就是先做一個(gè)菌液濃度與OD值的標(biāo)準(zhǔn)曲線

1、就是先做一個(gè)菌液濃度與OD值的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以后測OD值的話，直接根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線就知道菌液濃度了。波長的確定，可以拿你的菌液掃個(gè)譜，找出吸收峰。一般細(xì)菌600nm，但也不一定。菌液濃度可以取一定體積的菌液，離心收集菌體，測菌體干重。或者涂板計(jì)數(shù)，也可以用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)（不提倡用）。如果測細(xì)菌。簡單說來。在細(xì)菌培養(yǎng)24小時(shí)內(nèi)。每4小時(shí)或者其他時(shí)間取樣品，用LB平板測定活細(xì)菌數(shù)量，同時(shí)測定培養(yǎng)液的OD 值。等細(xì)菌長出后。根基細(xì)菌數(shù)量和相應(yīng)OD知理論上就可以做成標(biāo)準(zhǔn)直線了。在以后的試驗(yàn)中，你可以據(jù)此，直接得出細(xì)菌數(shù)，通過OD直線。但不是所以的微生物都有這種對應(yīng)關(guān)系。原理：比濁法測菌體濃度：在菌體濃度小時(shí)，

2、菌體量（gL）與光密度OD值成正比用得最多的就是505nm測菌絲菌體、560nm測酵母、600nm測細(xì)菌。具體的g/L和OD之間好像沒有具體的數(shù)量對應(yīng)關(guān)系，這個(gè)恐怕要憑感覺1， 測OD600。以你所用的培養(yǎng)基為對照，取1毫升菌液稀釋一下，取三組連續(xù)的剃度測；2，稀釋涂平板法，取出1毫升菌液稀釋一下，取三到五組連續(xù)的剃度，涂到相應(yīng)的固體培養(yǎng)基上，12小時(shí)后數(shù)菌落數(shù)1. 使用OD600表示，則可以使用比濁法，使用分光光度計(jì)，波長600nm，參比可以是水也可以是無菌培養(yǎng)基。2. 使用稱量法，10000rpm 離心1min（in EP中 取1ml菌液），棄盡上清，稱菌濕重，烘干后則稱干重，單位是mg/

3、ml。3. 使用細(xì)菌計(jì)數(shù)板，顯微鏡鏡檢菌數(shù)，單位是個(gè)/ml1. 測OD600?每種菌的OD值不一樣吧,可以用紫外分光儀全波段掃描一下你的菌的吸收峰,只用600是不是不太穩(wěn)妥.2.最快的方法是:先做剃度稀釋,再用細(xì)菌計(jì)數(shù)板顯微鏡,這是最快的方法.3.最傳統(tǒng)的方法是剃度稀釋涂平板法,這個(gè)周期較長24小時(shí).PS:如果你的要測的較多,又沒有細(xì)菌計(jì)數(shù)板的話,我教你個(gè)節(jié)省培養(yǎng)基,較準(zhǔn)確的方法:做剃度稀釋后,用微量加樣器吸取20微升滴在平板上傾斜平板讓它自然流成一條線,(也可以直接用加樣器拉一直線),每個(gè)平板可以做3個(gè)樣品(注意不要互相污染.也可以分離到單個(gè)菌落計(jì)數(shù).你可以取一定體積的大腸桿菌培養(yǎng)液經(jīng)過離心

4、后經(jīng)過幾次洗滌后在離心，然后在將離心后的菌體放入一個(gè)稱至恒重的稱量瓶經(jīng)過干燥后稱至恒重即可大腸桿菌的菌體干重。將一定量的菌液中的菌體通過離心或過濾分離出來,然后烘干(干燥溫度可采用105、100或80)、稱重。一般干重為濕重的10%20%，而一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞一般重約10-1210-13g。該法適合菌濃較高的樣品。舉例：大腸桿菌一個(gè)細(xì)胞一般重約10121013g，液體培養(yǎng)物中細(xì)胞濃度達(dá)到2109個(gè)/ml時(shí)，100ml培養(yǎng)物可得1090mg干重的細(xì)胞研究對象的確定常以微生物的群體為研究單位來研究微生物的生長微生物的生長通常指細(xì)胞數(shù)目的增加，或細(xì)胞總重量的增加研究方法 以細(xì)菌為例細(xì)菌群體生長情況的測定方

