抑癌基因的作用。目前研究

3、表明，對(duì)miRNA 的調(diào)控可為臨床膀胱癌的診治提供一個(gè)新的靶點(diǎn)，提高膀胱癌患者的遠(yuǎn)期生存率和生活質(zhì)量2。1：關(guān)于miRNA: miRNAs 是一類(lèi)大小為19個(gè)25個(gè)堿基的單小分子RNA。在細(xì)胞核內(nèi)，它本身不編碼蛋白，但是可調(diào)節(jié)其他基因的翻譯表達(dá)。miRNA 初級(jí)產(chǎn)物在RNA 聚合酶 作用下合成miRNA 轉(zhuǎn)錄前體（PrimiRNA） ，然后經(jīng)RNA 聚合酶 （Drosha 酶）和DGCR 蛋白加工后，形成發(fā)卡環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA 前體（Precursor miRNA ，premiRNA），最終被轉(zhuǎn)運(yùn)體Exportin 轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)，由核酸酶Dicer 剪切形成RNA 誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RNAin

4、duced silencing complex ，RISC）。miRNA 通過(guò)與靶mRNA 特異堿基配對(duì)而引起靶miRNA 的降解或翻譯抑制，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)，從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡 。細(xì)胞可分泌含miRNA 的復(fù)合物進(jìn)入體液，如尿液、血液、唾液、母乳 。一種miRNA可靶向一個(gè)或者多個(gè)mRNA ，多種miRNA 也可同時(shí)靶向一個(gè)mRNA。因此，異常表達(dá)的miRNA 不僅能致癌而且有腫瘤抑制的功能。2：miRNA與膀胱癌的關(guān)系的研究趨勢(shì)及范圍表1：部分膀胱癌相關(guān)miRNAs 的差異表達(dá)（數(shù)據(jù)來(lái)源于miRNAs 在膀胱癌診治中的研究進(jìn)展）miRNA miRNA 表達(dá)變化 推測(cè)靶基因

5、 miRNA-a 上調(diào) PTEN miRNA- 上調(diào) miRNAa 下調(diào) FOXA miRNA 下調(diào) IncRNA UCA miRNA 下調(diào) FOXM miRNA 下調(diào) PAK miRNA 下調(diào) miRNA 下調(diào) ADAM miRNAb 下調(diào) SIRT，MALAT 表2：miRNA表達(dá)水平變化與膀胱尿路上皮癌的關(guān)系3表3：miRNA家族的一些機(jī)制細(xì)分3.國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究成果 I：miRNA與膀胱癌早期診斷的一些研究發(fā)現(xiàn)Tolle 等在血液中和尿液中不同表達(dá)的miRNAs 來(lái)發(fā)現(xiàn)膀胱癌，采用數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)源于the Sanger database v 的基因芯片分析，在血液中，miRNAbp 、miRN

6、Ap 、miRNAp 在浸潤(rùn)性膀胱癌中高表達(dá)，而且miRNAbp 特異度為 ，敏感度為 。在尿液中miRNA 、miRNAbp 在浸潤(rùn)性膀胱癌中高表達(dá)，而且miRNAbp 特異度為 ，敏感度為 。由此推斷，根據(jù)血液、尿液中一些特異的miRNAs 來(lái)診斷浸潤(rùn)性膀胱癌成為一種可能4。Zhang等檢測(cè) 例膀胱癌患者手術(shù)標(biāo)本的癌組織和鄰近正常組織miRNA 表達(dá)水平，分析它們與臨床病理參數(shù)和預(yù)后評(píng)估相關(guān)性。結(jié)果顯示腫瘤組織miRNA 的表達(dá)水平顯著高于相應(yīng)的非癌組織（ P ） 。KaplanMeier 分析表明，具有較高miR表達(dá)水平的患者與低表達(dá)水平患者相比較， 年生存率分別為 和 。其中包括miR

