鹽酸氨溴索口腔崩解片在健康志愿者及生物等效性.doc

此文檔收集于網(wǎng)絡，如有侵權(quán)，請聯(lián)系網(wǎng)站刪除鹽酸氨溴索口腔崩解片在健康志愿者的生物等效性許艷華1，薛洪源1，楊漢煜2，賀文濤1，王宇奇1，賈麗霞1（1.白求恩國際和平醫(yī)院 臨床藥理室，河北 石家莊 050082；2. 石藥集團中奇制藥技術(shù)有限公司，河北 石家莊 050011）摘要 目的: 研究鹽酸氨溴索口腔崩解片的人體生物利用度和生物等效性。方法:采用隨機交叉試驗設計，20名健康男性志愿者單劑量口服試驗制劑鹽酸氨溴索口腔崩解片與參比制劑鹽酸氨溴索片60 mg，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿中氨溴索的濃度，計算兩藥的藥動學參數(shù)。結(jié)果:單劑量口服試驗與參比制劑后氨溴索的Cmax分別為（84.729.3）和（81.228.2）ngmL-1，tmax分別為（1.70.5）h和（1.80.4）h，t1/2分別為（7.90.9）h和（8.31.0）h，AUC0-24h分別為（638.7180.8）nghmL-1和（591.4148.3）nghmL-1，試驗制劑的相對生物利用度為（108.216.5）%。結(jié)論:試驗制劑與參比制劑具有生物等效性。關(guān)鍵詞 鹽酸氨溴索；口腔崩解片；相對生物利用度；生物等效性；藥動學；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法中圖分類號 文獻標識碼 A 文章編號 10015217Bioequivalence of ambroxol hydrochloride orally disintegrating tablets in healthy volunteersXUE Hong-yuan1, YANG Han-yu2, HOU Yan-ning1, HE Wen-tao1, WANG Yu-qi1, JIA Li-xia1(1. Dep. of Pharmacology, Bethune International Peace Hospital, Shijiazhuang 050082, China; 2. Shijiazhuang Pharmaceutical Group Co. Ltd. Zhongqi Corporation, Shijiazhuang 050011, China)Abstract: OBJECTIVE To study the bioequivalence and relative bioavailability of ambroxol hydrochloride orally disintegrating tablets. METHODS A single oral adminstration of 60 mg test and reference tablets were given to 20 healthy male volunteers according to a randomized crossover design. The concentrations of ambroxol in plasma were determined by a HPLC/MS/MS method. The pharmacokinetic parameters and bioavailability of test tablets were compared with those of reference tablets. RESULTS After a single oral adminstration of 60 mg test and reference tablets, the pharmacokinetic parameters were as follows: Cmax were (84.729.3) and (81.228.2) ngmL-1, tmax were (1.70.5) and (1.80.4) h, t1/2 were (7.90.9) and (8.31.0) h, AUC0-24h were (638.7180.8) and (591.4148.3) nghmL-1, The relative bioavailability of tested tablets was (108.216.5) %. CONCLUSION The two preparations were bioequivalent.KEY WORDS: ambroxol hydrochloride; orally disintegrating tablet; relative bioavailability; bioequivalence; pharmacokinetics; HPLC/MS/MS鹽酸氨溴索（ambroxol hydrochloride）為溴己新的活性代謝產(chǎn)物，能促進肺表面活性物質(zhì)的分泌及氣道液體分泌，促進黏痰溶解，顯著降低痰黏度，增強支氣管黏膜纖毛運動，促進痰液排出，改善通氣功能和呼吸困難狀況，主要用于急、慢性呼吸道疾病引起的痰液黏稠、咳痰困難等，為目前臨床上常用的祛痰藥?？