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專題10 生物技術(shù)實踐 第31講 微生物的利用(時間:30分鐘)1.(2015浙江五校第二次聯(lián)考)近幾年生物技術(shù)發(fā)展迅猛,和我們的生活關(guān)系越來越密切了。請回答下列問題:(1)利用植物組織培養(yǎng)可實現(xiàn)農(nóng)作物的大規(guī)模快速繁殖,植物組培培養(yǎng)基的類型有、發(fā)芽培養(yǎng)基。上圖中,由外植體通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育成完整植物,這項技術(shù)利用了植物細(xì)胞具有全能性的原理。圖中A代表;AB過程表示。(2)在植物組織培養(yǎng)中關(guān)于消毒和滅菌操作的敘述,正確的是()A.操作者的雙手可以不消毒B.外植體可以用酒精消毒C.鑷子等器械需用酒精滅菌D.接種后培養(yǎng)基需用高壓蒸汽滅菌(3)通常用來分離菌種的方法有和。(4)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精發(fā)酵菌種,對野生酵母菌進行誘變后通過篩選可以得到具有這些特性的突變菌,誘變及篩選過程如下:第一步:野生菌液體培養(yǎng)一段時間后接受紫外線照射誘變處理。第二步:制備選擇培養(yǎng)基。在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,還要添加,加瓊脂后滅菌,制成固體平板。第三步:將紫外線照射后的菌液稀釋涂布平板。第四步:根據(jù)是否能在該培養(yǎng)基上生長篩選出突變菌。(5)土壤中有些細(xì)菌含有脲酶,這些細(xì)菌能夠?qū)⒎纸獬砂保瑥亩古囵B(yǎng)基中加入的指示劑產(chǎn)生紅色透明環(huán)。答案(1)生根培養(yǎng)基愈傷組織再分化(2)B(3)劃線分離法涂布分離法(4)高濃度蔗糖(或葡萄糖)、調(diào)低pH(加酸)(5)尿素酚紅2.為了調(diào)查長江的水質(zhì)狀況,某研究小組測定了該河流水樣中的細(xì)菌含量,并進行了細(xì)菌的分離等工作?;卮鹣铝袉栴}:(1)制備實驗所需的培養(yǎng)基時,在各成分都溶化后和分裝前,要進行的是和滅菌,對培養(yǎng)基進行滅菌的常用方法是。倒平板時要待平板冷凝后,將平板倒置,其主要原因是(2)該小組可采用上圖所示的(方法)檢測水樣中的細(xì)菌含量。在接種前,隨機取若干滅菌后的空平板先行培養(yǎng)了一段時間,這樣做的目的是_;然后,將1 mL水樣稀釋100倍,在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液;經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為。(3)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時,接種環(huán)通過灼燒滅菌,在第二次及以后劃線時,總是從上一次的末端開始劃線。這樣做的目的是_。(4)在純化過程中,在固體培養(yǎng)基上劃線分離過程中,正確的操作是()A.每次劃線時,接種環(huán)都需要蘸菌液一次B.劃線分離時,需要把接種環(huán)深入到培養(yǎng)基中進行接種C.劃線時要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連D.在超凈平臺中進行接種時,不能關(guān)閉過濾風(fēng)答案(1)調(diào)整pH高壓蒸汽滅菌防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染(2)涂布分離法檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8107(3)將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落(4)D3.(2015浙江名校協(xié)作體聯(lián)考)下圖表示菊花的嫩枝離體培養(yǎng)過程,請據(jù)圖回答下面的問題。(1)若使用自然生長的嫩枝進行組織培養(yǎng),需將材料放在70%乙醇中浸泡10 min,再放入中浸泡5 min,然后用另一該溶液浸泡5 min,最后在中用無菌水清洗。(2)實驗中使用的生長素是人工合成的,培養(yǎng)基中的生長素和細(xì)胞分裂素用量的比值(填“高”或“低”)時,有利于芽的分化。(3)待生根后,將苗移至草炭土或蛭石中,用玻璃罩或塑料布保持以上的濕度,23天后打開玻璃罩逐漸降低濕度進行鍛煉,直到將罩全部打開處于自然濕度下為止。A.8% B.30% C.60% D.80%(4)某同學(xué)在培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上感染了幾種細(xì)菌,并進行了細(xì)菌分離等工作。若在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入指示劑,培養(yǎng)后,在菌落周圍出現(xiàn)就可以鑒定其中含有能夠分解尿素的細(xì)菌。(5)下列有關(guān)“分離以尿素為氮源的微生物”實驗敘述,正確的是()A.對尿素溶液要使用70%酒精浸泡滅菌B.分離出的菌落繼續(xù)在固體培養(yǎng)基中擴大培養(yǎng)C.劃線分離法比涂布分離法更易獲得單菌落D.培養(yǎng)基中需加瓊脂糖作為凝固劑答案(1)5%NaClO(5%次氯酸鈉或NaClO,都可)超凈臺(2)NAA(萘乙酸)低(3)B(4)酚紅紅色(5)D4.(20161月寧波期末測試)石油烴是環(huán)境的重要污染源。