生物技術(shù)制藥期末復(fù)習(xí)提綱.doc

生物技術(shù)制藥復(fù)習(xí)提綱生物技術(shù)所含的主要技術(shù)范疇包含有哪幾個(gè)工程？ 基因工程； 細(xì)胞工程 ；酶工程 ； 發(fā)酵工程 ； 蛋白質(zhì)核酸工程 和 生化工程 ；基因工程菌在傳代過程中的質(zhì)粒不穩(wěn)定的現(xiàn)象主要是指哪兩種不穩(wěn)定？ 質(zhì)粒不穩(wěn)定分為 分裂不穩(wěn)定性 和 結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性 基因工程菌的培養(yǎng)方式有哪幾種？ 分批培養(yǎng) ； 補(bǔ)料分批培養(yǎng) ； 連續(xù)培養(yǎng) ； 透析培養(yǎng) 和 固定化培養(yǎng) ；從生產(chǎn)實(shí)際看，動(dòng)物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)主要可以分為哪幾種？ 懸浮培養(yǎng)、 貼壁培養(yǎng) 和 貼壁-懸浮培養(yǎng)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基分為哪三類？ 天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基 無(wú)血清培養(yǎng)基 植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)所用培養(yǎng)基種類較多，但通常都含有哪幾類？。 無(wú)機(jī)鹽 碳源 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑 有機(jī)氮源 維生素在V區(qū)中，決定抗體分子與抗原分子發(fā)生特異性結(jié)合的關(guān)鍵部位稱為互補(bǔ)決定區(qū)（CDR） ，而 c 區(qū)則決定了Ig分子的異種抗原性。酶固定法中的包埋法可分為哪兩種？ 網(wǎng)格型 微囊型發(fā)酵工業(yè)的生產(chǎn)水平取決于哪三個(gè)要素？ 生產(chǎn)菌種 、 發(fā)酵工藝 和 發(fā)酵設(shè)備生物藥物廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域，按功能用途可分為哪三類？ 治療藥物 、 預(yù)防藥物 、 診斷藥物 基因工程藥物制造的主要步驟如何？ 目的基因的獲得 ； 構(gòu)建DNA重組體； 構(gòu)建工程菌 ； 目的基因的表達(dá) ； 產(chǎn)物的分離純化 ； 產(chǎn)品的檢驗(yàn)酶和細(xì)胞的固定化載體主要有哪三類？ 吸附載體 包埋載體 交聯(lián)載體 單克隆抗體制備時(shí)對(duì)動(dòng)物的免疫方法分為哪兩種？ 體內(nèi)免疫法 和 體外免疫法生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞為 原代 細(xì)胞、 二倍體 細(xì)胞系、 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系以及工程 細(xì)胞系。目前工業(yè)常用的酶一般是以什么為主要來(lái)源？ 微生物發(fā)酵工程產(chǎn)品開發(fā)的關(guān)鍵是篩選到高效菌株，一般優(yōu)良菌種的選育方法主要有哪幾種？ 自然選育 、 誘變育種 和 原生質(zhì)體融合.在制備大量微生物菌體或其代謝產(chǎn)物時(shí)，可采用不同的發(fā)酵方式。微生物的發(fā)酵方式有哪幾種？ 分批發(fā)酵 、 補(bǔ)料分批發(fā)酵 、 連續(xù)發(fā)酵目的基因的獲得方法有哪幾種？用反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因，首先必須獲得什么？cDNA法獲得目的基因的優(yōu)點(diǎn)是什么？將構(gòu)建好載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞最常用的方法是什么？ 反轉(zhuǎn)錄法 、 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法 和 化學(xué)合成法 目的基因的mRNA 獲得的目的基因編碼序列無(wú)內(nèi)含子，目的基因的篩選較容易 磷酸鈣沉淀法 電穿孔法基因工程研究中采用最多的原核表達(dá)體系？基因工程藥物多為胞內(nèi)產(chǎn)物，分離提取時(shí)需破碎細(xì)胞，常用的破碎方法有哪些？依據(jù)依據(jù)分子篩作用純化基因工程藥物的色譜方法是什么色譜方法？ 大腸桿菌 高壓勻漿法 高速珠磨法 超聲破碎法 高壓擠壓法 滲透沖擊 增溶法 脂溶法 生物破碎法 離子交換層析 凝膠過濾層析 疏水層析 親和層析基因工程菌培養(yǎng)中需要有效的手段來(lái)控制菌體的比生長(zhǎng)速率，控制菌體生長(zhǎng)的意義是什么？發(fā)酵培養(yǎng)基中需要的氮源分為速效氮源和遲效氮源，請(qǐng)寫出相應(yīng)的速效和遲效氮源。 