獸醫(yī)微生物學(xué)腸桿菌科

19991228002,.,1,第十六章腸桿菌科,內(nèi)容提要：p97第一節(jié)埃希菌屬第二節(jié)沙門(mén)氏菌屬第三節(jié)耶爾森菌屬第四節(jié)其他腸道桿菌屬,第三篇,19991228002,.,2,本科共同特性為：革蘭氏陰性、無(wú)芽孢的兼性厭氧菌，共28屬、110種。多為正常腸道菌群成員。沙門(mén)氏菌屬、志賀菌屬、以及埃希菌屬和耶爾森菌屬的部分成員對(duì)人和動(dòng)物有廣泛的致病性，在公共衛(wèi)生和獸醫(yī)臨有重要意義。第一節(jié)埃希菌屬本屬現(xiàn)有5個(gè)種，其中最重要的種是大腸埃希菌(E.coli)，俗稱(chēng)大腸桿菌，下分血清型。本菌系人和溫血?jiǎng)游锬c道內(nèi)正常菌群成員之一。大腸桿菌常被用作糞便直接或間接污染的檢測(cè)指標(biāo)（水、空氣）；本菌還是分子生物學(xué)和基因工程中重要的實(shí)驗(yàn)材料和研究對(duì)象，原核表達(dá)。,19991228002,.,3,一、形態(tài)染色特性大腸桿菌為革蘭氏陰性無(wú)芽孢的桿菌，大小0.4-0.7um2-3um，兩端鈍圓、散在，周身鞭毛可運(yùn)動(dòng)，多有菌毛。二、培養(yǎng)及生化特性本菌為兼性厭氧菌，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上，形成圓形凸起、光滑、濕潤(rùn)、半透明、灰白色菌落，徑約2-3mm；本菌大多可以發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，麥康凱瓊脂上形成紅色菌落；在伊紅美藍(lán)瓊脂上產(chǎn)生黑色帶金屬閃光的菌落；一些致病性菌株在綿羊血平板上呈溶血。,19991228002,.,4,糞便中大腸桿菌的分離與鑒定,10倍遞增稀釋,鑒定、保存,19991228002,.,5,空氣中大腸桿菌的分離與鑒定,樣本,37培養(yǎng)24h,染色鏡檢,純培養(yǎng),先進(jìn)行初步生化鑒定，不確定的菌株再用API20E鑒定,API20E鑒定試條,19991228002,.,6,三、抗原及血清型大腸桿菌抗原主要有O、K和H三種，是本菌血清型鑒定的物質(zhì)基礎(chǔ)。已確定的大腸桿菌O抗原有173種，K抗原有80種，H抗原有56種。大腸桿菌血清型可高達(dá)數(shù)萬(wàn)種，但致病性大腸桿菌的血清型數(shù)量是有限的。1.O抗原耐熱，121C加熱2h不破壞其抗原性。抗原性特異性決定于脂多糖-LPS的特異多糖側(cè)鏈的結(jié)構(gòu)。每個(gè)菌株只含有一種O抗原，用單因子抗O血清做玻板或試管凝集試驗(yàn)鑒定之。2.K抗原熱不穩(wěn)定抗原，為被膜或莢膜、菌毛抗原。具有K抗原菌株不被抗O血清凝集，稱(chēng)為O不凝集性。一個(gè)菌落可含1-2種不同K抗原，也有無(wú)K抗原的菌株。,19991228002,.,7,19991228002,.,8,產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)ETEC系一類(lèi)致人和幼畜(初生仔豬黃痢、犢牛、羔羊及斷奶仔豬腹瀉)腹瀉的最常見(jiàn)的病原性大腸桿菌。其毒力因子主要由黏附素性菌毛和腸毒素兩類(lèi)構(gòu)成。初生幼畜被ETEC感染后常因劇烈水樣腹瀉和迅速脫水死亡，發(fā)病率和死亡率均很高。(1)黏附性菌毛，能黏附于宿主的小腸上皮細(xì)胞，故又稱(chēng)其為黏附素或定居因子，對(duì)其抗原稱(chēng)作黏附素抗原或定居因子抗原。