厭氧型細菌及檢驗ppt課件VIP

厭氧性細菌及檢驗 一定義 有氧條件下不能生長 無氧條件 不是絕對 下才可以生長的一類細菌1836年P(guān)asteur提出臨床上日益受到重視 60 臨床標(biāo)本存在厭氧菌感染 需要重視 二分類 1有芽孢厭氧性細菌一個梭菌屬包括83個種2無芽孢厭氧性細菌40多個菌屬 300多個菌種和亞種 三感染 分布原因臨床癥狀 厭氧菌在正常人體內(nèi)的分布 致病的原因 1組織缺氧或氧化還原電勢降低穿刺傷等封閉性傷口 血管壓迫 腫瘤壓迫等等2機體免疫力低下 臨床的癥狀 1感染部位產(chǎn)生大量氣體 組織膿腫和壞死 皮下有捻發(fā)音 是產(chǎn)氣夾膜梭菌感染的特征2分泌物有惡臭 或為暗紅色 分泌物涂片經(jīng)革蘭氏染色 發(fā)現(xiàn)細菌 而培養(yǎng)陰性的3其它等等 厭氧菌標(biāo)本的采集和送檢 標(biāo)本的采集和送檢 1標(biāo)本決不能被正常菌群污染 2應(yīng)盡量避免空氣 標(biāo)本的采集 標(biāo)本的送運與處理 針筒送運法無菌小瓶送運法棉拭送運法大量標(biāo)本送運法組織塊送運法厭氧袋送運法 分離和鑒定 檢驗的方法 1直接鏡檢一些特殊的特點 臨床工作中的總結(jié)可對初步判斷及臨床應(yīng)用做早一步的指導(dǎo)作用 2分離培養(yǎng) 1初步培養(yǎng)1 培養(yǎng)基的選擇強化血瓊脂平板卡那萬古霉素凍溶血瓊脂平板七葉苷膽汁平板等等 2 標(biāo)本的接種每份標(biāo)本應(yīng)接種3個培養(yǎng)平板 分別放置于有氧 無氧和含5 10 的CO2的容器中 有時需要專用的培養(yǎng)基 3 厭氧培養(yǎng)法a厭氧罐培養(yǎng)法b氣袋法c氣體噴射法d厭氧手套箱法e其它等等 2次代培養(yǎng)和厭氧菌的確定 3分離培養(yǎng)中可能失敗的原因1 培養(yǎng)前為做標(biāo)本的直接涂片和染色鏡檢2 標(biāo)本在空氣中放置太久或接種時時間過長3 未用新鮮配制的培養(yǎng)基 4 未用選擇性培養(yǎng)基5 無合適的厭氧罐或裝備出現(xiàn)問題6 培養(yǎng)時間不足7 鑒定實驗 1形態(tài)和染色重要的是為下一步的鑒定提供參考 時間破傷風(fēng)梭菌革蘭氏染色改變拉絲實驗加KOH30g l一滴 能拉絲為陰性不能為陽性 PH痤瘡丙酸桿菌7 0時陰性及多型性6 0及以下革蘭氏陽性桿菌 2菌落性狀1 色素產(chǎn)黑色素類桿菌2 10天可產(chǎn)生黑色素 溶齒放線菌培養(yǎng)3 4天產(chǎn)生粉紅色色素2 溶血產(chǎn)氣夾膜梭菌在新鮮的血瓊脂平板上可產(chǎn)生雙溶血環(huán)3 熒光 3抗生素敏感實驗4一些特殊的敏感實驗 聚茴香腦磺酸鈉敏感實驗5生化特性6氣液相色撲7PCR等等 有芽孢的厭氧菌 簡介梭菌屬G 陳舊性培養(yǎng)基G 四破傷風(fēng)梭菌 大量存在于人和動物的腸道糞便污染傷口被污染導(dǎo)致 注意消毒清潔芽孢為于頂部 呈鼓槌壯 直徑比菌體粗 呈梭狀可以被用來生物技術(shù) 外毒素致毒 一 生物學(xué)性狀 染色 培養(yǎng)生化對我們實驗診斷來說最重要 破傷風(fēng)梭菌菌體細長 長4 8um 寬0 3 0 5um 周身鞭毛 芽胞呈圓形 位于菌體頂端 直徑比菌體寬大 似鼓槌狀 是本菌形態(tài)上的特征 繁殖體為革蘭氏陽性 帶上芽胞的菌體易轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性 破傷風(fēng)梭菌為專性厭氧菌 最適生長溫度為37 pH7 0 7 5 營養(yǎng)要求不高 在普通瓊脂平板上培養(yǎng)24 48小時后 可形成直徑1mm以上不規(guī)則的菌落 中心緊密 周邊疏松 似羽毛狀菌落 易在培養(yǎng)基表面遷徒擴散 在血液瓊脂平板上有明顯溶血環(huán) 在皰肉培養(yǎng)基中培養(yǎng) 肉湯渾濁 