谇槐澜馄墙鼛啄瓿霈F(xiàn)的一種新劑型，它可利用普通片劑生產(chǎn)設備就可制作；其置入口腔內(nèi)，不用水或用極少量水就可在口腔內(nèi)吸收水分，迅速崩解成無沙礫感的細粉，隨吞咽動作進入消化道，吸收后產(chǎn)生藥理作用，因而具有廣闊的研究發(fā)展前景。本試驗采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）的方法測定血漿中氨溴索的濃度，研究了國產(chǎn)鹽酸氨溴索口腔崩解片與普通片在人體的相對生物利用度，觀察并評價兩種制劑的生物等效性，為鹽酸氨溴索口腔崩解片的藥代動力學質(zhì)量評價和臨床合理用藥提供依據(jù)。1 儀器與試藥質(zhì)譜儀：API 4000型液相色譜三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有電噴霧離子化源（ESI源），數(shù)據(jù)系統(tǒng)Analyst 1.4 軟件，美國ABI公司；液相色譜輸液泵：Agilent 1100系統(tǒng)：四元梯度泵、在線脫氣機、自動進樣器、柱溫箱，美國Agilent公司。AG-135分析天平，瑞士Mettler Toledo公司；SB3200型超聲波清洗儀，上海音波聲電科技公司。試驗制劑：鹽酸氨溴索口腔崩解片（T藥），規(guī)格：30mg/片，石家莊四藥有限公司生產(chǎn)，批號：041201；參比制劑：鹽酸氨溴索片（R藥，商品名沐舒坦），規(guī)格：30mg/片，上海勃林格殷格翰藥業(yè)有限公司，批號：484060；鹽酸氨溴索對照品，含量99.4%，批號：040801，河北省藥品檢驗所提供；鹽酸維拉帕米（verapamil hydrochloride）對照品，批號：02239601，中國藥品生物制品檢定所；甲醇（色譜純），F(xiàn)isher化學公司；乙酸銨（色譜純），Tedia化學公司；甲酸（分析純），天津市光復精細化工研究所；水為娃哈哈飲用純凈水；其余試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果 2.1 研究對象 20名健康男性志愿者，年齡（23.31.9）歲，體重（67.05.4）kg，身高（1.740.05）m，體重指數(shù)（22.11.1）kg/m2；試驗前經(jīng)病史詢問和體格檢查，心電圖、胸透、肝功、腎功、血尿常規(guī)等均為正常，且試驗前2周及試驗期間未服用任何藥物并禁用煙酒及其它含咖啡因、柯柯堿、茶堿的飲料，避免劇烈運動。試驗經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審查、批準備案，所有志愿者均明確本試驗的目的與要求，并在試驗前自愿簽署知情同意書。2.2 試驗設計 采用兩制劑雙周期交叉試驗設計，將志愿者隨機分為兩組，分別服用試驗或參比制劑60 mg。志愿者于試驗前12 h吃清淡晚餐后禁食，試驗當日晨空腹口服藥，試驗制劑是將藥片直接放于舌面，無須咀嚼，待藥片迅速崩解后吞咽，參比制劑用溫開水200 mL送服，服藥后2 h允許飲水，4、10 h后進食統(tǒng)一標準餐。服藥前及服藥后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24 h，分別從肘靜脈取血3 mL，置肝素抗凝管中放置1 h后離心（3 000 rmin-1）10 min，分離血漿，-20 凍存、備用。7天后交叉服藥，重復試驗。2.3 血漿樣品測定2.3.1 色譜條件 Restek Allure C18分析柱（5 mm，4.650mm），Restek公司； C18保護柱（4 3.0 mm）Phenomenex，Torrance，USA；流動相：甲醇-乙腈-0.5%甲酸水溶液=55：5：40；流量：0.5 mLmin-1 ；柱溫：20；進樣量：5 L。質(zhì)譜條件 離子源為電噴霧離子化（ESI）源；噴霧電壓IS 為5 000 V；霧化溫度為500 ；霧化氣NEB（GAS 1）為40 Lmin-1；簾氣CUR 為25 Lmin-1；碰撞氣CAD為4 Lmin-1；輔助氣AUX（GAS 2）為40 Lmin-1；檢測方式為負離子；掃描方式為多離子反應監(jiān)測（MRM），用于定量分析的離子反應分別為m/z 379.1 m/z 264.0（氨溴索），m/z 455.5 m/z 165.2 （內(nèi)標，維拉帕米），碰撞誘導解離（CID）電壓分別為25 V（氨溴索）和45 V（內(nèi)標）；駐留時間（dwell time）均為200 ms。