如何看流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果中的圖(轉(zhuǎn)).doc

如何看流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果中的圖FCM數(shù)據(jù)的存貯的方式是FCS2.0（flow cytometry standard），采用列表排隊(duì)(List Mode)方式。易于加工處理分析，但缺乏直觀性，數(shù)據(jù)的顯示通常有一維直方圖、二維點(diǎn)圖、等高線圖、密度圖等幾種；由數(shù)據(jù)還可以做出標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量分 析。Q1：坐標(biāo)軸的意義？1、單參數(shù)直方圖 每一個細(xì)胞單參數(shù)的測量數(shù)據(jù)可以整理成統(tǒng)計(jì)分布，以直方圖的方式來顯示。在圖中，橫坐標(biāo)表示熒光信號或散射光信號相對強(qiáng)度的值，其單位是道數(shù)（channel），可以是線形（line）或者對數(shù)（log）。縱坐標(biāo)一般是相對細(xì)胞/粒子數(shù)（count）！2、二維圖 在二維圖的中，橫坐標(biāo)/縱坐標(biāo)都表示熒光信號或散射光信號相對強(qiáng)度的值，可以是線形（line）或者對數(shù)（log）。雙參數(shù)圖可以將樣品細(xì)胞群分開，從而方便對感興趣的細(xì)胞進(jìn)行分析。Q2：“Gate”和“Regin”？設(shè)門是流式細(xì)胞分析中一種重要的技術(shù)，只有通過最佳的設(shè)門方式，才能準(zhǔn)確地獲取和分析數(shù)據(jù)，從而得到臨床診斷和科研中有價值的信息。On-line gating(threshold gating)監(jiān)測/獲取數(shù)據(jù)Off-line gating： 分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 散射光設(shè)門/熒光設(shè)門 散射光/熒光聯(lián)合設(shè)門 多重邏輯門(組合門) 多重邏輯門 G3=R1 and R2 (G3=R1R2) 其它： G=R1 or R2 G=R1 not R2Q3:流式圖中的顏色與熒光顏色? 流式圖中的顏色為區(qū)分不同細(xì)胞群而人為指定, 與熒光顏色無關(guān)!Q4：流式圖中的陰/陽（N/P）如何劃分? 如何做M1陰性界限？實(shí)際上，這個M1的劃分完全是根據(jù)陰性(同型)對照來的！如下圖：左圖為同型對照，即：您所檢測的物質(zhì)在陰性組中的基礎(chǔ)表達(dá)量，可以理解為背景、靜息狀態(tài)下、基礎(chǔ)水平、未受刺激時等。右圖即陽性組，也就是接受刺激后，功能狀態(tài)下、藥物作用后等。Q5:這么巧，陰性正好在101劃分？ 其實(shí), 我們可以人為地將電壓，放大倍數(shù)調(diào)到相應(yīng)的大小，使陰性的右邊界在某一個值上，（通常劃在101附近）這樣后期做sample時好看！當(dāng)然也可以調(diào)到102，103次方。Q6：為什么要進(jìn)行熒光補(bǔ)償？ 流式細(xì)胞分析中經(jīng)常要用到2種以上的熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行染色，而目前所使用的多種熒光染料發(fā)射譜間