肉渣部分被消化 微變黑 產(chǎn)生氣體 生成甲基硫醇 有腐敗臭味 及硫化氫 一般不發(fā)酵糖類 能液化明膠 產(chǎn)生硫化氫 形成吲哚 不能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽 對蛋白質(zhì)有微弱消化作用 本菌繁殖體抵抗力與其他細菌相似 但芽胞抵抗力強大 在土壤中可存活數(shù)十年 能耐煮沸40 50分鐘 對青霉素敏感 磺胺類有抑菌作用 二 致病性與免疫性 破傷風(fēng)梭菌芽胞廣泛分布于自然界中可由傷口侵入人體 發(fā)芽繁殖而致病 但破傷風(fēng)梭菌是厭氧菌 在一般傷口中不能生長 傷口的厭氧環(huán)境是破傷風(fēng)梭菌感染的重要條件 窄而深的傷口 如剌傷 有泥土或異物污染 或大面積創(chuàng)傷 燒傷 壞死組織多 局部組織缺血或同時有需氧菌或兼性厭氧菌混合感染 均易造成厭氧環(huán)境 局部氧化還原電勢降低 有利于破傷風(fēng)桿菌生長 破傷風(fēng)梭菌能產(chǎn)生強烈的外毒素 即破傷風(fēng)痙攣毒素 Tetanospasmin 或稱神經(jīng)毒素 Neurotoxin 破傷風(fēng)毒痙攣毒素是一種神經(jīng)毒素 為蛋白質(zhì) 由十余種氨基酸組成不耐熱 可被腸道蛋白酶破壞 故口服毒素不起作用 在菌體內(nèi)的痙攣毒素是單一和一條多肽鏈 分子量15萬 破傷風(fēng)毒素的毒性非常強烈 僅次于肉毒毒素 破傷風(fēng)梭菌沒有侵襲力 三 微生物學(xué)檢驗 標(biāo)本采集檢驗程序檢驗方法和鑒定 五氣性壞疽病原菌 以組織壞死 水腫 產(chǎn)氣及全身中毒的嚴(yán)重的急性外傷感染包括很多 重點產(chǎn)氣夾膜梭菌 產(chǎn)氣夾膜梭菌 生物學(xué)性狀形態(tài)和染色培養(yǎng)特性生化反應(yīng)致病性 為革蘭氏陽性粗大梭菌 3 4 1 1 5um 單獨或成雙排列 有時也可成短鏈排列 芽胞呈卵圓形 芽胞寬度不比菌體大 位于中央或末次端 培養(yǎng)時芽胞少見 須在無糖培養(yǎng)基中才能生成芽胞 在膿汁 壞死組織或感染動物臟器的涂片上 可見有明顯的莢膜 無鞭毛 不能運動 厭氧程度不如破傷風(fēng)梭菌要求高 在血液瓊脂平板上菌落較大 灰白色 不透明 邊緣呈鋸齒狀 多數(shù)菌株有雙層溶血環(huán) 內(nèi)環(huán)是 毒素的作用 而外環(huán)不完全溶血是a毒素所致 不能消化已凝固的蛋白質(zhì)和血清 在皰肉培養(yǎng)基中肉渣不被消化 有時呈肉紅色 在牛乳培養(yǎng)基中能分解乳糖產(chǎn)酸 使酪蛋白凝固 同時生成大量氣體 將凝固的酪蛋白沖成海棉狀碎塊 管內(nèi)氣體常將覆蓋在液體上的凡士林層向上推擠 這種現(xiàn)象稱為 洶涌發(fā)酵 是本菌的特點之一 能分解多種糖類 如葡萄糖 麥芽糖 蔗糖和乳糖 產(chǎn)酸產(chǎn)氣 不發(fā)酵甘露糖或水楊苷 能液化明膠 產(chǎn)生硫化氫 致病條件與破傷風(fēng)梭菌相似 產(chǎn)氣莢膜梭菌既能產(chǎn)生強烈的外毒素 又有多種侵襲性酶 并有莢膜 構(gòu)成其強大的侵襲力 引起感染致病 1 氣性壞疽2 食物中毒3 急性壞死性腸炎 1 直接涂片鏡檢從傷口深部取材涂片 革蘭氏染色鏡檢 可見革蘭氏陽性大桿菌 并有莢膜 常伴有其他雜菌 白細胞甚少 形態(tài)不規(guī)則 這是氣性壞疽標(biāo)本涂片的特點 2 分離培養(yǎng)與鑒定取壞死組織制成懸液 接種于血球脂平板上或皰肉培養(yǎng)基中 厭氧培養(yǎng) 觀察生長情況 取細菌培養(yǎng)物涂片鏡檢 并進一步用生化反應(yīng)鑒定 3 動物實驗取培養(yǎng)液0 5 1ml給小鼠或家兔靜脈內(nèi)注射 10分鐘后殺死動物 置37 5 8小時 如動物軀體膨脹 即行解剖 可見臟器和肌肉內(nèi)有大量氣泡 尤以肝臟最為明顯 稱 泡沫肝 取內(nèi)臟或心血