sn 0668-1997 出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗(yàn)方法 杯碟法

SN06681997出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗(yàn)方法杯碟法SN中華人民共和國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN06681997出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗(yàn)方法杯碟法METHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORT一CYLINDERPLATEMETHOD19970815發(fā)布19980101實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家進(jìn)出口商品檢驗(yàn)局發(fā)布SN0668一1997前言本標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)GB/T111993標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1單元標(biāo)準(zhǔn)的起草與表述規(guī)則第1部分標(biāo)準(zhǔn)編寫的基本規(guī)定及SN/T00011995出口商品中農(nóng)藥、獸藥殘留量及生物毒素檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)編寫的基本規(guī)定的要求進(jìn)行編寫的。其中測(cè)定方法采用了日本厚生省1990年編寫的畜、水產(chǎn)食品中的殘留物質(zhì)檢驗(yàn)方法中的枯菌素檢驗(yàn)方法。技術(shù)內(nèi)容上稍作改變，經(jīng)驗(yàn)證后，按規(guī)定格式要求作了編輯性修改。在標(biāo)準(zhǔn)中同時(shí)制定了抽樣和制樣方法。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是標(biāo)準(zhǔn)的附錄。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄9B是提示的附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)國(guó)家進(jìn)出口商品檢驗(yàn)局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)浙江進(jìn)出口商品檢驗(yàn)局負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人費(fèi)飛金、高雯潔。本標(biāo)準(zhǔn)系首次發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN06681997前言本標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)GB/T111993標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1單元G標(biāo)準(zhǔn)的起草與表述規(guī)則第1部分2標(biāo)準(zhǔn)編寫的基本規(guī)定及SN/T0001一1995出口商品中農(nóng)藥、獸藥殘留量及生物毒素檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)編寫的基本規(guī)定的要求進(jìn)行編寫的。其中測(cè)定方法采用了日本厚生省1990年編寫的畜、水產(chǎn)食品中的殘留物質(zhì)檢驗(yàn)方法中的粘菌素檢驗(yàn)方法技術(shù)內(nèi)容上稍作改變，經(jīng)驗(yàn)證后，按規(guī)定格式要求作了編輯性修改在標(biāo)準(zhǔn)中同時(shí)制定了抽樣和制祥方法。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是標(biāo)準(zhǔn)的附錄本標(biāo)準(zhǔn)的附錄B是提示的附錄本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)國(guó)家迸出口商品檢驗(yàn)局提出并歸口本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)浙江迸出口商品檢驗(yàn)局負(fù)責(zé)起草本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人費(fèi)飛金、高雯潔本標(biāo)準(zhǔn)系首次發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。中華人民共和國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗(yàn)方法杯碟法METHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORTCYLINDERPLATEMETHODSN0668一1997范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗(yàn)的抽樣、制樣和杯碟測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于出口鴨肉中粘菌素殘留量的檢驗(yàn)。抽樣和制樣21檢驗(yàn)批以不超過2500件為一檢驗(yàn)批。同一檢驗(yàn)批的商品應(yīng)具有相同的特征，如包裝、標(biāo)記、產(chǎn)地、規(guī)格和等級(jí)等。22抽樣數(shù)量批量，件最低抽樣數(shù)，件12512610051012501025150015501100017100125002023抽樣方法按22規(guī)定的抽祥件數(shù)隨機(jī)抽取，逐件開啟。每件至少取500G或一袋作為原始樣品，抽取的原始樣品總量不少于2KG，放入清潔容器內(nèi)，加封后，標(biāo)明標(biāo)記，及時(shí)送交實(shí)驗(yàn)室。24試樣制備從所取回的原始樣品中取出部分有代表性樣品，將可食部分放人絞碎機(jī)中絞碎，充分混勻。用四分法縮分至不少于500G作為試樣。裝入清潔容器內(nèi)，加封后標(biāo)明標(biāo)記。25試樣保存將試樣于一18以下冷凍保存。注在抽樣及制樣的操作過程中，必須防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。測(cè)定方法方法提要用磷酸鹽緩沖液抽提試祥中殘留的粘菌素，經(jīng)均質(zhì)、離心，取上清液進(jìn)行杯碟法測(cè)定。