實(shí)驗室檢查.doc

實(shí)驗室檢查一、血液采集1. 靜脈采血；頸靜脈、前臂頭靜脈、后肢隱外靜脈、隱內(nèi)靜脈2. 心臟采血；胸右側(cè)第四或第五肋間抗凝劑：1. 乙二胺四乙酸（EDTA）：對血紅蛋白、血小板計數(shù)、血片染色均無影響，通常配成10溶液，每2滴可使5毫升血液不凝固，但不能用于輸血。2. 草酸鉀：優(yōu)點(diǎn)溶解度大，抗凝作用強(qiáng)，缺點(diǎn)能使紅細(xì)胞縮小，不適合用于紅細(xì)胞壓積的測定。3. 草酸銨與草酸鉀合劑：草酸鉀4克，草酸銨6克，蒸餾水1000毫升，不能用于輸血。4. 枸櫞酸鈉：常用于血沉測定和輸血時的抗凝劑，不適用于血液化學(xué)檢查，配成3.8溶液，與采血量以1:10比例加入5. 肝素：不宜做纖維蛋白原測定，其抗凝血涂片染色時，白細(xì)胞的著染性較差。血樣保存最長期限：白細(xì)胞計數(shù)23小時，紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白測定21小時，紅細(xì)胞沉降率3小時，紅細(xì)胞壓積測定24小時，血小板計數(shù)1小時放入冰箱內(nèi)保存紅細(xì)胞計數(shù)紅細(xì)胞計數(shù)：是指計算每立方毫米血液中所含紅細(xì)胞的數(shù)目。獸醫(yī)臨床多采用在試管內(nèi)稀釋的血液進(jìn)行顯微鏡計數(shù)。目前應(yīng)用廣泛的是血球自動計數(shù)儀計數(shù)。實(shí)驗所需的試劑： 生理鹽水、蒸餾水、酒精、乙醚及動物血液等 實(shí)驗器材： 顯微鏡、計數(shù)板、計數(shù)器、血蓋片、小試管、5mL吸管、吸（洗）爾球、脫脂棉、擦鏡紙等 實(shí)驗的主要方法及步驟（稀釋法） 1.血液的稀釋：用生理鹽水作為稀釋液，血液作200倍或是400倍稀釋 2 .尋找計數(shù)室：將計數(shù)板蓋上血蓋片平放在顯微鏡的載物臺上，在低倍鏡、暗視野下尋找計數(shù)室3 .充液：將配好的稀釋液用吸管吸取一滴充在計數(shù)板與血蓋片之間，并靜置12min，等待紅細(xì)胞全部下沉方可計數(shù)4.計數(shù)：在高倍鏡下計數(shù)，計紅細(xì)胞計數(shù)室中的四角的及中央的一個總共是5個中方格的紅細(xì)胞數(shù)。分別按照一定的順序及壓線的原則。五個中方格分別用：x1、 x2 、x3、x4 、x5 表示。總數(shù)用X表示5.計算：每立方毫米血液中所含的紅細(xì)胞總數(shù)用“R”表示 R=（x1+x2+x3+x4+x5）510血液稀釋倍數(shù)，其中：x1x5為五個中方格的紅細(xì)胞數(shù)，5表時只數(shù)5個中方格的數(shù)目，故算出1mm2的紅細(xì)胞數(shù)，則要乘以5 ，10表示：計數(shù)室的深度為0.1mm，要算出1mm的紅細(xì)胞數(shù),則要乘以10。注：各種動物正常數(shù)值見書（注意單位）注意事項 1.所用的器材必須是清潔干燥的 2吸取液體的量一定要準(zhǔn)確，過多或過少都會影其結(jié)果 3使用顯微鏡一定要規(guī)范，將其平放 4.