7、NA 過(guò)表達(dá)，腫瘤病理分級(jí)，腫瘤分期和腫瘤數(shù)目的多變量Cox 回歸分析，miRNA 的過(guò)表達(dá)與較差存活率獨(dú)立相關(guān)（HR ， CI ： ，P ） 。miRNA 的過(guò)表達(dá)提示膀胱癌預(yù)后不良，并且可以被用來(lái)作為警示預(yù)后不良的生物標(biāo)志物5。Feng 等利用Taqman 探針莖 環(huán)法PCR 精確測(cè)量 對(duì)患者的膀胱癌組織、相鄰的非腫瘤組織、膀胱癌患者和正常人對(duì)照的血漿miRNAa 水平。用miRNAa 模擬和抑制劑轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞。結(jié)果發(fā)現(xiàn)miRNAa 在膀胱癌組織中顯著上調(diào)，而且miRNAa 的表達(dá)水平與癌細(xì)胞的侵襲能力相對(duì)應(yīng)。同時(shí)，獲得或丟失miRNAa 的功能性試驗(yàn)印證了它可能在膀胱癌的發(fā)展中起癌基因

8、作用。此外，膀胱癌患者的血漿中檢出的miRNAa 支持發(fā)展為膀胱癌的潛在診斷標(biāo)記物。另一組研究者利用互補(bǔ)的反義核酸轉(zhuǎn)染到原先上調(diào)的miRNAs，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)明顯受到抑制，并檢測(cè)出腫瘤細(xì)胞增殖明顯減緩6。 Zhu 等通過(guò)小干擾RNA（siRNA）和miRNA 介導(dǎo)的IGFIR 的敲除實(shí)驗(yàn)揭示了miRNA 促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)主要通過(guò)影響的IGFIR 信號(hào)傳導(dǎo)，以抑制IGFIR 的表達(dá)，抑制癌細(xì)胞增殖和遷移，起到抑癌基因的作用。另一組研究者發(fā)現(xiàn)膀胱癌中miRNAa 、miRNA 、miRNA 、miRNA 均體現(xiàn)為抑癌基因的作用。他們采用轉(zhuǎn)染的方式上調(diào)其表達(dá)，發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞增殖、分化能力明顯受

9、抑制，而且侵襲、遷移能力也減弱，印證了它抑癌基因作用的推測(cè)7.（檢測(cè)出來(lái)了說(shuō)明對(duì)于膀胱癌患者是好的） II:miRNA與膀胱癌的治療 Li 等研究發(fā)現(xiàn)，以順鉑為基礎(chǔ)的化療誘導(dǎo)了miRNAa 的啟動(dòng)子去甲基化，增加miRNAa 的表達(dá)，反過(guò)來(lái)增強(qiáng)了肌層侵入性膀胱癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性，降低了癌細(xì)胞侵襲性和增殖能力8。Kozinn 等根據(jù)miRNAs 的變化來(lái)預(yù)測(cè)是否對(duì)吉西他濱有抵抗性，研究結(jié)果提示miRNA 、miRNA 、miRNAleti 、miRNAletb 通過(guò)調(diào)節(jié)黏蛋白 ，使吉西他濱產(chǎn)生耐藥性。由此設(shè)想，通過(guò)調(diào)控的特定miRNAs 的表達(dá)或者影響其上游基因信息傳遞通路，可以增強(qiáng)膀胱癌化療

10、的敏感性以及減少其耐藥性9。把表達(dá)p 基因的腺病毒載體和靶向于CDKNA基因的人工miRNA 轉(zhuǎn)染進(jìn)入癌細(xì)胞可增加癌細(xì)胞對(duì)阿霉素的化療敏感性；miRNA 的表達(dá)增加可通過(guò)靶向DNA 修復(fù)酶位點(diǎn)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞在輻射中的敏感性10.為解決臨床膀胱癌患者對(duì)順鉑耐藥的問(wèn)題，Drayton等研究發(fā)現(xiàn)SLCA 基因的表達(dá)與miRNAa的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，當(dāng)miRNAa 高表達(dá)或者通過(guò)siRNA、柳氮磺胺吡啶降低SLCA 基因的活性時(shí)，耐藥的膀胱癌細(xì)胞株的致敏性得以恢復(fù)，由此可推測(cè)miRNAa 可作為治療膀胱癌患者對(duì)順鉑耐藥的一條途徑11。4：選取自己感興趣的mi-RNA家族成員進(jìn)行研究相關(guān)研究表明mi-RNA9

