NF-κBp 65和HIF-1α在宮頸鱗癌組織中的表達及臨床意義.doc

NF-Bp 65和HIF-1在宮頸鱗癌組織中的表達及臨床意義作者：萬金華,馬生秀,藺小倩單位：1.青海大學醫(yī)學院；2.青海大學附屬醫(yī)院婦科【摘要】 目的 探討宮頸鱗癌組織中NF-κB p65、HIF-1α的蛋白表達水平及臨床病理意義。方法 采用免疫組織化學（PowerVision TM）二步法對56例宮頸鱗癌和25例正常宮頸組織進行NF-κB p65、HIF-1α蛋白檢測。 結果 宮頸鱗癌組織NF-κB p65、HIF-1α的表達均高于對照組正常宮頸組織（P<0.01）。NF-κB p65的蛋白表達與患者的病理分級及有無淋巴轉移存在相關性(P<0.05)；HIF-1α的蛋白表達與患者的臨床分期及有無淋巴轉移存在相關性(P<0.05)。NF-κB p65和HIF-1α的蛋白表達呈正相關（r=0.439,P<0.01）。 結論 聯(lián)合檢測NF-κB p65和HIF-1α蛋白表達對診斷宮頸鱗癌的意義優(yōu)于單純檢測NF-κB p65或HIF-1α蛋白表達。 【關鍵詞】 宮頸鱗癌 免疫組織化學 NF-κB p65 HIF-1αEXPRESSIONS OF NF-κBp65 AND HIF-1ΑIN TISSUE OF CERVICAL SQUAMOUS CELL CARCINOMA AND ITS CLINICAL SIGNIFICANCE Wan Jinhua1 Ma Shengxiu2 Lin Xiaoqian 1.The Medical College of Qinghai University; 2.Department of Gynecology, The Affiliated Hospital of Qinghai University Abstract Objective To explore the relationship between expression of NF-κB p65 and HIF-1α in tissue of cervical squamous cell carcinoma and the clinical significance. Methods The expressions of NF-κB p65 and HIF-1α were examined by immuohistochemical staining in 56 specimens of cervical squamous cell carcinoma and 25 specimens of normal cervical tissue. Results The expression rates of NF-κB p65 and HIF-1α in cervical squamous cell carcinoma appeared significantly higher than that in normal cervical tissue ( P < 0. 01) . Expression of NF-κB p65 was correlated with histological grade and lymph node metastasis of cervical carcinoma (P < 0. 05); Expressions of HIF-1α was correlated with clinical stage and lymph node metastasis of cervical carcinoma (P < 0. 05). HIF-1αexpression was positively correlated with NF-κB p65 expression (r=0.584, P<0.01). Conclusion The combination of NF-κB p65 and HIF-1α expression in tissue of cervical squamous cell carcinoma shown much more valuable diagnostic indicator than either NF-κB p65 or HIF-1α alone. Key words Cervical carcinoma Immunohistochemistry NF-κB p65 HIF-1α NF-κB（nuclear facter-kappaB， NF-κB）被發(fā)現(xiàn)在控制免疫和炎癥反應中具有重要作用：能抑制腫瘤細胞的凋亡,促進腫瘤細胞的增殖1 。在人體內，NF-κB多為由p65（RelA）和p50組成的異源二聚體，是能調節(jié)多種基因表達的蛋白分子。資料表明人類許多不同組織來源的腫瘤中均有不同程度的NF-κΒ被異常激活2。HIF-1α(hypoxia-include factor 1α,HIF-1α)是缺氧條件下廣泛存在于哺乳動物和人體內的一種轉錄因子,在腫瘤血管生成中起核心調控作用3。本研究旨在探討聯(lián)合檢測NF-κB p65、HIF-1α的蛋白表達對早期診斷宮頸鱗癌的意義。 1 材料與方法 1.1 臨床資料 隨機選取2006年10月至2008年4月在青海大學附屬醫(yī)院腫瘤婦科住院治療的56例宮頸鱗癌患者的手術切除標本（取標本前未行放、化療）。中位年齡48歲(2669歲) ； 藏族婦女25例，漢族婦女31例；根據(jù)國際婦產科聯(lián)盟( FIGO) 分期標準判定,其中原位癌(0 期) 5例, I 期17 例, II 期21例，期13例;根據(jù)WHO標準組織分級標準判定，級（高分化）16例，級（中分化）21例，級（低分化）19例。