為了篩選出具有強分解石油烴能力的微生物,進行了一系列操作,請回答下列問題:(1)分解石油烴的微生物一般要從土壤中分離,獲取土壤樣品的取樣地點最好選在_。(2)微生物實驗室常采用法對培養(yǎng)基進行滅菌處理。A.干熱滅菌 B.過濾滅菌C.灼燒滅菌 D.高壓蒸汽滅菌(3)下圖為獲取土壤樣品后的培養(yǎng)研究過程:為了能有效地分離出分解石油烴的微生物,過程所用培養(yǎng)基的成分的特點是,從而有利于分解石油烴的微生物的生長。(4)對進行接種常采用的兩種方法分別是和。(5)若發(fā)現(xiàn)在中無法區(qū)分菌落,可以將圖中取出的菌液。(6)若實驗室為分離純化優(yōu)良菌種進行了如下操作,排序最合理的是。A. B.C. D.(7)整個微生物的分離和培養(yǎng)的操作,一定要注意在條件下進行。解析(1)分解石油烴的微生物在石油污染明顯處分布較多。(2)微生物實驗室對培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌。(3)實驗過程中,過程所用培養(yǎng)基應(yīng)用石油烴作唯一碳源,以抑制其他種類微生物的生長,從而分離出以石油烴為碳源的微生物。(4)對微生物的分離實驗中,常用劃線分離法或涂布分離法進行接種。(5)若發(fā)現(xiàn)在中無法區(qū)分菌落,可能是菌液中細(xì)菌濃度太高,可進行梯度稀釋處理后再進行接種。(6)圖示為用劃線法進行接種分離。接種過程中應(yīng)先在酒精燈火焰上灼燒接種環(huán)后,蘸取菌液進行接種,整個操作在酒精燈火焰旁進行,接種結(jié)束后還須在酒精燈上灼燒接種環(huán)。(7)為避免污染,整個微生物的分離和培養(yǎng)的操作,一定要注意在無菌條件下進行。答案(1)石油污染明顯處(2)D(3)以石油烴為唯一碳源(4)劃線分離法涂布分離法(5)進行(梯度)稀釋(6)B(7)無菌5.(2016金麗衢十校聯(lián)考)下表是3組生物實驗培養(yǎng)基。請回答下列問題:組別培養(yǎng)基a無機鹽、蔗糖、維生素和甘氨酸等有機物、水、瓊脂b葡萄糖、NaCl、K2HPO4、尿素、酚紅、水、瓊脂糖c蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水、瓊脂(1)分離以尿素為氮源的細(xì)菌應(yīng)選用培養(yǎng)基。在含有脲酶的細(xì)菌菌落周圍會出現(xiàn),這是由于尿素被分解產(chǎn)生的使pH升高,酚紅指示劑產(chǎn)生顏色變化,從而證明這一菌株可以尿素為氮源。變色區(qū)域越大,表明該菌株利用尿素的能力。(2)用培養(yǎng)基a進行植物組織培養(yǎng),則培養(yǎng)基中還需加入。一般先用(填“發(fā)芽”或“生根”)培養(yǎng)基進行培養(yǎng),使之長出較多的叢狀苗,然后將叢狀苗分株培養(yǎng)。(3)生產(chǎn)上利用黑曲霉或蘋果青霉來提取果膠酶,在用果膠酶水解果膠的實驗中,下列說法正確的是。A.實驗后滴加酒精的目的是增加果膠酶的活性B.沸水浴加熱后果膠酶的活性隨著溫度的下降逐漸恢復(fù)C.間歇攪拌2030 min的目的是讓果膠酶與果膠充分接觸D.選用黑曲霉提取液是因為果膠酶只能在生物細(xì)胞內(nèi)起催化作用解析(1)分離以尿素為氮源的細(xì)菌應(yīng)選用以尿素為唯一氮源并添加酚紅指示劑的培養(yǎng)基。分解尿素的微生物可產(chǎn)生脲酶,脲酶可催化尿素分解產(chǎn)生氨,使酚紅指示劑變紅,從而在菌落周圍形成紅色環(huán)帶,形成的紅色環(huán)帶越大,表明該菌株利用尿素的能力越強。(2)植物組織培養(yǎng)所需的MS培養(yǎng)基需加入植物激素。培養(yǎng)過程中一般先用發(fā)芽培養(yǎng)基進行培養(yǎng),使之長出較多的叢狀苗,然后將叢狀苗分株培養(yǎng),誘導(dǎo)生根。(3)在用果膠酶水解果膠的實驗中,實驗操作后滴加酒精的目的是檢驗實驗過程中果膠是否被水解;沸水浴加熱后果膠酶會失去活性;只要條件適宜,果膠酶在細(xì)胞內(nèi)外均可發(fā)揮催化作用。答案(1)b紅色環(huán)帶氨越強(2)植物激素(植物生長調(diào)節(jié)劑)發(fā)芽(3)C6.(2015鄭州中學(xué)模擬卷)培育脫毒草莓的目的是利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)避免病毒感染草莓幼苗,從而提高草莓的生命力和產(chǎn)量。脫毒草莓具有栽培容易、增產(chǎn)效果顯著、周期短、經(jīng)濟效益高等特點,是發(fā)展我國高效農(nóng)業(yè)和綠色有機農(nóng)業(yè)的首選經(jīng)濟作物。請回答下列問題:(1)培育脫毒植物的原理是植物細(xì)胞具有。外植體形成愈傷組織需要經(jīng)過過程,愈傷組織形成幼苗需要經(jīng)過過程。整個培養(yǎng)過程要在條件下進行。(2)對培養(yǎng)基進行滅菌時,多采用法,而在微生物培養(yǎng)實驗中對接種環(huán)或涂布器滅菌時,則用法。(3)進行植物組織培養(yǎng)需配制MS培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中常用的凝固劑是。該培養(yǎng)基中常需要添加、等植物激素。欲利于根的分化,植物激素的用量比例應(yīng)為_。解析(1)植物細(xì)胞具有全能性,這是植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)。培養(yǎng)的外植體要經(jīng)過脫分化和再分化過程才能
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