2.3.2 血樣處理 取血漿樣品100 mL，依次加入甲醇100 mL、5 ngmL-1內(nèi)標溶液200 mL，渦旋振蕩混勻20 s，10 000 rmin-1離心5 min后，取上清液，5 mL進樣測定。氨溴索和內(nèi)標的tR分別為1.48、1.74 min。在此條件下，空白血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾氨溴索及內(nèi)標的測定，結(jié)果見圖1。2.3.3 標準曲線及線性范圍 精取鹽酸氨溴索對照品27.4 mg（相當于氨溴索25.0 mg），用甲醇稀釋，得含氨溴索分別為500、400、150、50、15、5、2 ngmL-1的系列標準溶液。精取鹽酸維拉帕米27.0 mg（相當于維拉帕米25.0 mg）用甲醇稀釋成濃度為5 ngmL-1的內(nèi)標工作液。取空白血漿100 mL，加入100 mL上述系列標準溶液，其余按“2.3.2”項下“加入甲醇100 mL”后操作，建立標準曲線。分別以氨溴索的濃度為橫坐標，氨溴索與內(nèi)標的峰面積比為縱坐標，用加權(quán)最小二乘法（W=1/X2）進行回歸計算，求得直線回歸方程，即為標準曲線。血漿中氨溴索濃度的線性范圍為2.0500 ngmL-1，其直線回歸方程為：Y = 0.906 3 C-0.003 1（r =0.999 8），定量下限為標準曲線的最低濃度點2.0 ngmL-1。圖1 氨溴索與內(nèi)標的HPLC-MS/MS色譜圖A.空白血漿；B. .空白血漿中加入氨溴索和內(nèi)標；C. 受試者服藥1.0 h后血漿樣品。1-氨溴索(m/z) 264.0；2-內(nèi)標(m/z) 165.2Figure 1 Chromatograms of ambroxol and internal standard by multiple reaction monitoring ( MRM ) scan mode A. Blank plasma; B. Blank plasma spiked with ambroxol and verapamil; C .Plasma sample1.0 h after an oral dose of 60 mg ambroxol hydrochloride orally disintegrating tablets to a healthy volunteer; Peak1. Selected mass (m/z) 264.0 (ambroxol); Peak 2. Selected mass (m/z) 165.2 (verapamil)2.3.4 精密度與回收率 取空白血漿100 m L，按“2.3.3”項下制備低、中、高三個濃度點（5.0，50，400 ngmL-1）的質(zhì)控樣品（QC），每個濃度6份，每天制備并測定，隨行兩條標準曲線，連續(xù)測定4天，以當日的標準曲線計算QC樣品的濃度，將測定結(jié)果進行方差分析，求算方法的精密度和方法回收率。上述3個濃度點的血漿樣品的峰面積與其標準溶液經(jīng)同倍數(shù)稀釋后直接進樣峰面積的比計算提取回收率。本法測定3個濃度血漿樣品中氨溴索的平均提取回收率為101.1 %，內(nèi)標的提取回收率為101.4 %，3個濃度日內(nèi)RSD2.61 %（n=24）、日間的RSD7.68 %（n=4）及方法平均回收率為98.103.88 %（n=24）。2.3.5 樣本穩(wěn)定性考察 考察氨溴索在血漿中（5.0，400 ngmL-1）室溫放置4 h和血漿樣品處理后室溫放置4、24 h以及3次冷凍解凍循環(huán)的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，氨溴索在上述條件下均穩(wěn)定，RE均15%。2.3.6 數(shù)據(jù)的質(zhì)量保證 測定受試者血樣時，每個分析批隨行標準曲線，并制備低、中、高三個濃度的多份質(zhì)控（QCs）樣品，質(zhì)控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的5%；以該批標準曲線計算質(zhì)控樣品的濃度，RE均15%。如果分析過程中由于操作錯誤或儀器問題使數(shù)據(jù)產(chǎn)生偏差，則對當日所有樣品進行復檢，并棄去原值；對于某一批的質(zhì)控樣品不符合規(guī)定的，則此批重做；對于測試過程中的異常點進行復檢；對于測得值與根據(jù)藥時曲線所估計的值相差較大的樣品進行復檢。如果復檢值與原值的偏差在15 %以內(nèi)，取原值；如果復檢值與原值的偏差大于15 %以上，進行第二次復檢。