水產(chǎn)品的檢驗PPT課件

.,水產(chǎn)品的檢驗,.,的安全現(xiàn)狀,水產(chǎn)品,.,水產(chǎn)品質(zhì)量安全現(xiàn)狀,.,水產(chǎn)品主要安全問題,水產(chǎn)品,組胺,組胺是魚體中游離組氨酸在組胺酸脫羧酶催化下,發(fā)生脫羧反應(yīng)而形成的一種胺類。通常是由某些特定魚種因時間/溫度處理不當(dāng)而形成的。組胺中毒是水產(chǎn)食品存在的主要安全問題之一,世界各地尤其是沿海地區(qū)組胺中毒事件時有發(fā)生。組胺危害是水產(chǎn)品生產(chǎn)加工過程中較難控制的一類危害，因?qū)ζ涞目刂菩柝灤┯趶脑系匠善返乃a(chǎn)加工全流程之中。,01,水產(chǎn)品,無機砷,砷元素廣泛存在于自然界,砷與其化合物被運用在農(nóng)藥、除草劑、殺蟲劑中,對環(huán)境造成的污染越來越嚴(yán)重。這些以各種形態(tài)進(jìn)入海洋生態(tài)系統(tǒng)中的砷化合物很容易進(jìn)入水生生物組織中并在其中富集起來，給水產(chǎn)品造成重大污染。因此,對水產(chǎn)品中砷的檢測十分重要。,02,.,水產(chǎn)品主要安全問題,水產(chǎn)品,甲基汞,汞（hg）及其化合物是環(huán)境中廣泛存在的一類持久性污染物，對人類健康造成很大的威脅，汞及其化合物曾大量用于殺蟲劑、殺菌劑、化妝品等領(lǐng)域。工業(yè)廢水、廢氣、含汞化合物中的汞會通過人類活動進(jìn)入到外界環(huán)境中，且會在食物鏈中逐漸富集。,目前每年仍有大量的各種形態(tài)的汞排放到外界環(huán)境中，造成很大的污染環(huán)境中的汞污染物經(jīng)過大氣沉降、水的流動等方式最終進(jìn)入到地表水中，對水產(chǎn)品養(yǎng)殖和生存環(huán)境造成很大的污染，養(yǎng)殖環(huán)境中各種形態(tài)汞化合物很容易被水產(chǎn)品吸收和富集，嚴(yán)重影響水產(chǎn)品質(zhì)量，由于其在水產(chǎn)品中殘留時間長，并有可能通過食物鏈進(jìn)行傳遞，進(jìn)而對人類產(chǎn)生巨大的危害。因此，對水產(chǎn)品中汞殘留進(jìn)行檢測勢在必行。,01,02,.,的測定法,組胺,.,組胺測定法,3、高效液相色譜-紫外檢測法（參考文獻(xiàn)：徐麗,劉琳,王宗奇,孟慧琴,張雪琰.高效液相色譜-紫外檢測法測定水產(chǎn)品中組胺含量J.食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報,2014,5(12):3790-3794）,03,.,第一法：分光光度法,(1)原理：樣品中的組胺用正戊醇提取后，在弱堿性條件下與重氮鹽發(fā)生反應(yīng)生產(chǎn)橙色的偶氮化合物，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。(2)方法說明：適用于水產(chǎn)品等含有組胺的食品。本方法的檢出限為50mg/kg。(3)樣品前處理：秤取一定量絞碎并混勻的樣品，加入三氯乙酸溶液浸泡以提取組胺并沉淀蛋白質(zhì)，過濾。吸取適量濾液，用氫氧化鈉溶液調(diào)制堿性，組胺游離，用正戊醇萃取游離組胺。吸取適量正戊醇提取液，加鹽酸至酸性，組胺成為鹽酸鹽而易溶于水溶液，反萃取至鹽酸溶液中，合并鹽酸提取液并稀釋定容。(4)測定方法：將樣品的鹽酸提取液偶氮化后測定480nm的吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。,.,第二法：液相色譜法,（1）原理：水產(chǎn)品(魚類及其制品、蝦類及其制品)、肉類:試樣用5%三氯乙酸提取,正已烷去除脂肪,三氯甲烷-正丁醇(1+1)液液萃取凈化后,丹磺酰氯衍生,C18色譜柱分離,高效液相色譜-紫外檢測器檢測,內(nèi)標(biāo)法定量。酒類(葡萄酒、啤酒、黃酒等)、調(diào)味品(醋和醬油):試樣用丹磺酰氯衍生,C18色譜柱分離,高效液相色譜-紫外檢測器檢測,內(nèi)標(biāo)法定量。（2）范圍：本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中色胺、-苯乙胺、腐胺、尸胺、組胺、章魚胺、酪胺、亞精胺和精胺含量的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于酒類(葡萄酒、啤酒、黃酒等)、調(diào)味品(醋和醬油)、水產(chǎn)品(魚類及其制品、蝦類及其制品)、肉類中生物胺的測定。