11、9a作為一個(gè)腫瘤抑制因子，在膀胱癌中水平降低，有降低尿路上皮癌侵襲性可能。其他相關(guān)研究：mi-RNA在人類(lèi)可以通過(guò)靶基因mTOR促進(jìn)食管鱗狀細(xì)胞的凋亡12 ，mi-RNA的低表達(dá)也能促進(jìn)口腔鱗癌細(xì)胞的增殖13。那么它的高表達(dá)是否意味著膀胱癌患者癌細(xì)胞同樣受到抑制，提示著患者預(yù)后較好？或者依據(jù)miRNAs 表達(dá)的時(shí)序性和組織特異性特征，可以探索膀胱癌各個(gè)發(fā)展階段中的特定miRNA 表達(dá)譜，用于判斷膀胱癌惡性程度和臨床分期？或者是提前通過(guò)測(cè)量其相關(guān)調(diào)控基因產(chǎn)物預(yù)測(cè)患者患膀胱腫瘤風(fēng)險(xiǎn)？或者是了解它的表達(dá)是否能增強(qiáng)治療膀胱腫瘤藥物的敏感性及耐藥性等？我選取一個(gè)比較小的研究點(diǎn)：研究可以反其道而行之，根據(jù)

12、臨床上已經(jīng)確診的膀胱癌的標(biāo)本或者細(xì)胞株來(lái)測(cè)量mi-RNA的含量，同時(shí)測(cè)量一定標(biāo)本正常人群mi-RNA的含量，來(lái)推測(cè)膀胱尿路上皮癌各個(gè)發(fā)展階段中的特定miRNA 表達(dá)譜是否與膀胱癌惡性程度和臨床分期存在著某些統(tǒng)計(jì)學(xué)上的聯(lián)系。1：韓蘇軍, 張思維，陳萬(wàn)青，李長(zhǎng)嶺。中國(guó)膀胱癌發(fā)病現(xiàn)狀及流行趨勢(shì)分析。中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所，泌尿外科。2：梁敏，王海峰，王劍松。miRNAs 在膀胱癌診治中的研究進(jìn)展。醫(yī)學(xué)與哲學(xué)2015 年6月第36卷第6B 期總第527期。3孫陽(yáng)綜述,郭劍明審校.miRNA調(diào)控與膀胱癌的關(guān)系研究進(jìn)展。International Journal of Urology and N

13、ephmlogy。Jan 201 1V0131 NOI4Tolle A ，Jung M ，Rabenhorst S ，et al Identification of microRNAs in blood and urine as tumour markers for the detection of urinary bladder cancerJ Oncol Rep ，2013 ，30（4） ：1949 1956 5Zhang D Q ，Zhou C K ，Jiang X W ，et al Increased expression of miRNA222 is associated with

14、poor prognosis in bladder cancer J World J Surg Oncol ，2014 ，12 ：241 6張明，魏巍，劉祿成，等反義微小RNA21對(duì)人膀胱癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響J 吉林大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2010 ，36（3）：450 452 7張超，姚志勇，朱鳴陽(yáng)，等microRNA34a 通過(guò)Notch 對(duì)膀胱腫瘤細(xì)胞株T24 增殖的影響J解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2012 ，37（5） ：426 430 8Li H ，Yu G ，Shi R ，et al Cisplatininduced epigenetic activation of miR34 a sensit

15、izes bladder cancer cells to chemotherapy J Mol Cancer ，2014 ，13（1） ：8 9Kozinn S I ，Harty N J ，Delong J M ，et al MicroRNA Profile to Predict Gemictabine Resistance in Bladder Carcinoma Cell Line J Genes Cancer ，2013 ，4（1 /2） ：61 -69 10Josson S ，Sung S Y ，Lao K ，et al Radiation modulation of microRNA

16、 in prostate cancer cell linesJ Prostate ，2008 ，68（15） ：1599 1606 11Drayton R M ，Dudziec E ，Peter S ，et al Reduced Expression of miRNA27 a Modulates Cisplatin Resistance in Bladder Cancer by Targeting the CystineGlutamate Exchanger SLCAJ Clin Cancer Res ，2014 ，20（7） ：1900 200012Sun J, Chen Z, Tan X,