利用樣液中的中華人民共和國(guó)國(guó)家進(jìn)出口商品檢驗(yàn)局19970815批準(zhǔn)1998一01一01實(shí)施I食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENET中華人民共和國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗(yàn)方法杯碟法SN066819971范圍METHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORT一CYLINDERPLATEMETHOD本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了出口肉及肉制品中粘菌素殘留量檢驗(yàn)的抽樣、制樣和杯碟測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于出口鴨肉中粘菌素殘留量的檢驗(yàn)。2抽樣和制樣21檢驗(yàn)批以不超過2500件為一檢驗(yàn)批。同一檢驗(yàn)批的商品應(yīng)具有相同的特征，如包裝、標(biāo)記、產(chǎn)地、規(guī)格和等級(jí)等。22抽樣數(shù)量批量，件最低抽樣數(shù)，件125261001012501025150015501100017100125002023抽樣方法按22規(guī)定的抽樣件數(shù)隨機(jī)抽取，逐件開啟。每件至少取500G或一袋作為原始樣品，抽取的原始樣品總量不少于2KG，放入清潔容器內(nèi)，加封后，標(biāo)明標(biāo)記，及時(shí)送交實(shí)驗(yàn)室。24試樣制備從所取田的原始樣品中取出部分有代表性樣品，將可食部分放入絞碎機(jī)中絞碎，充分混勻。用四分法縮分至不少于500G作為試祥裝入清潔容器內(nèi)，加封后標(biāo)明標(biāo)記。25試樣保存將試樣于18C以下冷凍保存。注在抽樣及制樣的操作過程中必須防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化3測(cè)定方法31方法提要用磷酸鹽緩沖液抽提試樣中殘留的粘菌素，經(jīng)均質(zhì)、離心，取上清液進(jìn)行杯碟法測(cè)定。利用樣液中的中華人民共和國(guó)國(guó)家進(jìn)出口商品位驗(yàn)局19970815批準(zhǔn)19980101實(shí)施SN0668一1997殘留粘菌素與支氣管敗血性博代氏桿菌的作用，根據(jù)產(chǎn)生抑菌圈的大小用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。32試劑和材料除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。321枯菌素甲基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品已知效價(jià)標(biāo)準(zhǔn)品。1PG相當(dāng)于。613PG粘菌素。322緩沖液IPH6。士。1,稱取800G無水磷酸二氫鉀溶于700ML水中，另取200G無水磷酸氫二鉀溶于300ML水中，兩者混合，于121高壓滅菌15MIN,323緩沖液QPH60士01稱取800G無水磷酸二氫鉀溶于700ML水中，另取200G無水磷酸氫二鉀溶于300ML水中，兩者混合。稱取鐵氰化鉀以。2比例溶解于該溶液中。324試驗(yàn)菌種支氣管敗血性博代氏桿菌BRNDETELLABRONCHISEPTICA，由美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌株收藏中心提供，菌株號(hào)ATCC4617,325粘菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稱取適量的粘菌素甲基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品精確到。1MG，用緩沖液工溶解并制備成濃度為1000PG/ML的粘菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。置4C保存，可使用8天。326粘菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液分別吸取一定量枯菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用緩沖液I稀釋成濃度為。0125,0025,005,01,02PG/ML的粘菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液。需當(dāng)日配制和使用。327培養(yǎng)基I見附錄A中AD328培養(yǎng)基見附錄A中A2,3,29培養(yǎng)基M見附錄A中A3,33儀器和設(shè)備33門培養(yǎng)皿內(nèi)徑90MM，底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿，具陶瓦蓋。332牛津杯不銹鋼圓筒，外徑80101MM，內(nèi)徑60士01MM，高度100士01MM,333游標(biāo)卡尺測(cè)量范圍。200MM,精度。02MM，或抑菌圈測(cè)量?jī)x。334絞碎機(jī)電動(dòng)。335均質(zhì)器不低于10000R/MIN,336離心機(jī)不低于4000R/MIN,337恒溫培養(yǎng)箱36士1C，擱板應(yīng)保持水平。33,8高壓滅菌器。339恒溫水浴鍋恒溫士1C。34測(cè)定步驟341祥液制備稱取100G試樣精確至。1G于均質(zhì)杯內(nèi)，加入10ML緩沖液II，攪勻，放置60MIN。均質(zhì)2MIN10000R/MIN后，放入水浴鍋中煮沸3MIN。移入離心管中離心不少于10MIN4000R/MIN以上，取出上清液。在殘?jiān)性偌?0ML緩沖液Q，按上述方法均質(zhì)、離心，取出上清液。合并兩次上清液，并定容為20M1_作為樣液。342菌懸液的制備將支氣管敗血性博代氏桿菌接種于培養(yǎng)基F制成的試管斜面上于361C培養(yǎng)1624H后，再轉(zhuǎn)種到培養(yǎng)基II中，于36土1C培養(yǎng)1624H，制成菌懸液使用時(shí)注意搖勻。343菌懸液最佳用星測(cè)定測(cè)試前應(yīng)先用。025PG/ML粘菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液，對(duì)上述菌懸素液進(jìn)行預(yù)測(cè)試。以不同量的菌懸液加入經(jīng)熔化并冷卻至4550C的培養(yǎng)基11中，充分混合，并經(jīng)36士1C培養(yǎng)17士1H后，選擇能使該標(biāo)準(zhǔn)工作液產(chǎn)生直徑大于等于10MM清晰完整的抑菌圈的菌懸液加入量，即為菌懸液的最佳用量。344檢定平板制備將培養(yǎng)基M熔化，注20ML于滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)保持水平，待其凝固，作為基層。