,19991228002,.,9,(2)腸毒素是ETEC在體內(nèi)或體外生長(zhǎng)時(shí)產(chǎn)生并分泌到胞外的一種蛋白質(zhì)性毒素。分為:不耐熱腸毒素(LT：heat-labileenterotoxin)和耐熱腸毒素(ST:heatstabileenterotoxin)二種?？墒鼓c細(xì)胞分泌機(jī)能亢進(jìn)，引起水樣腹瀉和迅速脫水。LT對(duì)熱敏感，有抗原性，6530min即被滅活。ST耐熱，無(wú)抗原性，它耐100加熱30min而不失活，能抵抗多種蛋白酶作用。2.產(chǎn)類(lèi)志賀毒素大腸桿菌(SLTEC)系一飛在體內(nèi)或體外生長(zhǎng)時(shí)可產(chǎn)生類(lèi)志賀毒素(SLT)的病原性大腸桿菌。,第16章,19991228002,.,10,在動(dòng)物SLTEC可致豬的水腫病，以頭部、腸系膜和胃壁漿液性水腫為特征，常伴有共濟(jì)失調(diào)、麻痹或驚厥等神經(jīng)癥狀，發(fā)病率較低但致死率很高。發(fā)現(xiàn)SLTEC與犢牛出血性結(jié)腸炎有關(guān)，在致幼兔腹瀉的大腸桿菌菌株中也查到SLT。其毒力因子包括粘附性菌毛和致水腫病2型類(lèi)志賀毒素。(1)粘附性菌毛，F(xiàn)18菌毛是豬水腫病的SLTEC菌株的一個(gè)重要的毒力因子，它有助于細(xì)菌在豬腸黏膜上皮細(xì)胞定居和繁殖。(2)致水腫病2型類(lèi)志賀毒素。,19991228002,.,11,毒力島EHEC具有35kbLEE毒力島p105禽致病性大腸桿菌（APEC）:引起禽類(lèi)急性的、系統(tǒng)性疾病的病原性大腸桿桿菌。表現(xiàn)為：氣囊炎、肺炎、心包炎、肝周炎等,19991228002,.,12,（四）大腸桿菌主要毒素基因的檢測(cè),5重PCR方法檢測(cè)5種主要毒素基因STa、STb、LTa、Stx1和Stx2/Stx2e；對(duì)動(dòng)物舍環(huán)境中分離到的380株大腸桿菌進(jìn)行了檢測(cè)：5個(gè)雞舍117株5個(gè)豬舍120株6個(gè)牛舍143株,380株,19991228002,.,13,Multiplex-PCR特異性檢測(cè),NM123456789M,664bp,Stx1,484bp,Stx2/Stx2e,360bp,STb,282bp,LTa,183bp,STa,1,E.coliC83600;2,E.coliC83710;3,E.coliC83600;4,E.coliisolatedfromair;5,E.coliSDZ21;6,E.coliSDZ15;7,E.coliH30;8and9,E.coliisolatedfromair;N,Negativecontrol;M,DL2000DNAMarker,19991228002,.,14,五、微生物學(xué)診斷分離與鑒定程序可參見(jiàn)圖8-1,p106。采病料分離培養(yǎng)敗血癥病例采集內(nèi)臟組織（肝脾腎等），對(duì)幼畜腹瀉及豬水腫病病例應(yīng)取其各段小腸內(nèi)容物或黏膜刮取物以及相應(yīng)腸段的腸系膜淋巴結(jié)，分別在麥康凱平板和血平板上劃線(xiàn)分離培養(yǎng)。2.可疑菌落生化鑒定挑取麥康凱平板上的紅色菌落或血平板上呈溶血(仔豬黃痢與水腫病菌株)的典型菌落幾個(gè)，分別轉(zhuǎn)種三糖鐵（TSI）培養(yǎng)基和普通瓊脂斜面做初步生化鑒定和純培養(yǎng)。,19991228002,.,15,3.