實驗三 組織分離與孢子分離2

1、實驗二、三 p一般流程：一般流程： 種菇選擇：種菇選擇： 在出菇場要選擇肉厚肥大、鮮嫩，出菇早、菇形整在出菇場要選擇肉厚肥大、鮮嫩，出菇早、菇形整 齊、菌柄短且無病害的做種。齊、菌柄短且無病害的做種。 表面消毒：表面消毒： 將種菇表面用清水沖洗干凈，放在接種箱（或無菌室將種菇表面用清水沖洗干凈，放在接種箱（或無菌室 內(nèi)）進行表面消毒。用鑷子將種菇放在培養(yǎng)皿內(nèi)，用另一內(nèi)）進行表面消毒。用鑷子將種菇放在培養(yǎng)皿內(nèi)，用另一 把鑷子夾把鑷子夾75%75%酒精棉球（或酒精棉球（或0.1%0.1%升汞棉球）對種菇進行表升汞棉球）對種菇進行表 面消毒，然后移入另一培養(yǎng)皿內(nèi)再用無菌水反復(fù)洗滌三次，面消毒，然后移

2、入另一培養(yǎng)皿內(nèi)再用無菌水反復(fù)洗滌三次， 洗凈殘留的消毒劑。洗凈殘留的消毒劑。 （實驗中將省略這一步）（實驗中將省略這一步） 菌柄與菌蓋交界處取組織塊菌柄與菌蓋交界處取組織塊 用解剖刀或鮮剖剪蘸酒精進行火焰消毒，冷卻后把自己用解剖刀或鮮剖剪蘸酒精進行火焰消毒，冷卻后把自己 消毒的種菇縱切開，然后用菌蓋與菌柄交界處，切取長寬的消毒的種菇縱切開，然后用菌蓋與菌柄交界處，切取長寬的 0.30.30.50.5厘米的菌肉組織塊，用接種針移到斜面培養(yǎng)基上，厘米的菌肉組織塊，用接種針移到斜面培養(yǎng)基上， 置置2424恒溫箱中培養(yǎng)。恒溫箱中培養(yǎng)。 檢查篩選檢查篩選 每天檢查試管斜面菌落生長情況，如從分離的菌肉組織

3、每天檢查試管斜面菌落生長情況，如從分離的菌肉組織 塊上長出正常的白色菌絲，即分離成功，及時將生長出來的塊上長出正常的白色菌絲，即分離成功，及時將生長出來的 菌絲轉(zhuǎn)移新的試管斜面。若在組織塊附近或其他地方出現(xiàn)其菌絲轉(zhuǎn)移新的試管斜面。若在組織塊附近或其他地方出現(xiàn)其 他顏色雜菌生長應(yīng)予以淘汰。他顏色雜菌生長應(yīng)予以淘汰。 純化培養(yǎng)純化培養(yǎng) 將菌絲塊移入將菌絲塊移入PDAPDA平板培養(yǎng)平板培養(yǎng) 若純：四周輻射狀生長，外緣整齊一致若純：四周輻射狀生長，外緣整齊一致 否則：邊緣參差不齊，色素分布不均勻否則：邊緣參差不齊，色素分布不均勻 將較一致的菌絲的前端，切割將較一致的菌絲的前端，切割新培養(yǎng)皿新培養(yǎng)皿 菌

4、肉組織分離示意圖菌肉組織分離示意圖 菌核組織分菌核組織分 離示意圖離示意圖 2. 2. 菌絲組織分離與接種菌絲組織分離與接種 取平菇子實體，小的子實體一人用一個，大的子實體取平菇子實體，小的子實體一人用一個，大的子實體2 2 3 3人用一個（在工作臺上直接撕開即可），人用一個（在工作臺上直接撕開即可），注意保持注意保持 撕開的部位干凈撕開的部位干凈。用消毒過的解剖剪在新鮮的傷口。用消毒過的解剖剪在新鮮的傷口中中 間間剪取剪取2 24mm4mm見方的組織塊（見方的組織塊（純白色，如果是水浸狀純白色，如果是水浸狀 則不能用則不能用），或用彎頭鑷夾取小組織塊放入試管內(nèi)，），或用彎頭鑷夾取小組織塊放入

5、試管內(nèi)， 再用長的槍形鑷將組織塊送入試管培養(yǎng)面中間部位，再用長的槍形鑷將組織塊送入試管培養(yǎng)面中間部位， 輕輕按壓，將組織塊的一部分壓入培養(yǎng)基。封口。培輕輕按壓，將組織塊的一部分壓入培養(yǎng)基。封口。培 養(yǎng)。養(yǎng)。 3. 孢子分離與接種 （）采菇。選擇菇體形態(tài)好，生長勢健壯，并能 代表該品種性狀接近成熟的平菇子實體，采摘一叢 或兩叢作為復(fù)壯用種菇拿回室內(nèi)備用。要求所采的 子實體菌蓋邊緣稍卷或已接近平展。 （）裝置與滅菌。用新潔爾滅清洗干凈個 毫升燒杯和個培養(yǎng)皿，烘干水分后將培養(yǎng)皿放入燒杯 底部。切取菌蓋長達厘米上層或中層的一朵平菇子實 體，用藥棉蘸酒精輕擦菌蓋和菌柄后，將菌褶朝下放 入燒杯中的培養(yǎng)皿中

6、如有插菇鋼絲架更好。此操作完成 后在燒杯口沿上蓋好用無菌水滴濕的層沙布，上面再蓋一 層白紙，用皮筋扎口，以次類推連同個同樣處理的燒杯一 起放入接種箱。接種箱中另放入支試管培 養(yǎng)基，接種鏟、鑷子酒精燈等工具，用毫升甲醛加克 高錳酸鉀混合后對接種箱進行熏蒸消毒滅菌。 （）接種與培養(yǎng)。放入接種箱用于孢子分離的平菇，經(jīng)過 小時后就有孢子彈出，一般放晝夜培養(yǎng)皿中就有 厚厚一層白色孢子印，這時要及時進行接種。接種時雙手用 酒精擦洗后就可進行。先取掉燒杯口上覆蓋的紙和紗 布，再用鑷子夾出平菇體，取出培養(yǎng)皿用左手食指和母指夾 住皿體，再取一支試管培養(yǎng)基用左手小指和無名指夾住。右 手持接種鏟豎著在酒精燈上灼燒進行干熱滅菌，待冷卻后用 右手小指及魚際拔出試管棉塞，用接種鏟從培養(yǎng)皿中央鏟取 一些孢子接在試管培養(yǎng)基中央，隨即塞上棉塞即可。一朵菇 體彈射的孢子量可接種支以上試管種。接種完成后貼上 標(biāo)簽放入左右的恒溫箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，前 天為孢子定植期，外表看不出任何變