生化分析干擾試驗(yàn)

分析干擾試驗(yàn)一分析的干擾分析的干擾廣義上是指某一物質(zhì)對某分析物的濃度或催化活力測定中任何一步驟的影響作用稱為分析干擾。很難區(qū)分清楚2個(gè)相互很近的詞義“干擾”(Interference)和“固有的特異性欠缺”(Inherent lack of specificity)。分析物(Analyte)是標(biāo)本中準(zhǔn)備測定的組分。干擾物(Interferent)也是標(biāo)本中的一個(gè)組分，它不是被分析物，但它改變最后的結(jié)果。干擾作用可看成是絕對的或相對的，絕對干擾作用是：一般病人標(biāo)本中不含有某物質(zhì)，一旦它的存在即會(huì)引起干擾。相對干擾作用：一般病人標(biāo)本中含有某物質(zhì)，其含量相當(dāng)于混合樣品中的平均濃度，不同病人樣品中含該物質(zhì)的濃度變化引起干擾作用的變化。從實(shí)用考慮：相對的內(nèi)容在臨床實(shí)驗(yàn)中更有意義。例如：在標(biāo)本中含有120g/L蛋白和正常標(biāo)本含有70g/L相比較確定蛋白會(huì)引起干擾。這樣，純粹的干擾作用是50g/L而不是120g/L蛋白。在正常血清的基體中70g/L蛋白的作用是恒定的，相對于真正的分析物是系統(tǒng)的方法偏倚。常以空白測定和樣品的預(yù)處理來消除這樣的干擾所產(chǎn)生的恒定偏倚。用含有血清的校準(zhǔn)品作校準(zhǔn)及計(jì)算補(bǔ)償因子也是用來消除這類系統(tǒng)偏倚。干擾不涉及在分析前就使分析物濃度發(fā)生真實(shí)變化的作用，這些作用可以是：體內(nèi)藥物作用（如：因使用藥物后的生理響應(yīng)使激素濃度變化）。標(biāo)本處理（由于蒸發(fā)、溶血或者血清和凝塊過長的不分離使電解質(zhì)、蛋白、水含量的改變）。標(biāo)本收集例如：在靜脈滴注時(shí)（內(nèi)含分析物）取樣。這些作用可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的臨床應(yīng)用，但不能視作“分析干擾”。因?yàn)椴还芊治鑫镌瓉砣绾?，一個(gè)檢測系統(tǒng)或分析方法應(yīng)檢測標(biāo)本中所有的分析物。分析干擾所引起最終結(jié)果是人為的增加（陽性干擾）或減少（陰性干擾）。二干擾物質(zhì)的來源：在標(biāo)本中的干擾物可分成內(nèi)源性和外源性；1體內(nèi)某些病理?xiàng)l件下產(chǎn)生的（例如：膽紅素、脂肪、蛋白質(zhì)、血紅蛋白等）；2在病人治療時(shí)攝入的（例如：藥物、非腸道維生素、血漿增溶劑、抗凝劑等）；3自我攝入（營養(yǎng)補(bǔ)充、饑餓過度、酒精或藥品中毒）；4由于標(biāo)本被污染（抗凝劑、防腐劑、血清分離器、收集、容器、塞子等）；三干擾的機(jī)理：由于某干擾物的存在以多種方式影響分析過程。1物理作用：干擾物具有的物理性質(zhì)，使它和分析物一樣被檢測和測定出來。如它的顏色、光散射（光吸收）、洗脫位置、電極響應(yīng)等。干擾物可能會(huì)改變標(biāo)本的物理特性：如表面張力、粘度、濁度、離子強(qiáng)度等，干擾檢測結(jié)果。2化學(xué)作用干擾物可能會(huì)影響酶活力，例如：阻止金屬激活劑結(jié)合到活性中心上去，氧化必須的巰基等；干擾物也可破壞或阻止反應(yīng)，例如：破壞試劑或抑止指示反應(yīng)。干擾物也可改變分析物的形式，例如：形成復(fù)合物或沉淀。3非特異性干擾物可能和分析物以同樣的方式參與反應(yīng)，例如：苦味酸肌酐方法中酮酸干擾，重氮膽紅素方法中吲哚酚硫酸鹽的干擾。在免疫化學(xué)方法中干擾物可能和抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。例如：茶堿方法中咖啡因的干擾。干擾物可能催化某一反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)果中和了底物。例如：腺苷激酶可在CK反應(yīng)中消耗底物ADP。4水取代作用非水物質(zhì)（蛋白、脂質(zhì)），由于取代了血漿中部分水體積，影響了一些分析物的測定。這些作用考慮或不考慮為干擾作用，取決于要求的結(jié)果是以總體積的濃度表示，還是以血漿水的濃度來表示。