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.第1,1章細(xì)胞的分子組成,第3節(jié)有機(jī)化合物和生物大分子,實(shí)驗(yàn)1:檢測(cè)生物組織中的碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì),2,實(shí)驗(yàn):生物組織中的碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)檢測(cè),實(shí)驗(yàn)原理:特定的化學(xué)試劑會(huì)對(duì)生物組織中相關(guān)的有機(jī)化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)?;瘜W(xué)試劑有機(jī)化合物特定顏色,還原糖菲林試劑磚紅色沉淀脂肪手段(或蘇丹)染料橙色(或紅色)蛋白質(zhì)雙尿素試劑紫色淀粉碘藍(lán)色,水浴加熱。3,1,可用性還原糖檢測(cè):(1)原理:還原糖菲林試劑磚紅色沉淀。(2)材料選擇:蘋(píng)果、梨、白蘿卜。高糖,顏色白色或接近白色的植物組織。(3)測(cè)試過(guò)程:水浴加熱,振動(dòng)混合,50 65 水浴加熱2分鐘,2mL組織樣品,剛準(zhǔn)備的菲林試劑2ml,淺藍(lán)色,磚紅色(Cu2O),還原糖蔗糖、淀粉和纖維素是非還原糖。4,將質(zhì)量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液混合后,立即產(chǎn)生淺藍(lán)色Cu(OH)2懸浮液。Cu(OH)2可以用葡萄糖、果糖、麥芽糖等可溶性還原糖和共熱制出磚紅Cu2O沉淀物。因此,通過(guò)此反應(yīng)可以證明樣品溶液中含有可用性還原糖。r-CHO 2 Cu(oh)2r-coach Cu2O,2h2o,a-液體b液體混合成相同的量,目前使用,不能分開(kāi)掉,也不能放很長(zhǎng)時(shí)間才能使用。5,組織樣品液體,梨或蘋(píng)果的準(zhǔn)備,粉碎,5g就寢,洗臉,洗滌,剝皮,切開(kāi),過(guò)濾,濾液,(單紗布),顯色反應(yīng),試管中2ml組織樣品,試管中2ml新建,磚紅糖(還原糖)雨(菲林試劑)經(jīng)常很好吃,6,2毫升組織樣本,1毫升新準(zhǔn)備的菲林試劑,5065 的水浴加熱約2分鐘,觀(guān)察顏色變化,磚紅,天藍(lán)色,棕色,菲林試劑: a液體:0.1g/MMS,7,還原糖的檢查結(jié)果表明,菲林試劑和可溶性還原糖在水浴熱的條件下產(chǎn)生磚紅Cu2O沉淀。-CHO Cu(OH)2懸浮,-coh Cu2Og(磚紅色),8,2,脂肪檢測(cè),(1)材料選擇:浸泡在種皮中的花生種子。(2)測(cè)試過(guò)程:制作,選擇放在干凈的載體幻燈片中央的最薄的切片制作臨時(shí)雕塑:蒸餾水12滴,封面幻燈片,染色:床單上的蘇丹23滴染料,染色23分鐘,芙蓉清洗:用吸水紙染料,酒精12滴50%蘇埃三世(蘇丹三世)用橙色胭脂(脂肪),切片:花生種子(3-4h淡菜),去皮,把子葉切成薄片。視野中有橙色粒子,9,橙色小圓粒子為脂肪粒子,脂肪蘇丹(或蘇丹)染料橙色(或紅色),10,11,注意事項(xiàng):(1)以花生種子為實(shí)驗(yàn)材料,應(yīng)提前3 4小時(shí)浸泡,浸泡時(shí)間短,切片不容易,浸泡時(shí)間長(zhǎng),組織太軟,切片不容易形成,切片應(yīng)盡量切成薄片。(2)染色后,必須用酒精溶液的50%沖洗浮色(酒精可以溶解蘇丹iii),染色和浮色時(shí)間不能太長(zhǎng)。(。,12,3,蛋白質(zhì)檢測(cè):(1)原則:蛋白質(zhì)縮脲試劑紫色復(fù)合物,(2)選擇:大豆和蛋清(稀釋),牛奶,豆奶,(3)檢測(cè)過(guò)程:2ml組織樣品反應(yīng)式為:biurea (H2NOC-NH-CONH2)能在Cu2和堿性環(huán)境(NaOH)中產(chǎn)生紫色配合物,這種反應(yīng)稱(chēng)為biurea反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中包含的肽結(jié)合結(jié)構(gòu)類(lèi)似于縮脲結(jié)構(gòu),因此蛋白質(zhì)也可以引起縮脲試劑和顏色反應(yīng)。雙縮脲雙縮二脲試劑,14,無(wú)色,紫色,(制造堿性條件),(提供Cu2),縮脲試劑B3-4滴,縮脲試劑A2mL,2mL組織樣品,在堿性條件(NaOH)下結(jié)合蛋白質(zhì)的肽因此,如果先添加a和b,a小于b,則Cu2+的藍(lán)色將復(fù)蓋生成的紫色。