T細(xì)胞免疫功能檢測平臺的建立和應(yīng)用【蒼松書屋】

1、T細(xì)胞免疫功能檢測平臺的建立與臨床應(yīng)用,北京協(xié)和醫(yī)院感染內(nèi)科,1,技術(shù)研究,T細(xì)胞免疫功能與感染,T細(xì)胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 T細(xì)胞免疫的抗感染作用 T細(xì)胞免疫功能的測定 T細(xì)胞亞群 T細(xì)胞功能 T細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義,2,技術(shù)研究,3,技術(shù)研究,機(jī)體的免疫系統(tǒng),非特異免疫 皮膚粘膜，吞噬細(xì)胞，NK細(xì)胞， 補(bǔ)體，正常菌群 特異性免疫 細(xì)胞免疫：CD4+ 細(xì)胞，CD8+ 細(xì)胞 體液免疫：B細(xì)胞,4,技術(shù)研究,機(jī)體的免疫系統(tǒng),5,技術(shù)研究,CD4+細(xì)胞的免疫中樞指揮功能,6,技術(shù)研究,CD4+細(xì)胞的免疫中樞指揮功能,7,技術(shù)研究,CD4+細(xì)胞的產(chǎn)生和分群,8,技術(shù)研究,純真

2、,純真和記憶/效應(yīng)4細(xì)胞亞群的產(chǎn)生,記憶,效應(yīng),凋亡,胸腺,效應(yīng),效應(yīng),效應(yīng),9,技術(shù)研究,純真 CD4和記憶CD4細(xì)胞,10,技術(shù)研究,11,技術(shù)研究,細(xì)胞免疫功能的抗感染作用,感染發(fā)生的兩個基本要素：病原體和機(jī)體免疫功能 免疫功能對疾病轉(zhuǎn)歸的影響： 對免疫功能正常的人不起致病作用的病原體，在免疫功能低下的人身上可發(fā)生致命性的感染； 免疫功能正常的人發(fā)生某種感染后可很快恢復(fù)，而在免疫功能紊亂的人則成為慢性狀態(tài)； 對同樣的病原體所導(dǎo)致的感染，給予同樣的抗感染治療，轉(zhuǎn)歸完全不一樣,12,技術(shù)研究,細(xì)胞免疫功能的抗感染作用,為什么？ 乙肝病毒感染：有人為乙肝病毒攜帶者, 也有人成為慢性乙肝病人？

3、HPV感染：多數(shù)人表現(xiàn)為無癥狀的HPV潛伏感染者，少數(shù)人表現(xiàn)為復(fù)發(fā)性HPV CMV感染: 90%的正常人隱性感染終生帶病毒，但免疫功能低下時可致死,13,技術(shù)研究,14,技術(shù)研究,HIV感染的自然史,CD4細(xì)胞 (cell/mm3） 800 400,急性感染期,無癥狀期,艾滋病前期和艾滋病期,CD4,病毒載量,抗HIV 的CTL,HIV抗體,15,技術(shù)研究,HIV感染者的三種臨床轉(zhuǎn)歸,Virus,CD4,CD8 aHIV,CD4,CD4,CD8,CD8 aHIV,Virus,Virus,Standard 8 y,Fast : 4-5 y : (2%) (CCR genes, HLA B35,S

4、low : 10 y : (2%), CCR genes, HLA B57,16,技術(shù)研究,免疫功能與機(jī)會性感染相關(guān)性,years,200,CD4 counts,白念菌,Zona,卡波濟(jì)肉瘤,淋巴瘤,PCP,弓型體,CMV,MAIC,4,8,艾滋病期,HIV load,2,10,17,技術(shù)研究,細(xì)胞免疫功能的抗感染作用不重視機(jī)體免疫功能的后果,化療藥物的濫用 耐藥菌的產(chǎn)生 二重感染的發(fā)生 進(jìn)一步損害免疫功能,18,技術(shù)研究,細(xì)胞免疫功能與感染,細(xì)胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 細(xì)胞免疫的抗感染作用 T細(xì)胞免疫功能的測定 T細(xì)胞亞群 T細(xì)胞功能 細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義,19,技術(shù)研

5、究,細(xì)胞免疫功能與感染免疫功能測定方法,體內(nèi)： PPD試驗(yàn)？ 體外： 體液免疫：B細(xì)胞數(shù)量，免疫球蛋白定量 細(xì)胞免疫：T細(xì)胞亞群的數(shù)量和功能 （流式細(xì)胞儀，ELISA，ELISPOT,20,技術(shù)研究,T細(xì)胞免疫功能的測定,21,技術(shù)研究,A cytometer looks like an easy-to-use machine,but look inside: Its a complex laser machine,22,技術(shù)研究,PMT,PMT,PMT,PMT 4,Dichroic,Filters,Bandpass,Filters,Flow Cytometry Principle,Laser