（3）檢出限：20mg/kg,.,試樣制備,4.1試樣制備取水產(chǎn)品及肉類樣品的可食部分約500g,充分勻質(zhì),均分成兩份裝入潔凈容器中,密封,于-20保存。4.2提取準(zhǔn)確稱取已經(jīng)絞碎或勻漿后的水產(chǎn)品、肉類10g(精確至0.01g),置于100mL具塞錐形瓶中,加入500L內(nèi)標(biāo)使用液(1.0mg/mL)與樣品充分混勻,加入20mL5%三氯乙酸溶液和振蕩提取30min,轉(zhuǎn)移至50mL具塞離心管中,5000r/min離心10min,轉(zhuǎn)移上清液至50mL容量瓶中,殘渣用20mL5%三氯乙酸溶液再提取一次,合并上清液,用5%三氯乙酸稀釋至刻度,待凈化。,.,凈化及萃取,4.3凈化4.3.1除脂肪:移取上述試樣提取液10mL于25mL具塞試管中,加入0.5g氯化鈉渦旋振蕩至氯化鈉完全溶解后加入10mL正己烷,渦旋振蕩5min,靜置分層后棄去上層有機相,下層試樣溶液加入10mL正己烷再除脂一次。4.3.2萃取:移取5mL上述除脂肪后的試樣溶液于10mL具塞離心管中,用5mol/L氫氧化鈉溶液(幾滴)調(diào)節(jié)pH至12.0左右。加入5mL的正丁醇/三氯甲烷(1+1)混合溶液,渦旋振蕩5min,5000r/min離心5min,轉(zhuǎn)移上層有機相于另一個10mL具塞離心管中,下層樣液再萃取一次,合并萃取液,用正丁醇/三氯甲烷(1+1)稀釋至刻度。取5mL萃取液加入200L鹽酸(1mol/L),混勻后40水浴下氮氣吹干,加入1mL鹽酸(0.1mol/L)渦旋振蕩,使殘留物完全溶解,待衍生。,.,衍生及標(biāo)準(zhǔn)曲線制作,4.4衍生4.4.1試樣的衍生:在上述待衍生的試樣溶液中依次加入1mL飽和碳酸氫鈉溶液、100L氫氧化鈉溶液(1mol/L)、1mL衍生試劑,渦旋混勻1min后置于60恒溫水浴中衍生15min,取出,分加入100L谷氨酸鈉溶液,振蕩混勻,60恒溫反應(yīng)15min。取出,冷卻至室溫,于每個離心管中加入1mL水,渦旋混合1min,40水浴下氮吹除去丙酮(約1mL),加入0.5g氯化鈉渦旋振蕩至氯化鈉完全溶解后加入5mL乙醚,渦旋振蕩2min,靜置分層后,吸出上層有機相(乙醚層),再萃取一次,合并乙醚萃取液,40水浴下氮氣吹干。加入1mL乙腈渦旋振蕩使殘留物完溶解,0.22m濾膜針頭濾器過濾于進(jìn)樣小瓶,待測定。4.4.2標(biāo)準(zhǔn)的衍生:分別移取1mL生物胺標(biāo)準(zhǔn)系列溶液,置于10mL具塞試管中,依次加入250L內(nèi)標(biāo)使用液(100mg/L),以下操作同試樣的衍生步驟。,.,衍生及標(biāo)準(zhǔn)曲線制作,5.測定方法色譜柱為C18柱(柱長250mm,柱內(nèi)徑4.6mm,柱填料粒徑5m),紫外檢測波長254nm,進(jìn)樣量20L,柱溫35,流動相A為90%乙腈/10%(含0.1%乙酸的0.01mol/L乙酸銨溶液),流動相B為10%乙腈/90%(含0.1%乙酸的0.01mol/L乙酸銨溶液),流速0.8mL/min。將試樣的衍生溶液注入高效液相色譜儀中,測得峰面積,以保留時間定性。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中各目標(biāo)化合物的濃度。52標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將20L系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的衍生液分別注入高效液相色譜儀,測得目標(biāo)化合物的峰面積,以系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo),以目標(biāo)化合物的峰面積與內(nèi)標(biāo)的峰面積的比值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。,.,其他測定法：高效液相色譜-紫外檢測法,1)原理：高效液相色譜法由于其具有分析速度快、柱效高、檢測靈敏度高、定量分析準(zhǔn)確等特點,基本取代了其他方法,是目前生物胺含量分析測定的主要手段。