藥用大黃莖葉中有效成分的分析與測定畢業(yè)設計

1、201 1屆畢業(yè)論文陜筋屋工摩院Shaanxi University 9坯）。甲醇：色譜純 氯仿兩種大黃分別購于漢中鎮(zhèn)巴縣清水白河兩地2.1.3色譜條件色譜柱：應用 Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 250mm, 5ym),流動相為1%磷酸-99%甲醇，流 速為1.0mLmin，進樣體積為10，柱溫為30 C，檢測波長為 254nm。(1) 流動相的選擇本次研究選擇大黃素為分析對象，這種大黃蒽醌類化合物均為極性化合物，固選擇以甲醇為流動相，用微柱高效液相色譜進行分離。為了避免脫尾現(xiàn)象，所以在流動相中加入少量0.1%的磷酸調(diào)節(jié)，來抑制分析物的離解。實驗表明：隨著磷酸體積的增加各組分的

2、保留時間也增加，但對分離度 的影響不大。因此選擇甲醇 :0.1%磷酸(80:20)作為流動相。(2) 波長的選擇大黃中的蒽醌成分多屬于大黃素型和茜草素型27，這兩類蒽醌衍生物主要為三取代和四取代蒽醌28，研究表明用254nm為檢測波長時曲線關(guān)系良好，因此選擇波長為254nm，考慮到分析速度和分離度，流動相的流速為1.0Lmin。綜合以上條件，本次試驗選定的條件為色譜柱： 應用Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 250mm ,5m) 流動相選擇甲醇:0.1%磷酸比為80:20 ,流速為1.0mLmin，檢測波長為254nm，進樣體積10山，柱 溫為30C。2.2實驗方法2.2.1標準溶

3、液的配置準確稱取大黃素標準品5.0mg，以色譜純甲醇溶解定容至50mL的濃度分別為100馮mL的標準品儲備液，進樣前以純甲醇稀釋并用0.22針頭過濾器過濾。2.2.2樣品的配置在60犬C下干燥恒重并將大黃樣品粉碎后過 200目篩，準確稱取1g并加入50mL分析純氯仿加 熱回流120min，冷卻，蒸干氯仿，用 20%硫酸溶解殘渣，以色譜純甲醇定容至 50mL，用0.22針頭 過濾器過濾，即制得樣品試液。2.3實驗數(shù)據(jù)分析討論在選定條件下，用所配置的大黃素標準品進行液相色譜，所得色譜圖如圖1所示，由圖可見大黃素在6.5 min時達到了分離，隨后的樣品分析結(jié)果也表明所測定樣品中各組分在此條件下均能實

4、2.3.1線性關(guān)系考察精密吸取混合標準品對照液5、10、15、20按上述色譜條件進行液相色譜測定峰面積（Y）,以峰面積分別對各進液量（X）回歸，繪制標準曲線，得回歸方程：大黃素A=3.3009X100C+14.298R2=0.9372 A表示峰面積 C表示各組分濃度（卩Lml）2.3.2精密度試驗精密吸取上述對照品溶液 10微升，重復進樣 5次，計算大黃素的峰面積平均值和RSD見表1表1名稱大黃素峰面積平均值78.3836RSD1.9%2.3.3樣品含量的測定表2樣品中大黃素測定結(jié)果樣品類型產(chǎn)地大黃素含量RSD大黃清水9.021.23白河9.741.542.3.4正交實驗：以回流時間(A)、溶

5、劑用量(B)和溶劑(C為考查因素進行正交實驗，實驗條件如下表 表3序號條件AhBmLC氯仿：乙醇10.51001:021801:132501:2表4氯仿和乙醇混合溶劑提取結(jié)果分析AhBmL氯仿：乙醇大黃素g10.5501:29.33120.5801:19.32730.51001:09.32241501:09.32451801:29.422611001:19.34172501:19.45682801:09.238921001:29.721由表4可得最佳條件為 A ( 2h) B(100) C(氯仿比乙醇1:2)，在此條件下大黃素的分離效果最好3結(jié)論通過查閱資料，本文建立了一個通過高效液相色譜法同

6、時測定藥用大黃中大黃素的方法，通過 實際樣品的測定得出大黃素在6.5min時得到分離，與參考資料比較，實驗結(jié)果比較接近，得到了預期的效果，驗證了此方法的可行性。此方法具有快速、簡單、靈敏度高等優(yōu)點，可大黃中有效成分 的分析與測定提供一定的參考價值。參考文獻1 中華人民共和國藥典M .二部北京：化學工業(yè)出版社,2005:附錄181- 182.2 陳發(fā)奎主編.常用中草藥有效成分含量測定M .北京:人民衛(wèi)生出版社1997:28-51.4倪弘，薛小平楊秀竹.大黃酸抑制小鼠腹腔巨噬細胞炎性介質(zhì)活化的作用機理J.天津中醫(yī)，2001,(01):35-36.6禹莉，凌云志順鉑.對肝癌細胞株HepG2增殖和SA

7、TB1表達的影響J.蚌埠醫(yī)學院學報,2012,(8)7 范仁根，單湘湘，宋長志等.大黃素在體外誘導人肝癌細胞smmc-7721凋亡的實驗研究J,河北醫(yī)學,2008,(11).8 胡凱文候麗，陳信義等.大黃酸大黃素抗多藥耐藥腫瘤細胞研究J,中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志,1998,(11).10 紀松崗，柴逸峰.吳玉田等.分析化學J .1998, 26 (11) : 1388.11 茍奎斌,袁海龍,李仙義等 沖國藥學雜志J ,1999, 34 (9) : 619.12 夏之寧，周闖，孫冠蕓等.中成藥J .1999, 21 (9): 478.26黎艷,張志玲，劉虎威等.第四屆毛細管電泳十年發(fā)展學術(shù)會議論文集

8、C .200027 Thomson R H. Anthraquinones in: Naturallyoccurring quinines.2ad Ed. New York: AcademicPress lnc,1971.致謝：大學四年學習時光已經(jīng)接近尾聲，在此我想對我的母校，我的父母、親人們，我的老師和同學 們表達我由衷的謝意。感謝我的家人對我大學四年學習的默默支持；感謝我的母校陜西理工學院給了我大學四年深造的機會，讓我能繼續(xù)學習和提高；感謝季曉暉、劉軍海、李志洲等老師和同學們?nèi)陙淼年P(guān)心和鼓勵。老師們課堂上的激情洋溢，課堂下的諄諄教誨；同學們在學習中的認真熱情，生活上的熱心主動，所有這些都讓我的四年充滿了感動。這次畢業(yè)論文設計我得到了很多老師和同學的 幫助，其中我的論文指導老師季曉暉老師對我的關(guān)心和支持尤為重要。每次遇到難題，我最先做得 就是向季曉暉老師尋求幫助，而季曉暉老師每次不管忙或閑，總會抽空來找我面談，然后一起商量 解決的辦法。我做畢業(yè)設計的每個階段，從選題到查閱資料，論文提綱的確定，中期論文的修改，后期論文 格式調(diào)整等各個環(huán)節(jié)中都給予了我悉心的指導。這幾個月以來，季曉暉老師不僅在學業(yè)上給我以精 心指導，同時還在