充液時要將稀釋液搖勻，量不可過多也不能太少，不能有氣泡 5尋找計數(shù)室時光圈要盡量關(guān)小，不要關(guān)死，否則在高倍鏡下就看不到計數(shù)室 6在計數(shù)時，不要把雜質(zhì)和紅細(xì)胞相混淆，否則就會影響結(jié)果 7五個中方格一定要找準(zhǔn)確，特別是中間的中方格的確定臨床意義 紅細(xì)胞增多：紅細(xì)胞和血紅蛋白含量增多，絕大多數(shù)為相對增多，見于各種因素導(dǎo)致的脫水等 紅細(xì)胞減少：紅細(xì)胞和血紅蛋白含量降低，主要是由于紅細(xì)胞損失過多或生成不足所致，可見于各種貧血和失血、溶血、紅細(xì)胞生成障礙等二、白細(xì)胞計數(shù)實(shí)驗試劑 1% 3%冰醋酸或1%鹽酸、蒸餾水、酒精、乙醚及動物血液等 實(shí)驗器材 顯微鏡、計數(shù)板、計數(shù)器、血蓋片、小試管、0.5mL吸管、吸爾球、擦鏡紙等 實(shí)驗 步驟紅細(xì)胞計數(shù)白細(xì)胞計數(shù)血 液 稀 釋 取4mL的生理鹽水于小試管中，然后用血紅蛋白吸管吸血液10L，將管外壁的血液擦拭干凈，放置于裝有生理鹽水的小試管中，混勻 白細(xì)胞稀釋液0.38mL或0.4mL；用沙利氏吸管吸取供檢血液20L，加入試管內(nèi)，混勻 尋找計數(shù)室 將計數(shù)板蓋上血蓋片平放在顯微鏡的載物臺上，在低倍鏡下，暗視野下尋找計數(shù)室 與紅細(xì)胞計數(shù)相似，只是將鏡頭調(diào)到白細(xì)胞計數(shù)室中（四角的4個大方格中的任何一個）充液 將配好的稀釋液用吸管吸取一滴充在計數(shù)板與血蓋片之間，并靜置12min再計數(shù) 同紅細(xì)胞計數(shù) 計數(shù) 在高倍鏡下計數(shù)，計紅細(xì)胞計數(shù)室中四角及中央各一個中方格，總共4個中方格中的紅細(xì)胞數(shù) 用低倍鏡計數(shù)，計4個角上的4個大方格（共有164=64個中方格）的白細(xì)胞數(shù)，按順序全部數(shù)完計算 每立方毫米血液中所含的紅細(xì)胞總數(shù)（個/mm3）=（x1+x2+x3+x4+x5）510稀釋倍數(shù)白細(xì)胞數(shù)（個/mm3）=W/41020= W50或白細(xì)胞數(shù)（個/L）=W/41020106注意事項 與紅細(xì)胞計數(shù)相似，但也有區(qū)別：在計數(shù)時，不要把雜質(zhì)和白細(xì)胞相混淆，否則就會影響結(jié)果四個大方格的白細(xì)胞數(shù)之間的誤差不能超過20%臨床意義 1.白細(xì)胞增多：可見于多數(shù)細(xì)菌性感染和炎癥，白血病時以白細(xì)胞的顯著增多為特征 2.白細(xì)胞減少：主要見于某些病毒性傳染病，長期應(yīng)用某些藥物等白細(xì)胞分類計數(shù)三、白細(xì)胞分類計數(shù)實(shí)驗試劑 瑞氏染色液、緩沖液、蒸餾水、香柏油等 實(shí)驗器材 載玻片、脫脂棉、玻璃鉛筆、吸水紙、染色缸及染色架、試管架、顯微鏡、擦鏡紙、分?jǐn)?shù)計數(shù)器等 實(shí)驗步驟（一）血涂片的制作 1. 取兩張載玻片，一張作為載片，選一張邊緣比較光滑的玻片作為推片 2. 將被檢血液滴在載片的右側(cè) 3. 右手持推片置于血滴前方，并輕輕向后移動推片，與血液接觸，待血液擴(kuò)散開后，再以3040向前均速推進(jìn)涂抺，即形成一血膜，迅速自然風(fēng)干，所涂血片，血液分布均勻，厚度適當(dāng)，對光觀察呈霓虹色，血膜位于玻片中央，兩端留有適當(dāng)空隙（以便注明畜別，編號及日期），血片制作完畢后，即可染色。注意事項：涂片時，血滴越大角度越大，推片速度越快則血膜越厚，反之血片越薄。血片大薄，50的白細(xì)胞集中于邊緣或尾部，血涂片過后，細(xì)胞重疊縮小均不利于白細(xì)胞分類計數(shù)。影響血液涂片分布不均的主要原因：1推片邊緣不整齊2. 載玻片不清潔3. 推片角度4.推片速度（二）血涂片的染色（瑞氏染色法） 1. 待血膜干燥后，在血膜的兩端用玻璃鉛筆劃兩條豎線 2. 