北工大微生物學(xué)[2]課件

1、第二章 物的 純培 顯微 技術(shù)培養(yǎng)物:在人為規(guī)定條件下培養(yǎng),繁殖得到的微生物群體.純培養(yǎng)物-而具有一種微生物的培養(yǎng)物.顯微技術(shù)-顯微標(biāo)本的制作,觀察,測定,分析及記錄等.自然環(huán)境如土壤和水中，通常棲息自然環(huán)境如土壤和水中，通常棲息著的是許多不同微生物混雜在一起著的是許多不同微生物混雜在一起的群體。哪怕是一粒砂或塵土，也的群體。哪怕是一粒砂或塵土，也常含有多種細(xì)菌及其它微生物。常含有多種細(xì)菌及其它微生物。簡單易行，但易造成機(jī)械損傷簡單易行，但易造成機(jī)械損傷Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile b

2、ent glass rod. 純培養(yǎng)的分離方法純培養(yǎng)的分離方法 稀釋倒平板法稀釋倒平板法 稀釋倒平板法分離微生物稀釋倒平板法分離微生物平板劃線法分離微生物平板劃線法分離微生物特點(diǎn)：快速、方便。特點(diǎn)：快速、方便。 分區(qū)劃線（適用于濃度較大的樣品）分區(qū)劃線（適用于濃度較大的樣品） 連續(xù)劃線（適用于濃度較小的樣品）連續(xù)劃線（適用于濃度較小的樣品）An inoculating loop is used to thin out organisms on the surface of the agar. Viable cell count1.dilute sample1 ml9 ml10 100 1000

3、 104 105 106 107cell no/ml2. plate out 0.1 ml Inoculating an agar plate to obtain single coloniesMixed culturePure cultureMixed cultureOral swabSwab from sole of shoeEach colony was examined microscopically三、用液體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng)三、用液體培養(yǎng)基獲得純培養(yǎng) 個(gè)體大的細(xì)菌原生動物藻類稀釋法-接種物在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行順序稀釋,以得到高度稀釋效果,使一只試管中分配不到一個(gè)微生物.如果經(jīng)稀釋后的大

4、多數(shù)試管中沒有微生物生長,那么有微生物生長的試管得到的培養(yǎng)物可能就是純培養(yǎng)物.如果經(jīng)稀釋后的試管中有微生物生長的比例提高了,得到的純培養(yǎng)物的概率就會下降.采用顯微分離法從混雜群體中直接分離單個(gè)細(xì)胞或單個(gè)個(gè)體采用顯微分離法從混雜群體中直接分離單個(gè)細(xì)胞或單個(gè)個(gè)體進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)的方法。該方法要在顯微鏡下進(jìn)行。進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)的方法。該方法要在顯微鏡下進(jìn)行。毛細(xì)管法：毛細(xì)管法：用毛細(xì)管提取微生物個(gè)體，適合于較大微生物。用毛細(xì)管提取微生物個(gè)體，適合于較大微生物。顯微操作儀：顯微操作儀：用顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個(gè)細(xì)胞或孢子以獲用顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個(gè)細(xì)胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。得純培養(yǎng)。小液滴法：

5、小液滴法：將經(jīng)過適當(dāng)稀釋后的樣品制成小液滴，在顯微鏡將經(jīng)過適當(dāng)稀釋后的樣品制成小液滴，在顯微鏡下選取只含一個(gè)細(xì)胞的液滴來進(jìn)行純培養(yǎng)物的分離。下選取只含一個(gè)細(xì)胞的液滴來進(jìn)行純培養(yǎng)物的分離。為了從混雜的微生物群體中分離出某種微生物，可為了從混雜的微生物群體中分離出某種微生物，可以根據(jù)該微生物的特點(diǎn)，包括營養(yǎng)、生理、生長條以根據(jù)該微生物的特點(diǎn)，包括營養(yǎng)、生理、生長條件等，采用選擇培養(yǎng)的方法進(jìn)行分離。件等，采用選擇培養(yǎng)的方法進(jìn)行分離。利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基分離法1.dilute sample1 ml9 ml10 100 1000 104 105