工程菌培養(yǎng)可通過選用不同的碳源控制補(bǔ)料和稀釋速率等方法來(lái)控制菌體的生長(zhǎng) 控制菌體的生長(zhǎng)對(duì)提高質(zhì)粒的穩(wěn)定性、減少代謝副產(chǎn)物積累、提高外源蛋白產(chǎn)率有重要意義 速效氮源：氨基酸和玉米漿 遲效氮源：黃豆餅粉 花生餅粉 棉籽餅粉 蛋白胨 酵母粉 動(dòng)物細(xì)胞相比原核細(xì)胞作為宿主生產(chǎn)藥品的優(yōu)越性如何？ 產(chǎn)物是分泌型，收集純化方便細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵之一是防止微生物的污染，有哪幾種消毒滅菌方法？ 物理滅菌方法：高壓蒸汽滅菌法 干熱滅菌 紫外線滅菌 過濾除菌 化學(xué)滅菌方法：甲醛加熱熏蒸 漂白粉殺菌 植物細(xì)胞代謝過程中產(chǎn)物包括生理活性物質(zhì)和后含物，他們的定義如何？ 凡是對(duì)人或動(dòng)物生理現(xiàn)象產(chǎn)生影響的活性物質(zhì)，統(tǒng)稱為生理活性物質(zhì) 細(xì)胞在新陳代謝過程中產(chǎn)生的各種無(wú)生命的物質(zhì)，統(tǒng)稱為細(xì)胞后含物生物反應(yīng)器間歇操作過程中，將細(xì)胞和培養(yǎng)基一次性加入反應(yīng)器內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，除了不斷進(jìn)行通氣和為調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH而加入酸堿溶液外，與外界沒有其它物料交換。這種培養(yǎng)方式稱為什么發(fā)酵方式？ 分批發(fā)酵Ig分子的抗原結(jié)合部位是由什么部分共同構(gòu)成？ VL和VH的CDR區(qū)制備單克隆抗體時(shí)同一品系動(dòng)物免疫的重要性。 很重要！目前預(yù)防乙型肝炎使用的生物制品屬于疫苗，還是血液制品，還是類毒素？ 疫苗發(fā)酵過程中散失熱能的因素有哪些？ 蒸發(fā)熱 輻射熱 顯熱酶經(jīng)固定化后，酶的活力或結(jié)構(gòu)有無(wú)變化？酶經(jīng)固定化后，其最適pH值一般會(huì)發(fā)生什么變化？生物技術(shù)藥物、基因表達(dá)、質(zhì)粒分裂不穩(wěn)定、人一鼠嵌合抗體、次級(jí)代謝產(chǎn)物、模擬酶、透析培養(yǎng)、雜交瘤細(xì)胞、離子交換層析、固定化酶的名詞解釋生物技術(shù)藥物一般說來(lái)，采用DNA重組技術(shù)或其它生物新技術(shù)研制的蛋白質(zhì)或核酸類藥物稱為生物技術(shù)藥物?；虮磉_(dá)基因表達(dá)是指結(jié)構(gòu)基因在生物體中的轉(zhuǎn)錄、翻譯以及所有加工過程。質(zhì)粒的分裂不穩(wěn)定 通常將質(zhì)粒不穩(wěn)定性分為兩類:一類是結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性,也就是質(zhì)粒由于堿基突變、缺失、插入等引起的遺傳信息變化;另一類是分裂不穩(wěn)定性,指在細(xì)胞分裂過程中質(zhì)粒不能分配到子代細(xì)胞中,從而使部分子代細(xì)胞不帶質(zhì)粒(即P-細(xì)胞)。在連續(xù)和分批培養(yǎng)過程中均能觀察到此兩類現(xiàn)象發(fā)生。一般情況下具有質(zhì)粒的細(xì)胞(即P細(xì)胞)需要合成較多的DNA、RNA和蛋白質(zhì),因此其比生長(zhǎng)速率低于P-細(xì)胞,從而P-細(xì)胞一旦形成能較快速地生長(zhǎng)繁殖并占據(jù)培養(yǎng)物中的大多數(shù)。 人-鼠嵌合抗體 嵌合抗體是最早制備成功的基因工程抗體。它是由鼠源性抗體的 V 區(qū)基因與人抗體的 C 區(qū)基因拼接為嵌合基因，然后插入載體，轉(zhuǎn)染骨髓瘤組織表達(dá)的抗體分子。因其減少了鼠源成分，從而降低了鼠源性抗體引起的不良反應(yīng)，并有助于提高療效。次級(jí)代謝產(chǎn)物 次級(jí)代謝產(chǎn)物是指生物生長(zhǎng)到一定階段后通過次級(jí)代謝合成的分子結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜、對(duì)該生物無(wú)明顯生理功能，或并非是該生物生長(zhǎng)和繁殖所必需的小分子物質(zhì)模擬酶 用合成高分子來(lái)模擬酶的結(jié)構(gòu)、特性、作用原理以及酶在生物體內(nèi)的化學(xué)反應(yīng)過程，從原理的本質(zhì)定義為是用人工方法合成具有酶性質(zhì)的一類催化劑透析培養(yǎng)是對(duì)微生物培養(yǎng)用透析膜包裹，并使外部有新鮮培養(yǎng)液流動(dòng)著的一種培養(yǎng)方法雜交瘤細(xì)胞是在制備單克隆抗體過程中，用骨髓瘤細(xì)胞和B細(xì)胞融合而成的細(xì)胞。