把玻片平放在染色架上，滴加瑞氏染液數(shù)滴（以蓋滿血膜為度），染色12min 3. 加等量的磷酸鹽緩沖液，用吸爾球吹勻，再染色35min 4. 用細(xì)小的流水沖洗，吸水紙吸干，待檢姬姆薩氏染色法：先將血涂片用甲醇固定35分，然后置于新配的姬姆薩氏應(yīng)用液中，染色3060分取出血片，水洗，吸干，待檢（三）鏡 檢先用低倍鏡找到圖像，再用高倍鏡觀察血膜上細(xì)胞的分布情況及染色質(zhì)量等。再換用油鏡進(jìn)行觀察計數(shù)計數(shù)方法：通常在血片的兩端或兩端的上下部按二區(qū)或四區(qū)計數(shù)法，有順序地移動血片，分別記錄各種白細(xì)胞數(shù)，最后計算出各種白細(xì)胞所占比例（%）嗜堿粒細(xì)胞嗜酸粒細(xì)胞桿狀核 晚幼 分葉核單核細(xì)胞 小淋巴細(xì)胞 大淋巴細(xì)胞注意事項1. 載玻片應(yīng)事先處理干凈 2. 推制血片時用力要均勻，兩張玻片不要壓得太緊 3. 推片的邊緣要平整光滑，否則血膜邊緣不均勻且不整齊4. 畫線是起到防止染色液外溢的作用，對染色效果沒有影響5. 滴加瑞氏染液的量不宜太少兩個概念1. 核左移 ：分析嗜中性粒細(xì)胞的增減變化時，桿狀核和晚幼細(xì)胞增多，甚至出現(xiàn)髓細(xì)胞的比例增高，稱為“核左移”2. 核右移 ：若分葉核細(xì)胞顯著增多，并且細(xì)胞核分為45葉甚至多葉的比例較多者，則稱為“核右移”，表示造血機(jī)能減退 臨床意義1. 嗜中性粒細(xì)胞增多：常見于各種急性感染性疾病、急性炎癥及重癥燒傷、創(chuàng)傷2. 嗜中性粒細(xì)胞減少：常見于病毒性疾病及各種疾病的重危期（如中毒性休克、胃腸破裂等）3, 嗜酸粒細(xì)胞增多：見于某些寄生蟲病、過敏性疾?。ㄊn麻疹等）以及濕疹、疥癬等皮病4. 嗜酸粒細(xì)胞減少：見于某些疾病的重癥期，也可見于應(yīng)用皮質(zhì)類固醇藥物。嗜酸粒細(xì)胞長時間消失，表示預(yù)后不良，但消失后又重新出現(xiàn)，則說明病情好轉(zhuǎn)5. 淋巴細(xì)胞增多：見于某些慢性傳染病、淋巴性白血??；急性傳染病的恢復(fù)期、某些病毒性疾病及血孢子蟲病等6. 淋巴細(xì)胞減少：當(dāng)嗜中性粒細(xì)胞絕對值增多時，伴隨減少的常常是淋巴細(xì)胞。說明機(jī)體與病原處于斗爭階段，此后淋巴細(xì)胞由少逐漸增多，往往是預(yù)后良好的指征 7. 單核細(xì)胞增多：原蟲病、慢性細(xì)菌性疾病以及病毒性疾?。ㄈ珩R傳染性貧血）8. 單核細(xì)胞減少：急性傳染病的初期和各種疾病的垂危期嗜堿粒細(xì)胞的增多或減少：此種情況較少見，對其增多、減少的意義尚不是很清楚。診斷意義不是很大四、血紅蛋白測定實(shí)驗原理 紅細(xì)胞遇酸溶解，游離出血紅蛋白，并被酸化為褐色的酸性血紅素，稀釋后與標(biāo)準(zhǔn)色柱比色，即可求得血紅蛋白的含量實(shí)驗器材 血紅蛋白試紙、血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)比色板、血紅蛋白吸管、比色管、比色架、小試管、脫脂棉等實(shí)驗試劑 3.8%枸櫞酸鈉、1%鹽酸溶液、蒸餾水、酒精、乙醚等 血紅蛋白試紙法 測定時，取試紙一條，吸附被檢血液一小滴，待血完全浸透后，立即置于所附標(biāo)準(zhǔn)色板的小孔下，肉眼與色板色澤進(jìn)行比較，選擇顏色相同或近似者，即得血液所含血紅蛋白的克數(shù)沙利氏血紅蛋白測定法（1）在測定管內(nèi)加1%鹽酸溶液至“2”刻度處（2）用血紅蛋白吸管吸20L的血液， 加入測定管內(nèi)并混勻，注意不要產(chǎn)生氣泡（3）靜置10min，然后向比色管內(nèi)滴加鹽酸溶液并搖勻，再與標(biāo)準(zhǔn)比色管進(jìn)行比色。