衍生方法主要有柱前衍生和柱后衍生,常用的衍生化試劑有鄰苯二甲醛、丹磺酰氯、偶氮試劑和苯甲酰氯等,鄰苯二甲醛存在衍生物不穩(wěn)定等不足,苯甲酰氯不溶于水,衍生效果差,偶氮顯色法容易受到基質(zhì)中雜質(zhì)的干擾,影響測定結(jié)果。丹磺酰氯具有較理想的衍生效果和穩(wěn)定時間。而有些標(biāo)準(zhǔn)中用鹽溶液作為流動相,會對分析柱造成損害。對高效液相色譜法測定水產(chǎn)品(鯖魚)中組胺含量的試驗方法進(jìn)行改進(jìn),建立一種提取方法簡單、衍生物穩(wěn)定、操作方便的檢測方法。(2)方法說明：適用于魚和蝦等具有有毒生物胺的水產(chǎn)品。本方法的檢出限為50mg/kg。(3)樣品前處理：稱取2g(精確至0.001g)已粉碎的樣品于50mL刻度離心管中,用移液槍加入10mL的0.4mol/L高氯酸溶液,渦旋提取2min,上離心機于4000r/min離心5min,將上清液移入25mL棕色容量瓶中。在下層的殘渣中再加入10mL的0.4mol/L的高氯酸溶液,渦旋提取2min,離心后轉(zhuǎn)移上清液于容量瓶中,用0.4mol/L高氯酸溶液將其定容至刻度。,.,其他測定法：高效液相色譜-紫外檢測法,樣品衍生：量取1mL樣品溶液于5mL離心管中,依次加入2moL/L氫氧化鈉溶液100L、飽和碳酸氫鈉溶液300L和10mg/mL丹磺酰氯溶液2mL,蓋緊蓋子,在40下避光反應(yīng)40min,每5min振蕩1次。反應(yīng)完畢后,加入濃氨水100L終止衍生化反應(yīng),放置30min。用甲醇將其定容至刻度5mL,混合均勻,過0.45m的有機濾膜,待測。(4)測定方法：色譜柱:WatersC18柱(150mm4.6mm,5m);流速:1.0mL/min;柱溫:35;進(jìn)樣量:20L;檢測器:紫外檢測器;檢測波長:254nm;流動相:A:甲醇,B:水;梯度洗脫。,.,的測定法,無機砷,.,無機砷測定法,1、液相色譜-原子熒光光譜法（GB5009.11-2014）,2、液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法（GB5009.11-2014）,3、液相-原子熒光法（參考文獻(xiàn)：盧亭,夏慧麗,張今君.液相-原子熒光法測定水產(chǎn)品中無機砷方法的研究J.食品研究與開發(fā),2017,38(13):179-181）,03,02,01,.,第一法：液相色譜-原子熒光光譜法,(1)原理：食品中無機砷經(jīng)稀硝酸提取后，以液相色譜進(jìn)行分離，分離后的目標(biāo)化合物在酸性環(huán)境下與KBH4反應(yīng)，生成氣態(tài)砷化合物，以原子熒光光譜儀進(jìn)行測定。按保留時間定性，外標(biāo)法定量。(2)精密度：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。檢出限：0.03mg/kg(3)樣品前處理：稱取約1.0g水產(chǎn)動物濕樣（準(zhǔn)確至0.001g)，置于50mL塑料離心管中，加人20mL0.15mol/L硝酸溶液，放置過夜。于90C恒溫箱中熱浸提2.5h，每0.5h振搖1mm。提取完畢，取出冷卻至室溫，8000r/min離心15min。取5mL上清液置于離心管中，加人5mL正己烷，振搖1min后，8000r/min離心15min，棄去上層正己烷。按此過程重復(fù)一次。吸取下層清液，經(jīng)0.45m有機濾膜過濾C18小柱凈化后進(jìn)樣。按同一操作方法作空白試驗。,.,測定方法,（4)測定方法：原子熒光檢測參考條件：負(fù)高壓：320V;砷燈總電流：90mA;主電流/輔助電流：55/35;原子化方式：火焰原子化；原子化器溫度：中溫。載液：0%鹽酸溶液，流速4mL/min;還原劑：30g/L硼氫化鉀溶液，流速4mL/min;載氣流速：400mL/min;輔助氣流速：400mL/min。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：亞砷酸鹽AS(H)標(biāo)準(zhǔn)儲備液（00mg/L,按AS計）：準(zhǔn)確稱取三氧化二砷0.0132g,加100g/L氫氧化鉀溶液1mL和少量水溶解，轉(zhuǎn)人100mL容量瓶中，加人適量鹽酸調(diào)整其酸度近中性，加水稀釋至刻度。4C保存，保存期一年?；蛸徺I經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)。