純培養(yǎng)物抗原鑒定將TSI瓊脂反應(yīng)模式符合埃希氏菌屬的生長(zhǎng)物或其相應(yīng)的普通斜面純培養(yǎng)物做O、K抗原鑒定。4.檢測(cè)毒力因子確定其屬于何類(lèi)致病性大腸桿菌。六、防治1.目前已有菌苗，包括抗粘附素的含單價(jià)或多價(jià)菌毛抗原的滅活全菌苗或亞單位苗；2.抗腸毒素的類(lèi)毒素苗；3.表達(dá)一種或兩種粘附素以及同時(shí)表達(dá)一種粘附素和腸毒素的基因工程菌苗等。用這些菌苗免疫懷孕母畜后，均能使其后代從初乳中獲得抗體而被動(dòng)保護(hù)。,19991228002,.,16,4.用多種常見(jiàn)O抗原的雞大腸桿菌滅活油佐劑菌苗，給各種日齡雞注射后可獲得較好的預(yù)防效果，免疫力可達(dá)3-5月不等。5.對(duì)豬水腫病預(yù)防，用由幾種常見(jiàn)O抗原菌株制成的滅活菌苗，小試結(jié)果表明，此苗能較顯著減少仔豬群中該訴的發(fā)病率，保護(hù)率約60-70。6.生物學(xué)方法微生態(tài)制劑。7.抗菌藥物耐藥菌株產(chǎn)生，藥敏試驗(yàn)。,19991228002,.,17,第二節(jié)沙門(mén)氏菌屬沙門(mén)氏菌屬是一群革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌，通常都以周生鞭毛運(yùn)動(dòng)。在三糖鐵瓊脂上常產(chǎn)生H2S，大多沙門(mén)氏菌不發(fā)酵乳唐。絕大多數(shù)沙門(mén)氏菌對(duì)人和動(dòng)物有致病性，能引起人和動(dòng)物的多種不同臨床表現(xiàn)的沙門(mén)氏菌病，并為人類(lèi)食物中毒的主要病原之一，在醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)和公共衛(wèi)生上均十分重要。沙門(mén)氏菌血清型復(fù)雜，有2500種以上。幾乎包括所有對(duì)人和動(dòng)物致病的血清型菌株。,19991228002,.,18,一、形態(tài)及染色特性形態(tài)染色特性與同科其他菌屬相似，呈桿狀，0.7-1.5umX2.0-5.0um，革蘭氏陰性。除雛沙門(mén)氏菌和雞沙門(mén)氏菌無(wú)鞭毛不運(yùn)動(dòng)外，其余均有周生鞭毛可運(yùn)動(dòng)，大多數(shù)有菌毛。二、培養(yǎng)及生化特性本屬大多數(shù)細(xì)菌的培養(yǎng)特性與埃希氏菌屬相似。沙門(mén)氏菌在肉湯瓊脂上生長(zhǎng)貧瘠，形成較小的菌落。在腸道菌鑒別或選擇性培養(yǎng)基上，大多數(shù)菌株因不發(fā)酵乳糖而形成無(wú)色菌落。在SS培養(yǎng)基生長(zhǎng)良好!,19991228002,.,19,三、抗原及變異沙門(mén)氏菌具有O、H、K和菌毛四種抗原。O和H抗原是其主要抗原，構(gòu)成沙門(mén)氏菌血清型抗原。O抗原是耐熱多糖LPS抗原，1002.5h不被破壞。一個(gè)菌體可有幾種O抗原成分，以數(shù)字表示。將有共同O抗原(群因子)的血清型菌歸為一群，以大寫(xiě)英文字母表示A-F。K抗原是部分沙門(mén)氏菌表面包膜抗原，又稱(chēng)為Vi抗原，不耐熱，601h破壞。H抗原是鞭毛抗原，有63種，不耐熱，6030-60min破壞。H抗原可分為第1相和第2相兩種。,19991228002,.,20,本菌屬至少已有2500個(gè)血清型。