mm_fs_cng_0386 植物油脂檢驗(yàn)磷脂測(cè)定法.doc

此文檔收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除天馬行空官方博客：/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632MM_FS_CNG_0386植物油脂 磷脂 分光光度法MM_FS_CNG_0386植物油脂檢驗(yàn)磷脂測(cè)定法1.適用范圍本方法適用于商品植物油脂中磷脂的測(cè)定。2.原理概要油脂中磷脂即由甘油、脂肪酸、磷酸和氨基醇等所組成的復(fù)雜的化合物。3.鉬藍(lán)比色法3.1.主要試劑和儀器3.1.1.主要試劑50氫氧化鉀溶液；鹽酸、硫酸、氧化鋅、濾紙；0.015硫酸聯(lián)氨溶液；2.5鉬酸鈉稀硫酸溶液：量取140ml硫酸注入300ml水中，搖勻，冷卻至室溫，加入12.5g鉬酸鈉，溶解后加水至500ml，搖勻，靜置24h備用；磷標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取無(wú)水的磷酸二氫鉀0.4391g溶于1000ml水中，作為1號(hào)液，含磷0.1mgml，吸取1號(hào)液10ml，加水稀釋至100ml，含磷0.01mgml，作為2號(hào)液，比色用。3.1.2.儀器瓷坩堝或石英坩堝；分光光度計(jì)或帶塞的50ml比色管；移液管：5、10ml；電爐、高溫爐；容量瓶：100、500、1000ml；表面皿、燒杯、量筒；恒溫水浴鍋；漏斗、坩堝鉗、試劑瓶等。3.2.樣品制備用坩堝稱取試樣約10g（準(zhǔn)確至0.001g），加氧化鋅0.5g，先在電爐上加熱炭化，然后送入550600的高溫爐中灼燒至灰化（白色），灼燒時(shí)間約2h，取出坩堝冷卻至室溫，用熱鹽酸（11）10ml溶解灰分，并加熱微沸5min，將溶解液過(guò)濾注入100ml容量瓶中，用熱水沖洗坩堝和濾紙，待濾液冷卻至室溫后，用50氫氧化鉀溶液中和至出現(xiàn)混濁，緩慢滴加鹽酸使氧化鋅沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀釋至刻度，搖勻。3.3.過(guò)程簡(jiǎn)述3.3.1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：取5只50ml比色管，編成1，2，4，6，8五個(gè)號(hào)碼，按號(hào)碼順序分別注入磷標(biāo)準(zhǔn)2號(hào)液1，2，4，6，8ml，再按順序分別加水9，8，6，4，2ml。接著向5只管內(nèi)各加0.015硫酸聯(lián)氨溶液8.0ml；各加鉬酸鈉稀硫酸溶液2.0ml，加塞、搖勻。去塞，將5只管置于正在沸騰的水浴中加熱10min，取出冷卻至室溫，用水稀釋至50ml，充分搖勻，經(jīng)10min后，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)650nm下，用3cm液槽，用水調(diào)整零點(diǎn)，分別測(cè)定消化值。以消化值為縱坐標(biāo)，以磷量（0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.3.2.比色：用移液管吸取被測(cè)液10ml注入50ml比色管中，加入0.015硫酸聯(lián)氨8.0ml，加2.0ml鉬酸鈉稀硫酸溶液，加塞，搖勻。去塞，將比色管置于正在沸騰的水浴中加熱10min，取出冷卻至室溫，用水稀釋至50ml，充分搖勻，經(jīng)10min后，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)650nm下，用3cm液槽，用水調(diào)整零點(diǎn)，測(cè)定消光值。3.4.結(jié)果計(jì)算根據(jù)被測(cè)液的消光值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得磷量（P），按公式（1）計(jì)算磷脂含量：磷脂（）PV226.31100（1）V1W1000式中：P標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的磷量，mg；V2樣品灰化后稀釋的體積，ml；V1比色時(shí)所取的被測(cè)液體積，ml；26.31每毫克磷相當(dāng)于磷脂的毫克數(shù)；W試樣重量，g。3.5.允許差雙試驗(yàn)結(jié)果允許差不超過(guò)0.04，求其平均數(shù)，即為測(cè)定結(jié)果。測(cè)定結(jié)果取小數(shù)點(diǎn)后第二位。4.重量法4.1.主要試劑和儀器4.1.1.主要試劑丙酮。4.1.2.儀器玻璃漏斗、漏斗架；燒杯：100ml；錐形瓶、濾紙等。4.2.過(guò)程簡(jiǎn)述取混勻的樣品約100ml，加熱約90時(shí)進(jìn)行過(guò)濾。用燒杯稱取試樣25g，加熱至80，加水22.5ml，充分?jǐn)嚢枋怪?，在室溫下靜置過(guò)夜，或進(jìn)行離心沉淀，傾出上層清液，用已知恒重的濾紙（或用抽氣裝置抽濾）進(jìn)行過(guò)濾，待濾液全部濾出后，用冷的丙酮把杯內(nèi)殘留的沉淀沖洗入濾紙中，繼續(xù)用丙酮洗滌濾紙和沉淀，洗至無(wú)油跡為止。待濾紙和沉淀上的丙酮揮盡后，送入105烘箱中烘至恒重。4.3.結(jié)果計(jì)算重量法測(cè)定磷脂含量按公式（2）計(jì)算：磷脂（）W1100（2）W式中：W1沉淀物重量，g