17、 Zhou F, Tan F, Gao Y, Sun N, Xu X, Shao K, He J:MicroRNA-99a/100 promotes apoptosis by targeting mTOR in human esophageal squamous cell carcinoma. Med Oncol 2013, 30:411.13Yan B, Fu Q, Lai L, Tao X, Fei Y, Shen J, Chen Z, Wang Q: Downregulation of microRNA 99a in oral squamous cell carcinomas contr

18、ibutes to the growth and survival of oral cancer cells. Mol Med Rep 2012, 6:675681.二、項(xiàng)目創(chuàng)新點(diǎn)、主要研究開(kāi)發(fā)內(nèi)容及目標(biāo)（實(shí)施方案、技術(shù)關(guān)鍵、技術(shù)路線和技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)等）實(shí)施方案：通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)量膀胱癌標(biāo)本不同臨床分期，病理分期mi-RNA含量，同時(shí)測(cè)量一定標(biāo)本正常人群mi-RNA的含量，來(lái)推測(cè)膀胱尿路上皮癌各個(gè)發(fā)展階段中的特定miRNA 表達(dá)譜是否與膀胱癌惡性程度和臨床分期存在著某些統(tǒng)計(jì)學(xué)上的聯(lián)系。1：技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)哺乳動(dòng)物血清中循環(huán)核酸表達(dá)水平穩(wěn)定，檢測(cè)的可重復(fù)性良好，具有作為腫瘤標(biāo)志物的潛力1。尿液、糞便甚至毛發(fā)

19、，也是臨床上易于獲得的檢測(cè)樣本。如果能找到相應(yīng)的miRNAs 表達(dá)譜，又具有較高的敏感性和特異性，來(lái)作為膀胱癌診斷的生物標(biāo)記物，替代目前的有創(chuàng)性檢查，將是巨大的突破。最終我們希望通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)：可以依據(jù)miRNAs 表達(dá)的時(shí)序性和組織特異性特征，探索膀胱癌各個(gè)發(fā)展階段中的特定miRNA 表達(dá)譜，用于判斷膀胱癌惡性程度和臨床分期，從而為診治提供依據(jù)。2：技術(shù)路線 i：選取實(shí)驗(yàn)對(duì)象：選取我院住院患者中40例（便于統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)）正常膀胱粘膜上皮組織（可取材于成人尿道下裂手術(shù)），選取50例已經(jīng)確診為膀胱癌患者的手術(shù)標(biāo)本（可非浸潤(rùn)性I,II,III級(jí)各10例，浸潤(rùn)性標(biāo)本20例，需由病理科配合完成）。溝通

20、患者簽署研究知情同意書(shū)，研究方案交醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。ii：組織總RNA的提取及質(zhì)量檢測(cè)：從上述組織標(biāo)本中取50 100 mg組織塊以提取總RNA，組織塊在液氮中研磨成粉末狀后倒入勻漿器中，加1 ml TRIzol （TRIZOL是一種新型總RNA抽提試劑）處理，然后倒入Ep 管中，12 000 r /min，4離心20 min 后取上清，按照Invitrogen 公司的TRIzol 使用說(shuō)明書(shū)提取總RNA。甲醛變性膠電泳檢測(cè)總RNA 質(zhì)量.iii：逆轉(zhuǎn)錄cDNA 合成，定量PCR: 采用50 l 反應(yīng)體系:5 l 模板( 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物)，4 l 引物混合物(10 pmol /l)，25 l 2

21、 SYBR Green，16 l 水。反應(yīng)條件:95 15 min;95 15 s，56 20 s，68 20 s，擴(kuò)增40個(gè)循環(huán);95 1 min，56 1 min，95 1 min，采集熔解曲線.iv：實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTqPCR)檢測(cè)miRNA-99a的相對(duì)表達(dá)量vi：基因表達(dá)水平計(jì)算：以 CT （ CT 標(biāo)本目的基因CT 值標(biāo)本內(nèi)參基因CT 值）表示樣本中目的基因的相對(duì)表達(dá)量， CT 越高，表達(dá)量越低。vii：統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：用SPSS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，對(duì)其腫瘤組織中mi-RNA99a表達(dá)量（Ct值）進(jìn)行獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。相關(guān)性采用Spearman 相關(guān)分析。對(duì)腫瘤惡性程度（