本試驗沒有進行復檢的樣品。2.3.7 數(shù)據(jù)處理 使用DAS 1.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。將20名受試者的經(jīng)時血藥濃度錄入該程序，分別得到兩制劑氨溴索的AUC0-24h、AUC0-、t1/2、tmax、Cmax等藥代動力學參數(shù)。tmax進行非參數(shù)秩和檢驗，Cmax、AUC0-24h、AUC0-經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后做方差分析，并進行雙向單側(cè)t檢驗。結(jié)果表明，兩制劑的tmax、Cmax、AUC0-24h、AUC0-均無顯著性差異；試驗制劑的Cmax的 90%可信限落在參比制劑的70%-143%之間，AUC0-24h、AUC0-的90%可信限落在參比制劑的80%125%范圍內(nèi)，以AUC0-24h計算受試制劑的相對生物利用度為（108.216.5）%，故認為兩制劑生物等效。20名受試者口服單劑量兩制劑后的平均血藥濃度-時間曲線及主要藥代動力學參數(shù)見圖2、表1、表2。表1 20名健康受試者單劑量口服60mg鹽酸氨溴索口腔崩解片后的主要藥動學參數(shù)（S）Table 1. Main pharmacokinetic parameters and relative bioavailability of ambroxol after a single oral at the dose of 60 mg in 20 volunteersParameterTestReferenceCmax（ngmL-1）84.729.381.228.2tmax （h）1.70.51.80.4t1/2（h）7.90.98.31.0AUC0-24h （nghmL-1）638.7180.8591.4148.3AUC0- （nghmL-1）717.5211.1671.1173.2Fr（%）108.216.5圖2 20名健康志愿者口服單劑量60mg鹽酸氨溴索口腔崩解片后的平均藥時曲線Figure 2 Mean plasma concentration-time curves of ambroxol after a single oral dose of 60 mg in 20 healthy volunteers (n=20, meanSD)表2 雙向單側(cè)t檢驗結(jié)果 (=0.05)Table 2 The result of the two one-side t-testst1t2t1-0.05(18)90% confidential interal (%)Ln (AUC0-24h)9.324.911.73101.47113.13Ln (AUC0-)9.185.401.73100.47111.73Ln (Cmax)7.816.381.7395.00113.153 討 論氨溴索血藥濃度的測定方法有HPLC法1, 2、GC-ECD法3、毛細管區(qū)帶電泳法等4，在使用HPLC法時，樣品預處理步驟繁瑣1, 2；再者，血漿中的藥物濃度較低，受試者服藥劑量多超過常用量。本試驗受試者的服藥劑量為60mg，不僅符合處方及新編藥物學的要求，而且為臨床用藥提供可行的參考，在試驗過程中未見有臨床意義的不良反應發(fā)生。本試驗采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿中氨溴索的濃度，儀器靈敏度高，最低檢測濃度可達2.0 ngmL-1，測定時間僅為2.2 min，兩日既可完成全部血樣的測定；血漿樣品采用直接沉淀蛋白法，操作簡單，準確度、精密度均好。本文所測每種制劑的個體間Cmax、AUC0-24 h均有高度統(tǒng)計學差異，而個體間的tmax無統(tǒng)計學差異，例如參比制劑Cmax變化范圍為49.1145.0 ngmL-1、AUC0-24 h為350.3919.0 nghmL-1。本文所測參比制劑Cmax值（60mg，81.228.2 ngmL-1）與文獻1（90mg，127.236.2 ngmL-1）接近，低于文獻 2（90mg，201.623.8 ngmL-1）；比較2篇文獻1, 2（受試者數(shù)量分別為10、8名），二者出自同一實驗室，儀器、藥品、試驗方法均相同，但同種參比制劑Cmax、AUC0-24 h值存在明顯差異，tmax無顯著差異。由上述結(jié)果可見，鹽酸氨溴索在人體內(nèi)代謝的速度無明顯差異，但其代謝程度存在顯著差異，這可能與其主要在肝臟代謝，受肝藥酶的影響有關(guān)，國內(nèi)文獻未見相關(guān)報道。故在人體生物等效性評價時需增加受試者數(shù)量，在臨床應用時應注意個體化給藥。本試驗兩制劑的t1/2約為8