沉降菌檢驗標準操作規(guī)程.doc

.01.0 目的01.1 闡述潔凈室（區(qū)）空氣中沉降菌檢測操作規(guī)程，保證藥品的質(zhì)量，防止生產(chǎn)環(huán)境對產(chǎn)品的污染，保證實驗室的環(huán)境達到檢測產(chǎn)品的要求。02.0 適用范圍02.1 適用于本公司的潔凈室（區(qū)）的沉降菌監(jiān)測和潔凈度等級的驗證。03.0 人員職責測試人員對潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試。04.0 內(nèi)容04.1 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本規(guī)程。04.1.1 菌落：細菌培養(yǎng)后，由一個或幾個細菌繁殖而形成的細菌集落，簡稱CFU，通常用個數(shù)來表示。04.1.2 沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空氣中的活性微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基在適宜的生長條件下系繁殖到可見到的菌落數(shù)。04.1.3 沉降菌菌落數(shù)：規(guī)定時間內(nèi)每個平板培養(yǎng)皿收集到空氣中沉降菌的數(shù)目，以cfu/皿表示。04.2 測試原理：本測試方法利用沉降法，即通過自然沉降原理收集空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)，以平板培養(yǎng)中的菌落數(shù)來評定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈區(qū)的潔凈度。04.3 監(jiān)測周期：A級潔每次室驗做監(jiān)控，B級每周一次，C級每季度一次，D級每半年一次監(jiān)控。04.4 測試方法：04.4.1 使用設(shè)備與材料高壓滅菌鍋：使用時應(yīng)嚴格按照操作規(guī)程進行。恒溫恒濕培養(yǎng)箱：必須定期對培養(yǎng)箱進行校驗。培養(yǎng)皿：一般采用90mm15mm培養(yǎng)皿。培養(yǎng)基：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）； 已滅菌配制好的培養(yǎng)基平皿放入30-35恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生生即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)放在2-8的環(huán)境中存放。清潔劑：75%酒精04.4.2 測試時間：（1）對單向流，如A級凈化房間內(nèi)及超凈工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10分鐘后開始。（2）對非單向流，如B級、C級、D級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30分鐘后開始。（3）培養(yǎng)皿的采樣時間：靜態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為30min以上；動態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為不大于4小時。04.4.3 采樣點數(shù)及其布置（1）最少采樣點數(shù)目：面積(M)（m2）潔凈度級別A級B級C級D級M102322210M20422220M40822240M10016422注：表中的面積，對于單向流潔凈室（區(qū)）、潔凈工作臺，指的是送風面積，對非單向流潔凈室（區(qū)），指的是房間面積。（2）最少培養(yǎng)皿數(shù)潔凈度等級所需90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降4h計）A級14B級2C級2D級2（3）采樣點布置潔凈室（區(qū)）采樣點布置宜力求均勻，避免采樣點在局部區(qū)域過于稀疏。下列多點采樣的采樣點布置圖示可作參考（見圖1）圖1平面采樣點布置圖A級單向流區(qū)域，潔凈工作臺或局部空氣凈化設(shè)施的采樣點宜布置在正對氣流的工作面上，氣流形式可參考圖2、圖3。圖2水平單向流的氣流形式圖3垂直單向流氣流形式工作區(qū)采樣點的位置離地0.8m-1.5m左右（略高于工作臺面）。取樣時，應(yīng)盡量避免在回風口附近取樣（距離1m以上），且測試人員應(yīng)在取樣的下風測，并盡量少走動?？稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加采樣點。取樣時，取樣設(shè)備會對流產(chǎn)生干擾，取樣時應(yīng)避免可能對氣流組織的干擾。04.4.4 測試步驟：04.4.4.1 采樣方法 用無菌容器將預(yù)先培養(yǎng)的培養(yǎng)基（無菌平皿）放至傳遞窗，紫外燈照0.5小時，待檢測用，將培養(yǎng)皿取出，用75%酒精擦平皿表面，放置在預(yù)先確定的取樣點，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露時間不少于30min，現(xiàn)將培養(yǎng)皿蓋，蓋后倒置培養(yǎng)。檢測時記下培養(yǎng)皿打開的起始時間和結(jié)束時間。04.4.4.2 培養(yǎng)： 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。30-35培養(yǎng)，時間為72小時。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3個培養(yǎng)皿做對照培養(yǎng)。04.4.4.3 菌落計數(shù) 用肉眼直接計數(shù)，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上計數(shù)。04.4.5 注意事項04.4.5.1 測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。04.4.5.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。對培養(yǎng)基條件及參數(shù)的詳細記錄。04.4.5.3 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般有透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，必要時用顯微鏡別。04.4.5.4 采樣前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。04.4.5.5 測試狀態(tài)沉降菌測試前，溫度在18-26，相對濕度在45%-65%，潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)和潔凈區(qū)與潔凈區(qū)之間的靜壓差10Pa。01.002.003.004.004.104.204.304.3.104.3.204.3.304.3.404.3.504.3.5.104.3.5.204.3.5.304.3.5.404.3.5.504.3.5.6 測試人員測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，并在報告中注明測試狀態(tài)。靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不多于2人。被測試潔凈區(qū)已消毒，測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。04.4 結(jié)果計算用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。平均菌落數(shù)的計算見下式：計算公式：M=Min 式中M為平均菌落數(shù)（CFU）Mi表示1，2，3，n號皿菌落數(shù)；n表示平皿總數(shù)。04.5 標準潔凈度級別沉降菌平均菌落數(shù)（CFU/皿）以4小時計A級1B級5C級50D級10004.6 結(jié)果評定04.6.1 每個測點的沉降菌平均菌落數(shù)必須低于所選定評定標準中的界限。04.6.2 在靜態(tài)測試時，若某測點的沉降菌落數(shù)超過評定標準，則重新測試兩次，兩次測試結(jié)果均合格才能判