另取培養(yǎng)基Z熔化，冷卻至45SOC，加入上述測(cè)得的最佳菌懸液用量，充分混合，取約4ML注入已鋪有基層培養(yǎng)基的平板食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN06681997殘留粘菌素與支氣管敗血性博代氏桿菌的作用，根據(jù)產(chǎn)生抑菌圈的大小用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量32試劑和材料除另有規(guī)定外所用試劑均為分析純，水為蒸館水。321粘菌素甲基磺酸納標(biāo)準(zhǔn)品己知效價(jià)標(biāo)準(zhǔn)品。1月相當(dāng)于0613G粘菌素。322緩沖液1,PH60101稱取800G無水磷酸二氫御溶于700ML水中，另取200G無水磷酸氫二御溶于300ML水中，兩者混合，于121C高壓滅菌15MIN323緩沖液1,PH60土01。稱取800G無水磷酸二氫餌溶于700ML水中，另取200G無水磷酸氫二梆溶于300ML水中，兩者混合。稱取鐵氟化餌以02比例溶解于該溶液中。324試驗(yàn)菌種3支氣管敗血性博代氏桿菌BRDETELLAHRANCHISE戶TICA，由美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌株收藏中心提供，菌株號(hào)ATCC4617。325粘菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稱取適量的粘菌素甲基硫酸錦標(biāo)準(zhǔn)品精確到01MG，用緩沖液I溶解并制備成濃度為1000問/ML的粘菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。置4C保存，可使用8天。326粘菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液2分別吸取一定量粘菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用緩沖液I稀釋成濃度為00125、0025、O町、01、02G/ML的粘菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液。需當(dāng)日配制和使用。327培養(yǎng)基1見附錄A中A1。328培養(yǎng)基H見附錄A中A2。329培養(yǎng)基M見附錄A中A3。33儀器和設(shè)備331培養(yǎng)皿內(nèi)徑90MM，底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿，具陶瓦蓋。332牛津杯不銹鋼圓筒，外徑80士0MM內(nèi)徑60士01MM，高度000101MM333游標(biāo)卡尺測(cè)量范圍。200MM，精度。02MM，或抑菌圈測(cè)量?jī)x。334絞碎機(jī)電動(dòng)。335均質(zhì)器不低于10000R/MIN336離心機(jī)不低于4000R/MIN。337恒溫培養(yǎng)箱361C，擱板應(yīng)保持水平。338高壓滅茜器E339恒溫水浴鍋恒溫土1C34測(cè)定步驟341佯液制備稱取100G試祥精確至01G于均質(zhì)杯內(nèi)，加入10ML緩I中液N，攪勻，放置60MINT均質(zhì)2MINO000R/MIN后，放入水浴鍋中煮沸3MIN移入離心管中離心不少于10MIN4000R/MIN以上，取出上清液。在殘?jiān)性偌?0ML緩沖液N，按上述方法均質(zhì)、離心，取出上清液甸合并兩次上清液，并定容為20ML作為樣液。342菌懸液的制備將支氣管敗血性博代氏桿菌接種于培養(yǎng)基I制成的試管斜窗上于36士1C培養(yǎng)1624H后，再轉(zhuǎn)種至IJ培養(yǎng)基E中，于36士1C培養(yǎng)1624H，制成茵懸液使用時(shí)注意搖勻。343菌懸液最佳用最測(cè)定測(cè)試前應(yīng)先用0025月/ML粘菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液，對(duì)上述菌懸素液進(jìn)行預(yù)測(cè)試。以不同量的菌懸液加入經(jīng)熔化并冷卻至4550C的培養(yǎng)基E中，充分混合，并經(jīng)36士1C培養(yǎng)0711H后，選擇能使該標(biāo)準(zhǔn)工作液產(chǎn)生直徑大于等于10MM清晰完整的抑菌圈的菌懸液加入量，即為菌懸液的最佳用量。344儉定平板制備將培養(yǎng)基E熔化，注20ML于滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)保持水平，待其凝固，作為基層。另取培養(yǎng)基E熔比，冷卻至4550C，加入上述四H導(dǎo)的最佳菌懸液用量，充分混合，取約4ML主入已鋪有基層培養(yǎng)基的平板SN0668一1997中作種層，保持水平，使其凝固，制成檢定用的平板。所用平板需當(dāng)天制備。345標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用粘菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液326繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以。05PG/ML濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液為參考濃度以00125PG/ML濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液作陰性對(duì)照用。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度取三個(gè)檢定平板作為一組每個(gè)平板上置4個(gè)牛津杯，使牛津杯在半徑為25CM的圓面成900角間距，對(duì)角兩個(gè)杯中注滿005PG/ML參考濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液，另兩個(gè)對(duì)角杯中注滿其他濃度的一種標(biāo)準(zhǔn)工作液。4個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液共12個(gè)檢定平板，用于制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。其中005PG/ML參考濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液將得到24個(gè)抑菌圈直徑的數(shù)值，而其他標(biāo)準(zhǔn)工作液分別得到6個(gè)抑菌圈直徑的數(shù)值。蓋好平皿蓋，置36士1培養(yǎng)17士1H,翻轉(zhuǎn)平板，除去牛津杯，測(cè)量各個(gè)濃度產(chǎn)生的抑菌圈直徑精確到。1MM，求得各自的平均值。再求出。