對(duì)人和動(dòng)物致病的血清型絕大多數(shù)屬于A(yíng)-F群，在疾病中經(jīng)常出現(xiàn)的卻不足50種。四、致病性本屬菌均有致病性，具有極其廣泛的動(dòng)物宿主。感染動(dòng)物后常導(dǎo)致嚴(yán)重的疾病，并成為人類(lèi)沙門(mén)氏菌病的傳染源之一。因此，沙門(mén)氏菌病是一種重要的人畜共患病。發(fā)病本菌最常侵害幼、青年動(dòng)物，使之發(fā)生敗血癥、胃腸炎及其他組織局部炎癥。,19991228002,.,21,第16章,對(duì)成年動(dòng)物則引起散發(fā)性或局限性沙門(mén)氏菌病，發(fā)生敗血癥的懷孕母畜可表現(xiàn)流產(chǎn)，在一定條件下亦引起急性流行性暴發(fā)。傳播沙門(mén)氏菌常在動(dòng)物與動(dòng)物、動(dòng)物與人、人與人之間通過(guò)直接或間接的途徑傳播，沒(méi)有中間宿主。主要傳染途徑是消化道。許多環(huán)境條件，如衛(wèi)生不良、過(guò)度擁擠、氣候惡鄉(xiāng)等均可增加易感動(dòng)物發(fā)病。五、致病性類(lèi)型根據(jù)對(duì)宿主嗜性不同，可將沙門(mén)氏菌分成三群。,19991228002,.,22,第一群具有高度專(zhuān)嗜性沙門(mén)氏菌，它們只對(duì)人或某種動(dòng)物產(chǎn)生特定的疾病。例如雞白痢和雞傷寒沙門(mén)氏菌僅使雞和火雞發(fā)病，馬流產(chǎn)、牛流產(chǎn)和羊流產(chǎn)等沙門(mén)氏菌；豬傷寒沙門(mén)氏菌僅侵害豬。第二群是在一定程度適應(yīng)于特定動(dòng)物的偏嗜性沙門(mén)氏菌，如豬霍亂和都柏林沙門(mén)氏菌，分別是豬和牛羊的致病菌。第三群是泛嗜性沙門(mén)氏菌，它們有廣泛宿主譜，能引起人和各種動(dòng)物的沙門(mén)氏菌病，具有重要的公共衛(wèi)生意義。如鼠傷寒和腸炎沙門(mén)氏菌等。,19991228002,.,23,六、毒力因子沙門(mén)氏菌毒力因子有多種，主要有脂多糖(LPS)、腸毒素、細(xì)胞毒素及毒力基因等。七、免疫性體液抗體與細(xì)胞免疫在抗沙門(mén)氏菌感染中都很重要。認(rèn)為細(xì)胞免疫在抗沙門(mén)氏菌感染中具有重要作用。八、微生物學(xué)診斷1.未污染病料直接接種普通瓊脂、血瓊脂或SS鑒別培養(yǎng)基平板分離細(xì)菌；2.污染材料如飲水、糞便、飼料、腸內(nèi)容物和已敗壞組織等，常需要增菌培養(yǎng)基增菌后再行分離。,19991228002,.,24,3.增菌培養(yǎng)基最常用的有亮綠-膽鹽-四硫磺酸鈉肉湯、四硫磺酸鹽增菌液、亞硒酸鹽增菌液以及亮綠-胱氨酸-亞硒酸氫鈉增菌液等。這些培養(yǎng)基能抑制其他雜菌生長(zhǎng)而有利于沙門(mén)氏菌大量繁殖。4.鑒別培養(yǎng)基麥康凱、伊紅美藍(lán)、SS、去氧膽鹽鈉-枸櫞酸鹽等瓊脂，絕大多數(shù)沙門(mén)氏菌因不發(fā)酵乳糖，故在麥康凱平板上其菌落顏色與大腸桿菌不同,不顯紅色！可以鑒別。5.生化試驗(yàn)挑可疑菌落分別接種三糖鐵(TSI)瓊脂和尿素瓊脂等培養(yǎng)，觀(guān)察其生化特性。,19991228002,.,25,6.血清型分型鑒定分離菌株的血清型，可應(yīng)用分群抗O血清(A-F群)作凝集試驗(yàn)，以鑒定其群別。也可用直接凝集、免疫熒光、ELISA、PCR等方法鑒定。九、防制目前的疫苗多限于預(yù)防各種家畜特有的沙門(mén)氏菌病，例如豬副傷寒、馬流產(chǎn)以及牛、羊的都柏林等沙門(mén)氏菌的滅