15,組織樣品制備,大豆組織樣品(或雞蛋清純稀釋液),浸泡在大豆中,粉碎,過(guò)濾,濾液,剝皮,切片,蛋清,雞蛋,蛋清稀釋液,稀釋?zhuān)@色反應(yīng),16,蛋白質(zhì)檢測(cè)結(jié)果,17,注意事項(xiàng):(1)如果用蛋清作為材料,就要充分稀釋。否則,反應(yīng)后產(chǎn)物將進(jìn)入試管內(nèi)壁,反應(yīng)不全,試管不易清洗干凈。(2) 縮微試劑: a液體:0.1g/ml NaOH;b液體:0.01g/mLCuSO4。先加a液體,再加b液體,不能超過(guò)b,所以不需要加熱。(3)過(guò)量的縮脲試劑b與試劑a反應(yīng),使溶液呈藍(lán)色,掩蓋生成的紫色。(4)先放入2毫升液體,搖晃。加入B-液體3-4滴,搖晃。18,4,淀粉檢測(cè):(2)材料選擇:土豆均勻化,(1)原理:淀粉碘藍(lán)色,(3)檢測(cè)過(guò)程:2毫升組織樣本,2滴碘,觀(guān)察顏色變化,19,準(zhǔn)備組織樣本,土豆塊莖,粉碎,提取5g,研磨,洗滌,剝皮,切割,過(guò)濾,顏色反應(yīng),向試管中注入2ml組織等液體,添加5滴碘-碘化鉀,觀(guān)察現(xiàn)象,觀(guān)察溶液的顏色變化:無(wú)色,20,蘋(píng)果,梨,白蘿卜,菲林試劑,磚紅沉淀,花生種子,蘇丹染料,蘇丹染料,橙色,紅色,豆奶,牛奶,蛋清,縮脲試劑,紫色,面粉地方的確認(rèn)不一定要用顯微鏡,要觀(guān)察地方粒子,必須用顯微鏡。21,5,觀(guān)察細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA分布的實(shí)驗(yàn)原理:(1)DNA主要分布在細(xì)胞核內(nèi),RNA大部分存在于細(xì)胞質(zhì)中。(2)甲基綠和皮拉紅對(duì)DNA和RNA的親和力不同,甲基綠使DNA看起來(lái)綠色,皮拉紅使RNA看起來(lái)紅色。(。(3)用甲基綠和吡紅混合染色劑染色細(xì)胞,可以顯示細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA的分布。(。(4)鹽酸改變細(xì)胞膜的通透性,將染色劑注入細(xì)胞,同時(shí)從染色體分離DNA和蛋白質(zhì),有助于結(jié)合DNA和染色劑。(。甲基綠使DNA呈綠色,皮拉紅使RNA呈紅色,觀(guān)察兩種顏色出現(xiàn)的部位,判斷細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA的分布。,22,方法步驟:(1)提取和生產(chǎn),清潔玻璃片上1滴0.9%NaCl溶液,用消毒牙簽刮口腔內(nèi)壁,然后涂在液滴上,在酒精燈上干燥口腔上皮細(xì)胞涂層的幻燈片,(2)水解:干燥幻燈片30mL8%高倍鏡后:觀(guān)察細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的染色。0.9%生理鹽水?人口腔上皮細(xì)胞,8%鹽酸?蒸餾水,30水浴,吡紅甲基綠染發(fā)劑,萃取,水解,洗滌,染色,觀(guān)察,24,思考和討論:(1)9%Nacl溶液的作用?維持腔上皮細(xì)胞的正常形態(tài)。(2)8%鹽酸的作用?殺死細(xì)胞,改變細(xì)胞膜的通透性,將染色劑加速到細(xì)胞;將染色體的DNA與蛋白質(zhì)分離,有助于結(jié)合DNA和染色劑。(3)皮拉紅甲基綠染發(fā)劑應(yīng)激活。本實(shí)驗(yàn)不應(yīng)使用綠色植物葉肉細(xì)胞(有顏色的)和其他顏色的細(xì)胞(如雞血細(xì)胞)作為實(shí)驗(yàn)材料。因?yàn)闀?huì)妨礙顏色觀(guān)察。25,biurea反應(yīng):包含兩個(gè)或多個(gè)肽結(jié)合的化合物和堿性硫酸銅作用,生成藍(lán)紫色的復(fù)合物,26,菲林試劑與比利特試劑的比較,菲林試劑使用甲流和乙液,目前要用活性、混合、水浴加熱。滴定劑用a液和b液先添加a液,然后將b液加熱,不洗澡。28,菲林試劑和縮脲試劑由NaOH和CuSO4組成,但兩種試劑有以下三點(diǎn)不同:溶液濃度不同。菲林試劑中NaOH的濃度為0.1g/mL,CuSO4的濃度為0.05g/mL;在縮脲試劑中,NaOH的濃度為0.1g/mL,CuSO4的濃度為0

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