05PG/ML參考濃度24個(gè)抑菌圈直徑的平均值。用參考濃度的抑菌圈直徑的總平均值減去每組平板參考濃度的抑菌圈直徑平均值的差，即為各組平板的校正值。將校正后的值用式1和式2算出L和H點(diǎn)的直徑值，在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上，以抑菌圈直徑為橫坐標(biāo)算術(shù)級(jí)，粘菌素濃度為縱坐標(biāo)對(duì)數(shù)級(jí)，通過L和H點(diǎn)連一直線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。7A4BC一2D1017D十4CB一2A102式中L標(biāo)準(zhǔn)曲線上最低濃度抑菌圈的直徑，MMH標(biāo)準(zhǔn)曲線上最高濃度抑菌圈的直徑，MMB參考濃度。05PG/ML的24個(gè)抑菌圈直徑的平均值，MMA,C,D分別表示標(biāo)準(zhǔn)曲線上其他標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度0025,01,02PG/ML的抑菌圈直徑經(jīng)校正后的平均值，MM,346樣液的測(cè)定每份祥液取3個(gè)檢定平板在每個(gè)平板上置4個(gè)已滅菌的牛津杯按制備標(biāo)準(zhǔn)曲線方法放置，在對(duì)角的2只牛津杯里注滿被檢樣液，在剩余的2只牛津杯里分別注滿粘菌素參考濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液即005PG/ML。于36士1C培養(yǎng)17士1H,翻轉(zhuǎn)平板，除去牛津杯。如有抑菌圈產(chǎn)生，量取抑菌圈直徑精確到01MM35結(jié)果的計(jì)算和表述如樣液抑菌圈的直徑小于10MM，即報(bào)告為“陰性”。如樣液抑菌圈的直徑大于等于10MM，求出每組三個(gè)檢定平板上樣液和參考濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液抑菌圈直徑的平均值，經(jīng)校正后，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的粘菌素的濃度，通過式3，計(jì)算試樣中粘菌素殘留的含量3式中X試樣中粘菌素殘留的含量,MG/KGC從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣液中粘菌素濃度，KG/ML。每毫升最終徉液所代表的試樣量,G注如測(cè)定結(jié)果呈陽(yáng)性，即所顯的抑菌圈直徑的平均值大于等于10MM必要時(shí)尚需進(jìn)行確證試驗(yàn)可用薄層層析法，參見附錄T3以證明抑菌物確系粘菌素。測(cè)定低限和回收率測(cè)定低限本方法的測(cè)定低限為。05MG/KG回收率食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN06681997中作種層，保持水平，使其凝固制成檢定用的平板所用平板需當(dāng)天制備345標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用粘菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液326繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線以005G/ML濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液為參考濃度以00125何/ML濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液作陰性對(duì)照用每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度取三個(gè)檢定平板作為一組，每個(gè)平板上置4個(gè)牛津杯，使牛津杯在半徑為25CM的困面成90角間距，對(duì)角兩個(gè)杯中注滿005月/ML參考濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液，另兩個(gè)對(duì)角杯中注滿其他濃度的一種標(biāo)準(zhǔn)工作液。4個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液共12個(gè)檢定平板，用于制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。其中005G/ML參考濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液將得到24個(gè)抑菌圈直徑的數(shù)值，而其他標(biāo)準(zhǔn)工作液分別得到U6個(gè)抑菌圈直徑的數(shù)值。蓋好平皿蓋，置36土1C培養(yǎng)17J1H，翻轉(zhuǎn)平板除去牛津杯，測(cè)量各個(gè)濃度產(chǎn)生的抑菌圈直徑精確J1JO1MM，求得各自的平均值。再求出005G/ML參考濃度24個(gè)抑菌圍直徑的平均值用參考濃度的抑菌圈直徑的總平均值減去每組平板參考濃度的抑菌圈直徑平均值的差，即為各組平板的校正值。將校正后的值用式1和式2算出L和H點(diǎn)的直徑值，在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上，以抑菌圈直徑為橫坐標(biāo)算術(shù)級(jí)，粘菌素濃度為縱坐標(biāo)對(duì)數(shù)級(jí)，通過L和H點(diǎn)連一直線RP為標(biāo)準(zhǔn)曲線。L一7A4BC2D10H一7D4CB一2A10式中L一一標(biāo)準(zhǔn)曲線上最低濃度JLJ菌圈的直徑，MMH一一標(biāo)準(zhǔn)曲線上最高濃度抑菌圈的直徑，MMB一一參考濃度005月/ML的24個(gè)抑菌圈直徑的平均值，MM12A，C、D一一分別表示標(biāo)準(zhǔn)曲線上其他標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度0025、01、02問IML的抑菌圈直徑經(jīng)校正后的平均值，MM。346樣液的測(cè)定每份樣液取3個(gè)檢定平板在每個(gè)平板上置4個(gè)己滅菌的牛津杯按制備標(biāo)準(zhǔn)曲線方法放置，在對(duì)角的2只牛津杯里注滿被檢樣液，在剩余的2只牛津杯里分別注滿粘菌素參考濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液即005噸/ML。于36士1C培養(yǎng)L7J1H，翻轉(zhuǎn)平板，除去牛津杯。如有抑菌圈產(chǎn)生，量取抑菌圈直徑精確J1J01MM35結(jié)果的計(jì)算和表述如樣液抑菌圈的直徑小于10MM，即報(bào)告為陰性。