25.4.2砷酸鹽As(V)標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100mg/L，按AS計）：準(zhǔn)確稱取砷酸二氫鉀0.0240g，水溶解，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中并用水稀釋至刻度。4C保存，保存期一年?；蛸徺I經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)。,.,標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制,標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：取7支10mL容量瓶，分別準(zhǔn)確加人1.00mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)使用液0.00mL、0.050mL、0.10mL、0.20mL、0.30mL、0.50mL和l.0mL,加水稀釋至刻度，此標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的濃度分別為0.0ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL、50ng/mLQl00ng/mL。吸取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液100mL注人液相色譜-原子熒光光譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析，得到色譜圖，以保留時間定性。以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中目標(biāo)化合物的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。,.,第二法：液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法,(1)原理：食品中無機砷經(jīng)稀硝酸提取后，以液相色譜進(jìn)行分離，分離后的目標(biāo)化合物經(jīng)過霧化由載氣送人ICP炬焰中，經(jīng)過蒸發(fā)、解離、原子化、電離等過程，大部分轉(zhuǎn)化為帶正電荷的正離子，經(jīng)離子采集系統(tǒng)進(jìn)入質(zhì)譜儀，質(zhì)譜儀根據(jù)質(zhì)荷比進(jìn)行分離測定。以保留時間定性和質(zhì)荷比定性，外標(biāo)法定量。(2)精密度：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。檢出限：0.06mg/kg,.,測定方法,(3)樣品前處理：稱取約1.0g水產(chǎn)動物濕樣（準(zhǔn)確至0.001g)，置于50mL塑料離心管中，加人20mL0.15mol/L硝酸溶液，放置過夜。于90C恒溫箱中熱浸提2.5h，每0.5h振搖1mm。提取完畢，取出冷卻至室溫，8000r/min離心15min。取5mL上清液置于離心管中，加人5mL正己烷，振搖1min后，8000r/min離心15min，棄去上層正己烷。按此過程重復(fù)一次。吸取下層清液，經(jīng)0.45m有機濾膜過濾C18小柱凈化后進(jìn)樣。按同一操作方法作空白試驗。(4)測定方法：電感耦合等離子體質(zhì)譜儀參考條件：RF入射功率1550W;載氣為高純氬氣；載氣流速0.85L/min;補償氣0.15L/min。泵速0.3rps;檢測質(zhì)量數(shù)m/z=75(As)，m/z=35(Cl)。吸取試樣溶液50L注人液相色譜-電感耦合等離子質(zhì)譜聯(lián)用儀，得到色譜圖，以保留時間定性。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中As(I)與As(V)含量，As(I)與As(V)含量的加和為總無機砷含量，平行測定次數(shù)不少于兩次。,.,其他測定法：液相-原子熒光法,(1)原理：動物性水產(chǎn)品中無機砷經(jīng)稀硝酸超聲提取后，以液相色譜進(jìn)行分離，分離后的目標(biāo)化合物在酸性環(huán)境下與KBH4反應(yīng)，生成氣態(tài)砷化合物，以原子熒光光譜儀進(jìn)行測定。