22、G1-G2和G3)，腫瘤的臨床分期（I-II和III-IV)分組不同的無(wú)進(jìn)展生存期差異,進(jìn)行l(wèi)og-rank檢驗(yàn),并分別采用Kaplan-Meier方法繪制生存曲線；多因素分析釆用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行分析。將單因素分析中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的臨床病理因素：臨床分期、mi-RNA99a表達(dá)量納入Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行綜合分析,變量篩選采用逐步向前回歸法,以PS 0. 05為納入標(biāo)準(zhǔn)，P0. 10為剔除標(biāo)準(zhǔn)。可簡(jiǎn)單繪制如下統(tǒng)計(jì)表格：RTqPCR檢測(cè)膀胱上皮癌和正常膀胱上皮組織中差異mi-RNA99a基因的表達(dá)（xs）標(biāo)本分組 標(biāo)本數(shù) mi-RNA99a基因的表達(dá)檢測(cè)值 正常 20分級(jí) I級(jí) 10

23、 II級(jí) 10 III級(jí) 10分型 浸潤(rùn)性 20 非浸潤(rùn)性 30 1李先承，李秀男，宋希雙MicroRNA 與實(shí)體腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展J 大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， ，（） ： 三、實(shí)施本項(xiàng)目已具備的條件（說(shuō)明已具備的試驗(yàn)手段、技術(shù)力量、前期科研基礎(chǔ)情況）1：檢測(cè)miRNA的方法：目前已經(jīng)開(kāi)發(fā)出多種miRNAs 的表達(dá)檢測(cè)手段，如Northem blotting 、實(shí)時(shí)定量PCR （RTPCR）、基因芯片技術(shù)等。Northem blotting 是基于分子雜交的檢測(cè)技術(shù)，它是最先運(yùn)用于miRNAs 的半定量檢測(cè)，視作該檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)1。RT PCR是現(xiàn)今miRNAs 應(yīng)用得最廣泛的定量檢測(cè)方法，其中常用的

24、有polyA 聚合酶加尾法和莖環(huán)法（stemloop）2。通過(guò)對(duì)比這兩類(lèi)基于PCR 技術(shù)的miRNAs 定量檢測(cè)方法的基本原理和試驗(yàn)流程，比較了它們技術(shù)間的異同，認(rèn)為莖環(huán)引物法能夠檢測(cè)到pg miRNAs,而加尾法能檢測(cè)到pg 的miRNAs ，前者的靈敏性更高?；蛐酒夹g(shù)（DNA microarray） ，其工作原理也是通過(guò)分子雜交進(jìn)行定性與定量分析。但是基因芯片可以一次性分析數(shù)萬(wàn)個(gè)基因，進(jìn)行miRNAs高通量篩選和分析。并可以經(jīng)實(shí)時(shí)定量基因擴(kuò)增熒光檢測(cè)系統(tǒng)（QRPCR）驗(yàn)證膀胱癌組織差異表達(dá)的miRNAs。最近，也有研究者運(yùn)用熒光DNA 探針技術(shù)來(lái)分析成熟miRNAs3?，F(xiàn)今miRNA調(diào)

25、控與膀胱癌的關(guān)系研究著眼于表達(dá)譜研究(miRNA profile)及功能性實(shí)驗(yàn)（functional experiment)。表達(dá)譜研究指已知正常組織細(xì)胞中表達(dá)的特定多個(gè)miRNA，比較相關(guān)腫瘤組織(如膀胱內(nèi)正常尿路上皮對(duì)應(yīng)尿路上皮癌組織)內(nèi)這些miRNA表達(dá)水平的變化4。功能性實(shí)驗(yàn)旨在確定某些miRNA是否調(diào)控已知原癌或者抑癌基因的表達(dá)，即確定miRNA調(diào)控的靶點(diǎn)5。2: 科研技術(shù)力量：鄭州大學(xué)河南省高等學(xué)校臨床醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室為河南省級(jí)醫(yī)學(xué)研究實(shí)力較強(qiáng)的科研機(jī)構(gòu)，成立以來(lái)每年可支配大量科研經(jīng)費(fèi)，擁有許多具有碩士或博士學(xué)位的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員和完成該實(shí)驗(yàn)所需的大型儀器。統(tǒng)計(jì)處理方案方面可以請(qǐng)