6、,1,2,3,4,Flow cell,23,技術(shù)研究,T細(xì)胞免疫功能的測定,24,技術(shù)研究,淋巴細(xì)胞免疫表型檢測指標(biāo),25,技術(shù)研究,不同年齡組正常細(xì)胞亞群的建立,26,技術(shù)研究,細(xì)胞免疫功能測定方法T細(xì)胞功能的測定,T細(xì)胞增殖功能 同位素H3摻入試驗(yàn) BrdU ，Ki67 CFSU T細(xì)胞毒試驗(yàn)（CTL）和細(xì)胞介素測定 同位素Cr51 四聯(lián)體 ELISA 流式細(xì)胞儀 ELISPOT,27,技術(shù)研究,ELISPOT 方法,ELISPOT方法是目前國際上廣泛應(yīng)用的較新的體外測定特異性抗體分 泌細(xì)胞和細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的方法。該方法可在單細(xì)胞水平檢測淋 巴細(xì)胞對特異性抗原的反應(yīng)能力及計(jì)數(shù)特異性抗原刺

7、激下細(xì)胞因子 分泌細(xì)胞的頻數(shù)。 優(yōu)點(diǎn)：敏感-能檢測產(chǎn)生細(xì)胞因子頻率極低的細(xì)胞，靈敏度高達(dá) 1/1000000。 特異 直觀-可直接在顯微鏡下人工計(jì)數(shù)斑點(diǎn)或通過ELISPOT分 析系統(tǒng)對斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)， 1 個斑點(diǎn)代表 1 個特異性 抗體分泌細(xì)胞或細(xì)胞因子分泌細(xì)胞,28,技術(shù)研究,ELISPOT 原理,PBMC,刺激原,孵育16 18h或4048h,29,技術(shù)研究,ELISpot 結(jié)果,陰性對照,陽性對照,樣本孔,樣本孔,圖中的每個斑點(diǎn)代表一個能分泌IFN- 的抗原特異性CD4+T細(xì)胞或CTL,30,技術(shù)研究,T細(xì)胞免疫功能與感染,T細(xì)胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 T細(xì)胞免疫的抗感染作

8、用 T細(xì)胞免疫功能的測定 T細(xì)胞亞群 T細(xì)胞功能 T細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義,31,技術(shù)研究,T細(xì)胞免疫功能與感染細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義,HIV感染和艾滋病 其它各種感染性疾病 -病毒感染：SARS, HBV，HCV，EBV， CMV，HFRS, HFMD -結(jié)核病，真菌感染。 腫瘤和化療病人的免疫功能監(jiān)測 器官移植病人的免疫監(jiān)測 自身免疫病和過敏性疾病,32,技術(shù)研究,細(xì)胞免疫功能與感染細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義,中國HIV/AIDS的免疫病理 改變和免疫重建,33,技術(shù)研究,艾滋病的主要免疫病理改變,CD4+ T 細(xì)胞數(shù)的減少； CD4+ T 功能的減低; 異常的細(xì)胞免疫激活,34,

9、技術(shù)研究,HIV感染的自然史,CD4細(xì)胞 (cell/mm3） 800 400,急性感染期,無癥狀期,艾滋病前期和艾滋病期,CD4,病毒載量,抗HIV 的CTL,HIV抗體,35,技術(shù)研究,HIV/AIDS 患者淋巴細(xì)胞亞群與正常對照比較,計(jì)數(shù)：個/mm3，比例：%，數(shù)值以中位數(shù)（上四分位數(shù)，下四分位數(shù)）表示） *與正常對照組相比存在顯著差異P0.001。 與正常對照組相比存在顯著差異P=0.021,36,技術(shù)研究,早中晚3組患者淋巴細(xì)胞亞群的比較,組與、組相比P0.001, 組與組相比P0.001。 *組與、兩組均存在顯著差異P0.001, 、組兩組無顯著差異。 （計(jì)數(shù)：個/mm3，比例：%

10、，數(shù)值以中位數(shù)（上四分位數(shù)，下四分位數(shù)）表示,37,技術(shù)研究,HIV/AIDS的免疫病理改變選擇性純真T4細(xì)胞的減少,正常人,HIV感染者,AIDS病人,38,技術(shù)研究,HIV/AIDS的免疫病理改變T4細(xì)胞輔刺激信號受體的表達(dá)減少,正常人,HIV感染者,AIDS病人,39,技術(shù)研究,CD28T細(xì)胞輔刺激信號受體,40,技術(shù)研究,HIV/AIDS的免疫病理改變異常的T細(xì)胞免疫激活,AIDS病人,HIV感染者,正常人,41,技術(shù)研究,中國艾滋病病人的免疫改變特點(diǎn),艾滋病病人有選擇性的純真 T4細(xì)胞減少; CD4+CD28+ 是細(xì)胞免疫功能的標(biāo)記指標(biāo); CD8+CD38+ 亞群是疾病進(jìn)展和病毒復(fù)制的預(yù)測指標(biāo)。. HIV感染當(dāng)CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)低于200個/mm3時: CD28表達(dá)下降較感染早中期更為嚴(yán)重 純真CD4+T細(xì)胞減少的速率較感染早中期明顯加快 異常的免疫激活更為嚴(yán)重,42,技術(shù)研究,T細(xì)胞免疫功能檢測在SARS診治中的應(yīng)用,43,技術(shù)研究,T細(xì)胞檢測對SARS診斷的意義,SARS病人CD4+細(xì)胞(98%)和 CD8+(80%)細(xì)胞同時減少； 發(fā)生在發(fā)病一周內(nèi)（有些發(fā)生在胸片改變之前） T細(xì)胞檢測有助于SARS的早期診斷,44,技術(shù)研究,細(xì)胞免疫功能與感染細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義,其它病毒感染 結(jié)