正常對照組25例,中位年齡42歲(3254歲) ,標本為子宮肌瘤患者行手術切除的正常宮頸組織，標本均經組織病理學確診。 1.2 主要試劑 NF-κB p65單克隆抗體濃縮液購自Santa Cruze 公司; 鼠抗人HIF-1α單克隆抗體、PV9000 二步法免疫組化檢測試劑及濃縮型DAB 底物試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。 1.3 實驗方法 標本來自青海大學附屬醫(yī)院病理科宮頸癌瘤組織石蠟標本，所有標本連續(xù)切片3張，厚4 μm。NF-κB p65、HIF-1α檢測均采用PV9000二步法免疫組織化學方法檢測，具體步驟參照說明書進行。NF-κB p65濃縮液稀釋100倍使用，HIF-1α為工作液。以正常宮頸組織為陰性對照，以PBS液替代一抗作空白對照。 1.4 結果判定 NF-κB p65、HIF-1α免疫組化染色均以細胞核或細胞漿染成棕褐色或黃色者為陽性。見圖1及圖2。雙盲法隨機選取5個高倍鏡（×400）視野進行計數(shù)及評分。根據(jù)染色顯色強度與及陽性細胞比例進行綜合評分4 : 根據(jù)著色深淺評分:無色或藍色為0 分,淺黃色為1 分,棕黃色為2 分,棕褐色為3 分; 著色細胞占計數(shù)細胞百分率: ≤5 %為0 分, > 5 %25 %為1分, >25 %50 %為2 分, > 50 %為3 分; 染色分值綜合判斷: 陽性細胞著色深淺分值( 與的積) , 結果0 分為陰性,13 分為+ ,46 分為+ + , 9分為+ + + 。 1.5 統(tǒng)計學方法 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，統(tǒng)計推斷采用χ2檢驗和Spearman 等級相關分析，以 P<0.05作為差別有顯著意義的檢驗標準。 2 結果 2.1 NF-κB p65、HIF-1α在宮頸組織中的表達 NF-κB p65、HIF-1α均可在細胞核和細胞漿中呈陽性表達，其表達率分別為69.6（39/56），71.4（40/56），以上兩者與對照組正常宮頸組織相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。詳細結果見表1。 表1NF-κB p65、HIF-1α在宮頸鱗癌和正常宮頸組織中的表達 2.2 NF-κB p65、HIF-1α在宮頸鱗癌中的表達及其與臨床病理因素的關系 NF-κB p65的過表達與宮頸鱗癌的分化程度及盆腔淋巴轉移有關，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05；但與年齡、臨床分期及民族差異無顯著性，P>0.05。而HIF-1α的蛋白表達與患者的臨床分期及有無淋巴轉移相關，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05；與年齡、組織學分級以及民族差異無顯著性，P>0.05。詳細結果見表2。表2NF-κB p65、HIF-1α與宮頸鱗癌的臨床病理指標關系 2.3 宮頸鱗癌組織中NF-κB p65與HIF-1α蛋白表達的相關性 Spearman 等級相關分析顯示，NF-κB p65的表達與HIF-1α的表達呈明顯正相關（rs=0.584,p=0.001）。詳細結果見表3。表3NF-κB p65、HIF-1α在宮頸鱗癌組織中表達的相關性分析 3 討論 本研究結果顯示NF-κB p65在宮頸鱗癌組織中的陽性表達率明顯高于正常宮頸組織（P<0.01）。在高、中、低分化的宮頸鱗癌組織中NF-κB p65的陽性表達率差別有顯著性，P<0.05。在有盆腔淋巴結轉移的宮頸鱗癌患者的陽性表達率明顯高于無轉移的宮頸鱗癌患者的陽性表達率，P<0.05。而NF-κB p65的陽性表達與患者的年齡及臨床分期無關（P>0.05），該結果與文獻5， 6研究結果相似。本研究結果表明NF-κB p65的異常表達與宮頸鱗癌的病理學類型及轉移過程相關。 HIF-1 在缺氧誘導下激活翻譯基因編碼血管內皮生長因子(VEGF)、促紅細胞生成素(EPO)、糖酵解酶等多種靶基因的表達，在腫瘤血管生成與侵襲中起重要作用7。本研究結果也顯示HIF-1α在宮頸鱗癌組織中的陽性表達率為68.9，而在對照組正常宮頸組織中無表達，差異有顯著性，P<0.01。本實驗結果也顯示HIF-1α的蛋白陽性表達與患者的臨床分期及有無淋巴轉移有關(P<0.05)；而與患者的年齡和病理分級無關（P>0.05）。該結果與徐軍等8的研究結果相似。提示HIF-1α的異常表達與宮頸鱗癌的發(fā)展及轉移相關。 本研究對25例藏族及31例漢族宮頸癌患者NF-κB p65的蛋白陽性表達進行比較，其陽性率分別為80.0、63.1；而HIF-1α蛋白陽性表達率分別為72.0%、70.9%，均無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。暫且考慮在不同民族間NF-κB p65和HIF-1α的蛋白表達不存在顯著性差異，其最終結論有待于進一步擴大樣本和進行不同地域的民族之間的研究認定。 文獻報道NF-κB為HIF-1α的上游基因并對HIF-1α的表達及維持其活性起著重要作用9。 本研究對NF-κB p65和HIF-1α在宮頸癌中蛋白表達的相關性研究顯示，宮頸癌中NF-κB p65與HIF-1α的蛋白表達呈明顯正相關(rs=0.584,P<0.01), 提示NF-κB p65可能調控并促進HIF-1α基因表達，共同參與了宮頸癌的發(fā)展及轉移過程。【參考文獻】 1 Karin M. 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