26、教公共衛(wèi)生學(xué)院的各位資深統(tǒng)計(jì)學(xué)者作指導(dǎo)。醫(yī)學(xué)院研究方面與一附院合作緊密。通過(guò)病理科資深專(zhuān)家和泌尿外科手術(shù)室的協(xié)助，可謂是如虎添翼。3：前期科研基礎(chǔ)：人員：資深病理學(xué)家對(duì)膀胱癌患者標(biāo)本的采集，專(zhuān)業(yè)從事mi-RNA基礎(chǔ)研究的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院學(xué)者，專(zhuān)業(yè)的公共衛(wèi)生學(xué)院的統(tǒng)計(jì)學(xué)者，嫻熟泌尿外科手術(shù)專(zhuān)家財(cái)政：可以申請(qǐng)專(zhuān)門(mén)的實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)來(lái)完成這個(gè)項(xiàng)目，國(guó)家自然基金，青年基金，學(xué)?？蒲胁块T(mén)經(jīng)費(fèi)的支持等。硬件環(huán)境：專(zhuān)業(yè)的現(xiàn)代化分子研究實(shí)驗(yàn)室，各種現(xiàn)代化研究大型儀器已完成科研成果：相關(guān)專(zhuān)家對(duì)于mi-RNA家族其它部分成員有深刻的研究，對(duì)于試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的新的生化指標(biāo)應(yīng)用于臨床診治有著一套熟悉的流程，科學(xué)的推斷，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)恼撟C。這些

27、資料可以通過(guò)文獻(xiàn)獲得。、1Cissell K A ，Deo S K Trends in microRNA detectionJ Anal Bioanal Chem ，2009，394（4）：1109 10162陳新，曾長(zhǎng)英，盧誠(chéng)，等基于PCR 技術(shù)的miRNA 定量檢測(cè)方法J。中國(guó)生物工程雜志，2010 ，30（11） ：88-93 3Kato Y An efficient fluorescent method for selectivedetection of mature miRNA speciesJ Nucleic Acids SympSer （Oxf），2008，52 （1） ：71-

28、724Volinia S，Calin GALiu CG。el a1A microRNA expression siguature of human solid tumors de?nes cancer gene targetsProc Nail Acad Sci USA。2006。103：2257226I5Lindow MGorodkin JPrinciples and limitations of computationalmicroRNA gene and target?ndingDNA Cell Biol。2007。26：339351四、項(xiàng)目的預(yù)期經(jīng)濟(jì)、社會(huì)和環(huán)境效益目前，膀胱癌的發(fā)病率

29、在世界范圍內(nèi)有上升趨勢(shì)，這種變化在我國(guó)尤其明顯。關(guān)于癌癥發(fā)病機(jī)制、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等基礎(chǔ)方面的研究發(fā)展迅速。miRNAs 在膀胱癌中抑制或者促進(jìn)癌癥演變的報(bào)道越來(lái)越多，其具體作用機(jī)制尚不了解。但是，隨著基因芯片和生物信息學(xué)技術(shù)的發(fā)展，為miRNAs 的研究提供了難得的機(jī)遇。研究方向上，深入探討miRNAs 作用機(jī)制仍是主要任務(wù)之一，應(yīng)注重系統(tǒng)性研究，確定重要miRNAs 的位點(diǎn)基因，研究不同miRNAs 的協(xié)作機(jī)制，開(kāi)發(fā)用于診斷與預(yù)后評(píng)估的特異miRNAs 譜。我們相信，隨著研究的逐步深入， miRNAs 參與生命活動(dòng)的分子機(jī)制將會(huì)更加明朗。這將為寄予厚望的分子診斷和靶向治療提供新的切入點(diǎn)，為膀胱癌的預(yù)后判斷提供有力的科學(xué)依據(jù)。miRNA的研究前