按保留時間定性，外標(biāo)法定量。(2)方法說明：該法具有操作便捷、干擾少、準(zhǔn)確度好等優(yōu)點，適用于批量水產(chǎn)品種無機砷的測定。檢出限為0.01mg/kg。(3)樣品前處理：準(zhǔn)確稱取經(jīng)粉碎過80目篩的樣品1.0g于50mL離心管中，加0.15mol/L的硝酸20.0mL旋渦混勻后置于超聲波清洗器中提取，以8000r/min離心15min后取上清液5mL于10mL離心管中，加入5mL正己烷，振搖1min后，8000r/min離心15min，棄去上層正己烷。按此過程重復(fù)一次，吸取下層清液，經(jīng)0.45m水相濾膜過濾及C18小柱凈化后進(jìn)樣，同時做試劑空白試驗。(4)測定方法：色譜柱：陰離子交換色譜柱（HAMILTONPRP-X10010m250mm4.1mm）。梯度洗脫：流動相A：1mmol/L磷酸氫二銨溶液（pH6.0）；流動相B：20mmol/L磷酸氫二銨溶液（pH6.0）。流動相、光譜等參數(shù)條件同國家標(biāo)準(zhǔn)GB5009.11-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中總砷及無機砷的測定,.,的測定法,甲基汞,.,甲基汞測定法,1、液相色譜-原子熒光光譜聯(lián)用方法（GB5009.17-2014）,2、氣相色譜法（參考文獻(xiàn)：劉素琴,牟曉崟.氣相色譜法測定水產(chǎn)品中痕量甲基汞的方法研究J.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2015,25(03):344-347）,02,01,.,第一法：液相色譜-原子熒光光譜聯(lián)用方法,(1)原理：食品中甲基汞經(jīng)超聲波輔助5mol/L鹽酸溶液提取后，使用反相色譜柱分離，色譜流出液進(jìn)人在線紫外消解系統(tǒng)，在紫外光照射下與強氧化劑過硫酸鉀反應(yīng)，甲基汞轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機汞。酸性環(huán)境下，無機汞與硼氫化鉀在線反應(yīng)生成汞蒸氣，由原子熒光光譜儀測定。由保留時間定性，外標(biāo)法峰面積定量。(2)方法說明：。檢出限為0.038微克每毫升。(3)樣品前處理：稱取樣品0.50g2.0g(精確至0.001g),置于15mL塑料離心管中，加人10mL的鹽酸溶液(5mol/L)，放置過夜。室溫下超聲水浴提取60min,期間振搖數(shù)次。4下以8000r/min轉(zhuǎn)速離心15min。準(zhǔn)確吸取2.0mL清液至5mL容量瓶或刻度試管中，逐滴加人氫氧化鈉溶液(6mol/L),使樣液pH為27。加人0.1mL的L-半胱氨酸溶液（10g/L）,最后用水定容至刻度。0.45m有機系濾膜過濾，待測。同時做空白試驗。,.,測定方法,標(biāo)準(zhǔn)液的配制：氯化汞標(biāo)準(zhǔn)儲備液(200g/mL,以Hg計）：準(zhǔn)確稱取0.0270g氯化汞，用0.5g/L重鉻酸鉀的硝酸溶液溶解，并稀釋、定容至100mL。于4t冰箱中避光保存,可保存兩年。甲基汞標(biāo)準(zhǔn)儲備液（200g/mL,以Hg計）：準(zhǔn)確稱取0.0250g氯化甲基汞，加少量甲醇溶解，用甲醇溶液（1+1）稀釋和定容至100mL。于4t冰箱中避光保存，可保存兩年?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)使用液（1.00g/mL,以Hg計）：準(zhǔn)確移取0.50mL甲基汞標(biāo)準(zhǔn)儲備液和0.50mL氯化汞標(biāo)準(zhǔn)儲備液，置于100mL容量瓶中，以流動相稀釋至刻度,搖勻。此混合標(biāo)準(zhǔn)使用液中，兩種汞化合物的濃度均為1.00g/mL。現(xiàn)用現(xiàn)配。標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：取5支10mL容量瓶，分別準(zhǔn)確加人混合標(biāo)準(zhǔn)使用液（1.00g/mL）0.00mL、0.010mL、0.020mL、0.040mL、0.060mL和0.10mL,用流動相稀釋至刻度。此標(biāo)準(zhǔn)系