6、106 107牛肉膏培養(yǎng)基牛肉膏培養(yǎng)基土豆培養(yǎng)基土豆培養(yǎng)基高氏培養(yǎng)基高氏培養(yǎng)基細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長情況光滑型菌落粗糙型菌落粘液型菌落細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長情況菌膜菌沉淀均勻渾濁對照細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長情況n菌種保藏的重要意義就在于盡可能保持菌種保藏的重要意義就在于盡可能保持其原有性狀和活力的穩(wěn)定，確保菌種不死其原有性狀和活力的穩(wěn)定，確保菌種不死亡、不變異、不被污染，以達(dá)到便于研亡、不變異、不被污染，以達(dá)到便于研 究、交換和使用等諸方面的需要。究、交換和使用等諸方面的需要。n 該法是將砂與土分別洗凈、烘干、過篩，按一定比例分裝于該法是將砂與土分別洗凈、烘干、過篩，按一定比例分裝于小試

7、管中，砂土的高度約小試管中，砂土的高度約1cm1cm，121121蒸汽滅菌蒸汽滅菌1 11.5h1.5h，間歇，間歇滅菌滅菌3 3次。次。5050烘干后經(jīng)檢查無誤后備用。將待保藏的菌株制烘干后經(jīng)檢查無誤后備用。將待保藏的菌株制成菌懸液或孢子懸液滴入砂土管中，放線菌和霉菌也可直接刮成菌懸液或孢子懸液滴入砂土管中，放線菌和霉菌也可直接刮下孢子與載體混勻，而后置于干燥器中抽真空約下孢子與載體混勻，而后置于干燥器中抽真空約2 24h4h，用火，用火焰熔封管口焰熔封管口( (或用石蠟封口或用石蠟封口) )，置于干燥器中，在室溫或，置于干燥器中，在室溫或44冰冰箱內(nèi)保藏。箱內(nèi)保藏。 n 此法適用于各大類微

8、生物。此法適用于各大類微生物。n 此法的主要保藏措施是低溫、干燥、缺氧、有保護(hù)劑，保此法的主要保藏措施是低溫、干燥、缺氧、有保護(hù)劑，保藏期一般長達(dá)藏期一般長達(dá)5 51515年，存活率高，變異率低，是目前被廣泛年，存活率高，變異率低，是目前被廣泛采用的一種較理想的保藏方法。采用的一種較理想的保藏方法。n 該法操作比較煩瑣，技術(shù)要求較高，且需要凍干機(jī)等設(shè)備。該法操作比較煩瑣，技術(shù)要求較高，且需要凍干機(jī)等設(shè)備。腦膜炎奈瑟菌腦膜炎奈瑟菌雙球菌雙球菌(diplococcus)肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌鏈球菌鏈球菌(streptococcus)葡萄球菌葡萄球菌(streptococcus)四聯(lián)球菌四聯(lián)球菌(tetrad)八疊球菌八疊球菌(sarcina)不同桿菌的大小、長短、粗細(xì)很不一致。不同桿菌的大小、長短、粗細(xì)很不一致。炭疽芽胞桿菌 3-10 m大中大腸埃希菌 2-3 m小布魯菌 0.6-1.5 m兩端齊平炭疽芽胞桿菌炭疽芽胞桿菌兩端尖細(xì)白喉棒狀桿菌白喉棒狀桿菌桿菌的形態(tài)多樣桿菌的形態(tài)多樣分枝桿菌分枝桿菌雙歧桿菌雙歧桿菌弧菌弧菌螺菌螺菌螺桿菌螺桿菌 莢膜：莢膜： 某些細(xì)菌在其細(xì)胞壁外包繞一層黏液性物質(zhì)，為疏水性多糖或蛋白質(zhì)的多聚體，用理化方法去除后