臨床要求較之分析原理更重要，須確定是否考慮取代作用是一個(gè)干擾，例如：用火焰光度法或間接電位法作Na+測定時(shí)，高脂血癥被考慮為是一種干擾。因?yàn)镹a+在血漿水中的濃度在臨床上有重要意義。四. 臨床重要性：1干擾對于總分析誤差有時(shí)是一個(gè)主要因素，每個(gè)病人結(jié)果和真值間的偏離可能有三個(gè)原因：1) 系統(tǒng)偏差；2) 不精密度；3) 干擾。干擾實(shí)驗(yàn)評價(jià)主要估計(jì)偏倚和不精密度的作用，干擾試驗(yàn)通常受標(biāo)本條件所限，對實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員而言通常是溶血、黃疸和脂血。2干擾可視作系統(tǒng)的和隨機(jī)的。 對一個(gè)特別監(jiān)測的病人而言，如干擾物總是以同一濃度存在的話，偏倚將是恒定的，偏倚隨干擾物濃度而改變。這種干擾是系統(tǒng)的。 對于一給定病人人群，由于干擾物濃度各異，由干擾物所形成的偏倚將是隨機(jī)的，而且顯著地作用于總隨機(jī)誤差，影響病人結(jié)果。 無論何種情況，由一個(gè)干擾物引起的未預(yù)料作用可導(dǎo)致對實(shí)驗(yàn)室結(jié)果解釋的嚴(yán)重誤差。3實(shí)驗(yàn)室是克服這些問題的主要角色，可由：1) 只使用對干擾物的敏感度不高和確定的方法。2) 獲取資料，確定是否有干擾物質(zhì)存在于樣品。3) 告訴醫(yī)生，由于有干擾存在，結(jié)果可能是不可靠的。廠商可提供給實(shí)驗(yàn)室完整的有關(guān)干擾評價(jià)的結(jié)果文件，這是很好的資料來源。五實(shí)驗(yàn)步驟的綜述：有兩種基本方法評價(jià)檢測系統(tǒng)或分析方法對干擾的敏感性。但每一種都有內(nèi)在局限性，建議應(yīng)一起使用以相互補(bǔ)充。1第一種方法是：將陽性干擾物加入臨床標(biāo)本的混合液（干擾測定樣品）中，和不加的同一混合液（干擾對照樣品）組比較有無偏倚，稱為“配對差異”試驗(yàn)。混合液的干擾物濃度應(yīng)具臨床決定性水平，根據(jù)分析物情況應(yīng)做幾個(gè)臨床決定性水平濃度處的實(shí)驗(yàn)。一般最有效的方法是在較高濃度下對系列可能的干擾物作初步篩選。如果沒有發(fā)現(xiàn)具臨床顯著意義，則該物質(zhì)不是干擾物，沒有必要進(jìn)一步做實(shí)驗(yàn)。反之，具臨床顯著意義的，應(yīng)進(jìn)一步作評價(jià)以確定干擾物的濃度和干擾程度間的關(guān)系，這類實(shí)驗(yàn)稱為“劑量響應(yīng)”(Dose-response)系列。2第二種方法是：從被選擇的病人標(biāo)本組中尋找不準(zhǔn)確的結(jié)果。選擇原則：疾?。ㄈ纾簛碜孕呐K病、肝病、或腎病病人的標(biāo)本）；藥物（如：使用過某種想了解的藥物的病人標(biāo)本）；其它不正常組份（如：具不正常膽紅素、脂質(zhì)、血紅蛋白或蛋白的標(biāo)本）。這個(gè)方法需要參考方法，即具低干擾性的良好特異性的方法，以確定在比較研究中的“真值”。3第一種人為加入方法的局限性：1) 在臨床標(biāo)本中的真實(shí)干擾物可能不是原來的藥物，而是代謝產(chǎn)物。2) 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本基體并不代表典型的有問題的臨床標(biāo)本。3) 加入的物質(zhì)和臨床標(biāo)本中的干擾物不相同，如：蛋白結(jié)合、沉淀、或不均一性（異質(zhì)性）。4) 可能實(shí)驗(yàn)水平選擇得太高或太低以至不真實(shí)。4第二種方法的局限性主要是對實(shí)驗(yàn)變異缺乏控制對照。1）本方法并不能確定原因和作用的關(guān)系，它只能說明偏倚和估計(jì)的干擾物的某水平的相對關(guān)系。2) 如果標(biāo)本不新鮮，將會(huì)失去某些易變組份（如乙酰乙酸）。3) 病人通常用多種藥物，因此難于證實(shí)何種藥物的干擾作用。4) 按疾病和用藥對病人分類，不是不可能，至少對許多實(shí)驗(yàn)而言是非常困難的。5) 實(shí)驗(yàn)是一種機(jī)遇，成功取決于在檢