如樣液抑菌固的直徑大于等于10MRN，求出每組三個(gè)儉定平板上樣液和參考濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液抑菌圈直徑的平均值，經(jīng)校正后，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的粘菌素的濃度，通過式3，計(jì)算試祥中粘菌素殘留的含量X二3式中X試樣中粘菌素殘留的含量，MG/KGC從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣液中粘菌素濃度，F(xiàn)G/MLM一一每毫升最終佯液所代表的試樣量，G。注G如測(cè)定結(jié)果呈陽(yáng)性N所里的抑菌圈直徑的平均值大于等于10MM必要時(shí)尚需進(jìn)行確證試驗(yàn)可用薄層層析法，參見附錄BJ以證明仰菌物確果粘菌素。4測(cè)定低限和回收率41測(cè)定低限本方法的測(cè)定低限為005MG/KG,42回收率SN0668一1997鴨肉中枯菌素添加濃度及其回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)0050MG/KG時(shí)，回收率為780寫，0100MG/KG時(shí)，回收率為8500200MG/KG時(shí)，回收率為GOOE食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN06681997鴨肉中粘菌素添加濃度及其回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)20050MG/KG時(shí)，回收率為780，0100MG/同時(shí)，回收率為850，0200MG/同時(shí)，回收率為900SN0668一1997附錄A標(biāo)準(zhǔn)的附錄培養(yǎng)基K1培養(yǎng)基I蛋白陳100G牛肉浸膏50G抓化鈉259瓊脂150G水1000ML將上述成分于水中加熱溶解，調(diào)節(jié)PH使其滅菌后PH為65士。1，分裝于試管或克氏瓶中，于121高壓滅菌15MIN。滅菌后可制成斜面。A2培養(yǎng)荃I蛋白豚100G牛肉浸膏509氯化鈉25G水1OOOML將上述成分溶解于水中，調(diào)節(jié)PH使其滅菌后PH為7。士。1，分裝于試管或克氏瓶中，于121C高壓滅菌15MINA3培養(yǎng)垂，蛋白陳170G氯化鈉50G葡萄塘259磷酸氫二鉀259木瓜酶水解大豆30G瓊脂120G水1000ML將上述成分于水中加熱溶解，調(diào)節(jié)PH使其滅菌后PH為73士。1，分裝于錐形瓶中，于121高壓滅菌15MIN附錄B提示的附錄確證試驗(yàn)確證試驗(yàn)采用薄層層析法，用粘菌素標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，求R，值，以確證試樣中是否存在粘菌素。薄層層析條件薄層板硅膠G板點(diǎn)樣量50TAL點(diǎn)狀。展開劑丙酮一水1十1食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN0668一1997A1地弊基I蛋白陳100G牛肉浸膏50G氯化鏘25G瓊脂150G水1000ML附錄A標(biāo)準(zhǔn)的附錄蠟基將上述成分于水中加熱溶解，調(diào)節(jié)PH使其滅菌后PH為65士01，分裝于試管或克氏瓶中，于121C高壓滅菌15MIN滅菌后可制成斜面A2培養(yǎng)基E蛋白煉100G牛肉漫膏50G氯化銷25G水1000ML將上述成分溶解于水中，調(diào)節(jié)PH使其滅菌后PH為70土0，1，分裝于試管或克氏瓶中，于121C高壓滅菌15MINOA3膏，豐基E蛋白陳170G氯化納50G葡萄糖25G磷酸氫二錚25G木瓜酶水解大豆30G瓊脂120G水1000ML將上述成分于水中加熱溶解，調(diào)節(jié)PH使其滅菌后PH為73士0，1，分裝于錐形瓶中，于121C高壓滅菌15MINO附錄B提示的附錄確證試驗(yàn)確證試驗(yàn)采用薄層層析法，用粘菌素標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，求RI值，以確證試樣中是否存在粘菌素。薄層層析條件薄層板G硅膠G板點(diǎn)樣量，50L點(diǎn)狀展開JFTJ，丙翻水110SX0668一1997展開在飽和槽內(nèi)進(jìn)行顯色劑。5MTV布三酮丙酮溶液。檢測(cè)噴灑顯色劑布三酮溶液，反應(yīng)時(shí)間約5MIN食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN06681997展開Z在飽和槽內(nèi)進(jìn)行顯色1FJO5V茍三閣丙嗣溶液檢測(cè)Z噴灑顯包劑茍三爵溶液，反應(yīng)時(shí)間約5MINOSN0668一1997FOREWORDTHISSTANDARDWASDRAFTEDINACCORDANCEWITHTHEREQUIREMENTSOFGB/T111993DIRECTIVESFORTHEWORKOFSTANDARDIZATIONUNIT1DRAFTINGANDPRESENTATIONOFSTANDARDSPART1GENERALRULESFORDRAFTINGSTANDARDSANDSN/T00011995GENERALRULESFORDRAFTINGTHESTANDARDMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFPESTICIDE,VETERINARYDRUGRESIDUESANDBIOTOXINSINCOMMODITIESFOREXPORTTHISSTANDARDADOPTSTHERELEVANTMETHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINTHEMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFRESIDUESINANIMALANDAQUATICFOODS1990ED,APUBLICATIONOFMINISTRYOFPUBLICHEALTHOFJAPAN,ASTHEMETHODOFDETERMINATION,WHICHISTECHNICALLYEQUIVALENTTOTHATOFTHEORIGINAL,BUTWITHSLIGHTMODIFICATIONAFTERGOINGTHROUGHVERIFICATIONTHESTANDARDWASDRAFTEDACCORDINGTOTHEEDITORIALREQUIREMENTSFORTHESTIPULATEDFORMATINADDITIONTHEMETHODSOFSAMPLINGANDSAMPLEPREPARATIONAREALSOSPECIFIEDINTHISSTANDARDANNEXAOFTHISSTANDARDISANORMATIVEANNEXANNEXBOFTHISSTANDARDISANINFORMATIVEANNEXTHISSTANDARDWASPROPOSEDBYANDISUNDERTHECHARGEOFTHESTATEADMINISTRATIONOFIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINATHISSTANDARDWASDRAFTEDBYTHEZHEJIANGIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONBUREAUOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINATHISSTANDARDWASMAINLYDRAFTEDBYFEIFEIJIN,GAOWENJIETHISSTANDARDISAPROFESSIONALSTANDARDPROMULGATEDFORTHEFIRSTTIMENOTETHISENGLISHVERSION,ATRANSLATIONFROMTHECHINESETEXT,ISSOLELYFORGUIDANCE食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN0668一1997FOREWORDTHISSTANDARDWASDRAFTEDINACCORDANCEWITHTHEREQUIREMENTSOFGB/T11一1993DIRECTIVESFORTHEWORKOFSTANDARDIZATIONUNIT1DRAFTINGANDPRESENTATIONOFSTANDARDSPART1GENERALRULESFORDRAFTINGSTANDARDSANDSN/TOOOL1995GENERALRULESFORDRAFTINGTHESTANDARDMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFPESTICIDE,VETERINARYDRUGRESIDUESANDBIOTOXINSINCOMMODITIESFOREXPORTTHISSTANDARDADOPTSTHERELEVANTMETHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINTHEMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFRESIDUESINANIMALANDAQUATICFOODS0990EDAPUBLICATIONOFMINISTRYOFPUBLICHEALTHOFJAPANASTHEMETHODOFDETERMINATIONWHICHISTECHNICALLYEQUIVALENT怕也ATOFTHEORIGINALBUTWITHSLIGHTMODIFICATIONAFTERGOINGTHROUGHVERIFICATIONTHESTANDARDWASDRAFTEDACCORDINGTOTHEEDITORIALREQ山REMENTSFORTHESTIPULATEDFORMATINADDITIONTHEMETHODSOFSAMPLINGANDSAMPLEPREPARATIONAREAL50SPECIFIEDINTHISSTANDARDANNEXAOFTHISSTANCLARDISANORMATIVEANNEXANNEXBOFTHISSTANDARDISANNFORMATIVEANNEXTHISSTANDARDWASPROPOSEDBYANDISUNDERTHECHARGEOFTHESTATEADMINISTRATIONOFIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINATHISSTANDARDWASDRAFTEDBYTHEZHEJIANGIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONBUREAUOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINATHISSTANDARDWASMAINLYDRAFTEDBYFEIFEIJINGAOWENJIETHISSTANDARDISAPROFESSIONALSTANDARDPROMULGATEDFORTHEFIRSTTIMENOTETHISENGLISHVERSION,ATRANSLATIONFROMTHECHINESETEXTISSOLELYFORGUIDANCEPROFESSIONALSTANDARDOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINAFORIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONMETHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLITINRESIDUESSN0668一1997INMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORTCYLINDERPLATEMETHOD1SCOPETHISSTANDARDSPECIFIESTHEMETHODSOFSAMPLING,SAMPLEPREPARATIONANDDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESBYCYLINDERPLATEMETHODINMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORTTHISSTANDARDISAPPLICABLETOTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINDUCKMEATFOREXPORT2SAMPLINGANDSAMPLEPREPARATION21INSPECTIONLOTTHEQUANTITYOFANINSPECTIONLOTSHOULDNOTBEMORETHAN2500PACKAGESTHECHARACTERISTICSOFTHECARGOWITHINTHESAMEINSPECTIONLOT,SUCHASPACKING,MARK,ORIGIN,SPECIFICSTIONANDGRADE,SHOULDBETHESAME22QUANTITYOFSAMPLETAKENNUMBEROFPACKAGESINEACHINSPECTIONLOTMINIMUMNUMBEROFPACKAGESTOBETAKEN12512610051012501025150015501100017100125002023METHODOFSAMPLETAKENANUMBEROFPACKAGESSPECIFIEDIN22ARETAKENATRANDOMANDOPENEDONEBYONEFROMEACHATLEAST500GORONEBAGSHALLBETAKENASPRIMARYSAMPLETHETOTALWEIGHTOFALLPRIMARYSAMPLESSHOULDNOTBELESSTHAN2KG,WHICHISTHENPLACEDINACLEANCONTAINER,SEALED,LABELEDANDSENTTOTHELABORATORYINTIME24PREPARATIONOFTESTSAMPLEAPARTOFREPRESENTATIVESAMPLESHALLBETAKENFROMTHEMIXEDPRIMARYSAMPLE,THEEDIBLEPORTIONSAREHOMOGENIZEDBYGRINDINGINAMEATGRINDERTHEHOMOGENIZEDSAMPLEISTHOROUGHLYMIXEDANDREDUCEDTOATLEAST500GBYQUARTERINGASTHETESTSAMPLETHETESTSAMPLEISPLACEDINACLEANCONTAINER,WHICHISTHENSEALEDANDLABELED25STORAGEOFTESTSAMPLEAPPROVEDBYTHESTATEADMINISTRATIONOFIMPORTIMPLEMENTEDFROMJAN1,1998ANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINAONAUG15,19978食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETPROFESSIONALSTANDARDOFTHEPEOPLESREPUBLICOFCHINAFORIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTIONMETHODFORTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESSN06681997INMEATSANDMEATPRODUCTSFOREXPORT一CYLINDERPLATEMETHOD1SCOPETHISSTANDARDSPECILIESTHEMETHODS01SAMPLINGSAMPLEPREPARATIONANDDETERMINATION01COLISTINRESIDUESBYCYLINDERPLATEMETHODINMEATSANDMEATPRODUCTSLOREXPORTTHISSTANDARDISAPPLICABLETOTHEDETERMINATIONOFCOLISTINRESIDUESINDUCKMEATFOREXPORT2SAMPLINGANDSAMPLEPREPARATION21INSPECTIONLOTTHEQUANTITY01ANINSPECTIONLOTSHOULDNOTBEMORETHAN2500PACKAGESTHECHARACTERISTICSOFTHECARGOWITHINTHESAMEINSPECTIONLOT,SUCHASPACKING,MARK,ORIGIN,SPECIFICATIONANDGRADESHOUDBETHESAME22QUANTITY01SAMPLETAKENNUMBEROFPACKAGESINEACHINSPECTIONLOTMINIMUMNUMBEROFPACKAGESTOBETAKEN12526100101250251500501100010012500NUM氣JV巾NULL223METHOD01SAMPETAKENANUMBER01PACKAGESSPECIFIEDIN22ARETAKENATRANDOMANDOPENEDONEBYONEFROMEACHATEAST500GORONEBAGSHA11BETAKENASPRIMARYSAMPLETHETOTALWEIGHT01A11PRIMARYSAMPESSHOUDNOTBELESSTHAN2KG,WHICHISTHENPLACEDINACLEANCONTAINER,SEALED,LABELEDANDSENTTOTHELABORATORYINTIME24PREPARATION01TESTSAMPLEAPART01REPRESENTATIVESAMPLESHA11BETAKENIROMTHEMIXEDPRIMARYSAMPLETHEEDIBLEPORTIONSAREHOMOGENIZEDBYGRINDINGINAMEATGRINDERTHEHOMOGENIZEDSAMPEISTHOROUGHYMIXEDANDREDUCEDTOATEAST500GBYQUARTERINGASTHETESTSAMPETHETESTSAMPEISPLACEDINACLEANCONTAINERWHICHISTHENSEAEDANDABEED25STORAGE01TESTSAMPEAPPROVEDBYTHESTATEADMINISTRATLONOFIMPORTANDEXPORTCOMMODITYINSPECTLONORTHEPEOPLESREPUBLICORCHLNAONAUG151997IMPLEMENTEDFROMJAN11998SN0668一1997THETESTSAMPLESHOULDBESTOREDBELOW一18CNOTE,INTHECOURSEOFSAMPLINGANDSAMPLEPREPARATION,PRECAUTIONSMOSTBETAKENTOAVOIDCONTAMINATIONORANYFACTORSWHICHMAYCAUSETHECHANGEOFRESIDUECONTENT3METHODOFDETERMINATION11PRINCIPLETHECOLISTINRESIDUESINTHETESTSAMPLEAREEXTRACTEDWITHPHOSPHATEBUFFERSOLUTIONAFTERHOMOGENIZING,ANDCENTRIFUGING,CYLINDERPLATEMETHODISUSEDTODETERMINETHECOLISTININTHESUPERNATANT,WHICHISMADEREACTEDWITHBORDETELLABRONCHISEPTICWITHFORMATIONOFINHIBITIONZONEQUANTITATIONISMADEBYMEASURINGTHESIZEOFINHIBITIONZONE,USINGSTANDARDCURVEMETHOD12REAGENTSANDMATERIALSUNLESSOTHERWISESPECIFIEDALLREAGENTSUSEDSHOULDBEANALYTICALLYPURE,WATERISDISTILLEDWATER121COLISTINSODIUMMETHANESULFONATESTANDARDSTANDARDOFKNOWNPOTENCY1YGISEQUALTO0613MGOFCOLISTIN322BUFFERSOLUTIONIPH60土01DISSOLVE8O0GOFANHYDROUSPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN700MLOFWATERANDDISSOLVE200GOFANHYDROUSDIPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN300MLOFWATERMIXANDAUTOCLAVEAT121CFOR15MIN323BUFFERSOLUTIONIPH60士01DISSOLVE800GOFANHYDROUSPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN700MLOFWATERANDDISSOLVE200GOFANHYDROUSDIPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN300MLOFWATERMIXANDADD020OOFPOTASSIUMFERRICYANIDETOTHEMIXTURE,STIRTODISSOLVE124TESTSTRAINBORDETELLABRONCHISEPTIC,ATCC4617PROVIDEDBYTHEAMERICANTYPECULTURECOLLECTION325COLISTINSTANDARDSTOCKSOLUTIONACCURATELYWEIGHACCURATETO01MGAPROPERQUANTITYOFCOLISTINSODIUMMETHANESULFONATESTANDARDANDDISSOLVEINBUFFERSOLUTIONITOPREPAREASTANDARDSTOCKSOLUTIONOF1000PGCOLISTIN/MLINCONCENTRATIONSTOREINAREFRIGERATORAT4C，WHICHCANBEUSEDWITHIN8DAYS126COLISTINSTANDARDWORKINGSOLUTIONPIPETASERIESOFCOLISTINSTANDARDSTOCKSOLUTION,ANDDILUTESEPARATELYWITHBUFFERSOLUTIONITOPREPAREASERIESOFSTANDARDWORKINGSOLUTIONSOF001250025,005,01,02PG/MLINCONCENTRATIONS,WHICHSHOULDBEUSEDONTHESAMEDAYOFPREPARATION327MEDIUMISEEALINANNEXA328MEDIUMNSEEA2INANNEXA329MEDIUMMSEEA3INANNEXA33APPARATUSANDEQUIPMENT331CULTUREDISH90MMID,GLASSORPLASTICDISHESWITHSMOOTHANDFLATBOTTOMANDWITHCLAYCOVER332OXFORDCUPSTAINLESSSTEELCYLINDERS,80士。1MMOD,60士01MMID,HEIGHT10。土01MM333VERNIERCALIPERMEASURINGRANGE0200MM,PRECISION002MMORMETERFORMEASURINGTHEINHIBITIONZONE334MEATGRINDERELECTRIC335HOMOGENIZERNOTLESSTHAN10000R/MIN336CENTRIFUGENOTLESSTHAN4000R/MIN337INCUBATOR36士1C,THESHELFMUSTBEKEPTHORIZONTALI18AUTOCLAVE食品伙伴網(wǎng)/FOODMATENETSN06681997THE膽STSAMPLESHOULDBESTOREDBELOW18CNOTE,INTHECQUR陋。F回RNPLINGANDSAMPLEPREPARATIONPECAUTIONSRNO哨BETAKENTOAVODCONTAMINATIONORANYFACTORSWHICHMAYCAUSETHECHANGEOFRESIDUECONTENT3METHODOFDETERMLNATION3甸PRINCIPLETHECOLISTINRESIDUESINTHETESTSAMPLEAREEXTRACTEDWITHPHOSPHATEBUFFERSOLUTIONAFTERHOMOGENZING,ANDCENTRIFUGING,CYLINDERPLATEMETHODISUSEDTODETERMINETHECOLISTININTHESUPERNATANT,WHICHSMADEREACTEDWITHB曠DETELLAHRONCHSEPTICWITHFORMATONOFINHIBITIONZONEQUANTITATIONISMADEBYMEASURNGTHESZEOFINHIBITIONZONE,USINGSTANDARDCURVEMETHOD32REAGENTSANDMATERIALSUNLESSOTHERWISESPECIFIEDAUREAGENTSUSEDSHOULDBEANALYTICALLYPURE,WATERISDSTILLEDWATER321COLISTIN四DIUMMETHANESULFONATES阻NDARDSTANDARDOFKNOWNP。但NCY1GISEQUALTOO613G。FCOLISTIN322BUFFERSOUTIONIPH60土O1DISSOLVE800GOFANHYDROUSPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN700MLOFWATERANDDISSOLVE200GOFANHYDROUSDIPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN300MLOFWATERMIXANDAUTOCLAVEAT121CFOR15MIN323BUFFERSOLUTION1PH60士O1DISSOLVE800GOFANHYDROUSPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN700MLOFWATERANDDISSOLVE200GOFANHYDROUSDIPOTASSIUMHYDROGENPHOSPHATEIN300MLOFWATERMIXANDADDO2OFPOTASSIUMFERRICYANIDETOTHEMIXTURE,STIRTODISSOLVE324TESTSTRAINBARDETELLABRANCHISEPTICATCC4617PROVIDEDBYTHEAMERICANTYPECULTURECOLLECTION325COLISTINSTANDARDSTOCKSOLUTIONACCURATELYWEIGHACCURATETOO1MGAPROPERQUANTITYOFCOLSTNSODIUMMETHANESU1FONATESTANDARDANDDISSOLVEINBUFFERSOLUTON1TOPREPAREASTANDARDSTOCKSOLUTIONOF1000GCOLISTIN/MLINCONCENTRATIONSTOREINAREFRIGERATORAT4C,WHICHCANBEUSEDWITHIN8DAYS326COLISTINSTANDARDWORKINGSOLUTIONPIPETASERIESOFCOLISTINSTANDARDSTOCKSOLUTION,ANDDILUTESEPARATELYWITHBUFFERSOLUTION1TOPREPAREASERIESOFSTANDARDWORKINGSOLUTIONSOFQ0125O025O050102G/MLINCONCENTRATIONS,WHICHSHOULDBEUSEDONTHESAMEDAYOFPREPARATION327MEDIUMISEEALINANNEXA328MEDIUMSEEA2INANNEXA329MEDIUMMSEEA3INANNEXA33APPARATUSANDEQUIPMENT331CULTUREDISH90MMIDGLASSORPLASTICDISHESWITHSMOOTHANDFLATBOTLOMANDWITHCLAYCOVER332OXFORDCUPSTAINLESSSTEELCYLINDERS80士。1MMOD60土01LMMIDJHEIGHTOO0土01MM333VERNIERCALIPERMEASURINGRANGEO200MM,PRECSON00