直到比色管內(nèi)的顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色管一致為止（4）讀取液體凹面的刻度，即為血紅蛋白的含量（5）將結(jié)果與正常值比較臨床意義（1）血紅蛋白含量增多：多見于機(jī)體脫水而血液濃縮和各種疾病，如腹瀉、嘔吐等（2）血紅蛋白含量降低：主要是由于紅細(xì)胞損失過多或生成不足所致，可見于各種貧血和失血、溶血、紅細(xì)胞生成障礙等注意事項 各種器材必須干凈、干燥 用血紅蛋白吸血不能多也不能少 讀數(shù)時若管內(nèi)有氣泡，可蘸取酒精少許并接觸氣泡部位，即會消除 血紅蛋白吸管外壁的液體一定要擦干凈，否則結(jié)果就會偏大。 比色的時候一定要用光面比色，另外加鹽酸的時候要一滴一滴加，不能過快，否則顏色就會變淺五、紅細(xì)胞沉降速率測定器材與試劑血沉管和血沉架，魏氏血沉管；5mL刻度試管，3.8%枸椽酸鈉溶液1. 取5mL刻度試管加3.8%枸櫞酸鈉1mL，再采靜脈血4mL，將之混勻2. 用血沉管吸以上血液至“0”刻度處，用脫脂棉擦去管外壁的血液3.將血沉管垂直放置于血沉架上，并開始計時，每隔15min計紅細(xì)胞下降的刻度（毫米數(shù)），共計數(shù)四次值注意事項1. 血沉管必須垂直放置，如果傾斜血沉?xí)涌?. 血沉管必須是干燥干凈的，否則也會影響血沉的速度3. 室溫條件要在20左右，否則會影響血沉的速度，溫度升高，血沉加快；溫度降低，血沉減慢4. 血液抗凝劑的比例應(yīng)為4:1；否則也會影響結(jié)果臨床意義1. 血沉加快：見于各種貧血、急性全身性感染、各種急性局部炎癥、創(chuàng)傷、手術(shù)、骨折等細(xì)胞受到損傷及某些毒物中毒等2. 血沉變慢：可見于脫水、高熱性疾病、心力衰竭，以及某些引起纖維蛋白原含量嚴(yán)重減低的肝臟疾患等動物15min30min45min60min犬0.200.901.202.50貓0.100.700.803.00六、血小板計數(shù)原理：尿素能容解紅細(xì)胞及白細(xì)胞而保存完整形態(tài)的血小板，經(jīng)稀釋后在細(xì)胞計數(shù)室內(nèi)直接計數(shù)，以求的每立方毫米血液內(nèi)的血小板數(shù)。稀釋液中的枸櫞酸鈉有抗凝作用，甲醛可固定血小板的形態(tài)。試劑：尿素10.0克，枸櫞酸鈉0.5克，40甲醛溶液0.1毫升，蒸餾水加至100毫升。待上述試劑完全溶解后，過濾，置冰箱可保存12周，在2232在稀釋液變質(zhì)時，溶解紅細(xì)胞能力就會降低。方法：1. 吸取稀釋液0.38毫升置于小試管中。2. 用沙利氏吸血管吸取混有EDTA二鈉的新鮮血液至20立方毫米刻度處。3. 擦去管外血液，插入試管，吹吸數(shù)次，輕輕振蕩，充分混勻。靜置20分以上，使紅細(xì)胞溶解。4. 用毛細(xì)細(xì)血管吸取一小滴，充入計數(shù)室，靜置10分，用高倍鏡觀察在高倍鏡下，血小板呈橢圓形，圓形或不規(guī)則折光小體，注意切勿誤將塵埃等異物計入。計算：1mm中的血小板個數(shù)=X200注意事項：器械必須清潔，稀釋液必須新鮮無沉淀，否則影響計數(shù)結(jié)果。采血要迅速，以防止血小板離體后破裂，聚集，造成誤差。滴入計數(shù)室前要充分振蕩，使紅細(xì)胞充分溶解，但不能振蕩過久或過于劇烈，以免破壞血小板，滴入計數(shù)室后，應(yīng)靜置一段時間。在夏季，應(yīng)注意保持濕度，即將計數(shù)板放在鋪有濕濾紙的