5、法：1測細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)目 2測細(xì)菌的細(xì)胞總重量（干重或濕重）一、測生長量1、直接法：測濕重、體積（沉降量）或干重2、間接法(1)比濁法:測菌懸液稀釋液的透光值（OD值）。(2)間接成分測定：測含氮量；測C或P量；測遺傳物質(zhì)量：DNA，RNA；(3)生理指標(biāo)法：呼吸強(qiáng)度、耗氧、酶活性、生物熱等。二、計(jì)數(shù)法 1、直接計(jì)數(shù) (1)計(jì)死活總菌數(shù)：顯微鏡下計(jì)數(shù) (2)死活菌分別計(jì)數(shù)：酵母：美藍(lán)染色，活細(xì)胞無色，死細(xì)胞藍(lán)色; 細(xì)菌：丫啶橙染色，活細(xì)胞有橙色熒光，死細(xì)胞發(fā)綠色熒光。2、間接計(jì)數(shù)法： 是一種活菌計(jì)數(shù)法(1)平板菌落計(jì)數(shù)：好氧菌、厭氧菌均可（實(shí)驗(yàn)）.菌樣稀釋與培養(yǎng)基混勻澆注平板倒置培養(yǎng)統(tǒng)計(jì)菌落形

6、成單位cfu乘以稀釋倍數(shù)菌樣含菌數(shù)用活菌指示劑TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)可使菌落在短時(shí)間內(nèi)形成玫瑰紅色快速鑒定 (2)膜濾器法二微生物的生長規(guī)律（一）、微生物的個(gè)體生長與同步生長1、個(gè)體生長：一個(gè)微生物從小到大的生長過程。2、同步生長：某一群體中所有個(gè)體細(xì)胞盡可能都處于分裂步調(diào)一致的生長狀態(tài)。（二）、單細(xì)胞微生物的典型生長曲線（見下） 定量描述液體培養(yǎng)基中M群體生長規(guī)律的實(shí)驗(yàn)曲線稱為生長曲線，M典型生長曲線4個(gè)階段：1、延滯期：指細(xì)胞數(shù)目沒有增加。(1)延滯期的特點(diǎn)： 5點(diǎn)(2)影響延滯期的因素：種齡、接種量、培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件等。 2、對數(shù)期：細(xì)胞數(shù)目以幾何級數(shù)增長的時(shí)期。(1

7、)對數(shù)期的特點(diǎn)： 3點(diǎn)(2)描述對數(shù)期生長的幾個(gè)參數(shù)繁殖代數(shù)：n = lgx2 C lgx1 / lg23.322(lgx2Clgx1) 生長速率常數(shù)：R = n / t2 C t1代時(shí)：G = 1 / R = t2 C t1 / n(3)影響指數(shù)期微生物代時(shí)的因素： i ) 菌種 ii ) 營養(yǎng)成分 iii ) 營養(yǎng)物濃度： iv ) 培養(yǎng)溫度 3、穩(wěn)定期：新繁殖的細(xì)胞數(shù)與衰亡的細(xì)胞數(shù)相等。(1)穩(wěn)定期到來的原因: 4點(diǎn) (2)穩(wěn)定期的特點(diǎn)：3點(diǎn) (3)穩(wěn)定期的重要性：3點(diǎn) 4、衰亡期：微生物個(gè)體死亡速度超過新生速度。(1)衰亡期特征： (2)衰亡期出現(xiàn)的原因：微生物生長曲線的實(shí)踐意義1處于

8、對數(shù)期的細(xì)菌，生長繁殖速率快，代謝旺盛，生產(chǎn)上常用這個(gè)時(shí)期的細(xì)菌作為菌種，以縮短生產(chǎn)周期。 2進(jìn)入穩(wěn)定期后，抗生素等代謝產(chǎn)物逐漸增多如果適當(dāng)補(bǔ)充營養(yǎng)物質(zhì)，就有助于延長穩(wěn)定期、提高代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量 （三）微生物的連續(xù)培養(yǎng)1、概念 單批培養(yǎng)：按生長曲線描述的方式培養(yǎng)的方法。 連續(xù)培養(yǎng)：將新鮮培養(yǎng)基連續(xù)加入均勻攪拌的培養(yǎng)物中，保持細(xì)胞濃度、比生長速率、培養(yǎng)環(huán)境不隨時(shí)間變化，維持穩(wěn)定狀態(tài)的培養(yǎng)過程。2、連續(xù)培養(yǎng)方法：恒化器法；恒濁器法三 影響微生物生長的環(huán)境因素 1、溫度 微生物生長最旺盛時(shí)的溫度叫最適生長溫度；在最適生長溫度范圍內(nèi)，微生物的生長速率隨溫度的上升而加快；超過最適生長溫度以后，微生物的生長速率會(huì)急劇下降2 pH 每種微生物的最適pH不同：多數(shù)細(xì)菌：6.57.5；真菌：5.06.0；放線菌：7.5-8.5。超過最適pH范圍以后，影響酶的活性，細(xì)胞膜的穩(wěn)定性等3,氧氣 按照微生物與氧的關(guān)系，可分為： 專性好氧菌：氧分壓0.2Pa(10ppm),呼吸產(chǎn)能 兼性