離子交換層析 是以離子交換劑為固定相，依據(jù)流動(dòng)相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進(jìn)行可逆交換時(shí)的結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一種層析方法。 固定化酶 不溶于水的酶。是用物理的或化學(xué)的方法使酶與水不溶性大分子載體結(jié)合或把酶包埋在水不溶性凝膠或半透膜的微囊體中制成的。酶固定化后一般穩(wěn)定性增加，易從反應(yīng)系統(tǒng)中分離，且易于控制，能反復(fù)多次使用。便于運(yùn)輸和貯存，有利于自動(dòng)化生產(chǎn)?；蚬こ趟幬锷a(chǎn)的基本過程是什么？目的基因的分離和提取目的基因與載體結(jié)合構(gòu)建重組體重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞重組體的篩選、鑒定和分析目的基因的表達(dá)簡(jiǎn)述無(wú)血清培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)。 1）提高重復(fù)性（2）減少微生物污染（3）供應(yīng)充足穩(wěn)定（4）產(chǎn)品易純化（5）避免血清因素對(duì)細(xì)胞的毒性（6）減少血清中蛋白對(duì)生物測(cè)定的干擾簡(jiǎn)述單克隆抗體的制備過程單克隆抗體的制備： 用抗原免疫小鼠 骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng) 免疫脾細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞 在PEG作用下合成雜交瘤細(xì)胞 選擇培養(yǎng)基（融合的細(xì)胞死亡，雜交瘤細(xì)胞存活） 陽(yáng)性克隆的篩選機(jī)克隆化 克隆擴(kuò)增及大量制備McAb 簡(jiǎn)述固定化酶生產(chǎn)藥物的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)固定化酶生產(chǎn)藥物的優(yōu)點(diǎn)： （1） 可以多次使用，酶的穩(wěn)定性提高； （2） 反應(yīng)后，酶與底物和產(chǎn)物易于分開，產(chǎn)物中無(wú)殘留酶，易于純化； （3） 反應(yīng)條件易于控制，可實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化反應(yīng)的連續(xù)化和自動(dòng)控制； （4） 酶的利用率高，單位酶催化的底物量增加，用酶量少。 缺點(diǎn)： （1） 固定化過程中，可能會(huì)引起酶活性喪失； （2） 只適用于催化可溶性小分子底物的酶促反應(yīng)，對(duì)大分子底物不適合； （3）通常不適用于多酶反應(yīng)，尤其是需要輔助因子參與的反應(yīng)。分離純化基因工程藥物常用的色譜方法有那些？它們的原理是什么？分離純化基因工程藥物常用的色譜方法有：離子交換色譜，疏水色譜，親和色譜和凝膠過濾色譜； 離子交換色譜，以離子交換劑為固定相，依據(jù)流動(dòng)相中的組分離子和交換劑上的平衡離子進(jìn)行可擬交換時(shí)的結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一種色譜方法；疏水色譜，利用蛋白質(zhì)表面的疏水區(qū)域與固定相上疏水性基團(tuán)相互作用力的差異對(duì)蛋白質(zhì)組分進(jìn)行分離的色譜方法；親和色譜：利用固定化配體與目的蛋白質(zhì)之間非常特異的生物親和力進(jìn)行吸附，這種結(jié)合既是特異的又是可逆的，改變條件可以使這種結(jié)合解除的原理分離純化蛋白質(zhì)；凝膠過濾色譜，是以多孔性凝膠填料為固定相，按分子大小對(duì)溶液中各組分進(jìn)行分離的液相色譜方法。簡(jiǎn)述生物技術(shù)制藥的基本特性。生物技術(shù)藥物的特征是：（1）分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜（2）具有種屬差異特異性（3）治療針對(duì)性強(qiáng)、療效高（4）穩(wěn)定性差（5）免疫原性（6）基因穩(wěn)定性（7）體內(nèi)半衰期短（8）受體效應(yīng)（9）多效應(yīng)和網(wǎng)絡(luò)效應(yīng)（10）檢驗(yàn)特殊性根據(jù)真核基因在原核細(xì)胞中表達(dá)的特點(diǎn)，表達(dá)載體必須具備那些條件？表達(dá)載體必須具備下列條件：（1）能夠獨(dú)立的復(fù)制；（2）具有靈活的克隆位點(diǎn)和方便的篩選標(biāo)記，以利于外源基因的克隆、鑒定和篩選；（3）應(yīng)具有很強(qiáng)的啟動(dòng)子，能為大腸桿菌的RAN聚合酶所識(shí)別；（4）應(yīng)具有阻遏子（5）應(yīng)具有很強(qiáng)的終止子（6）所產(chǎn)生的mRNA必須具有翻譯的起始信號(hào)。植物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基由哪些主要成分組成？植物細(xì)胞或組織培養(yǎng)基常含有無(wú)機(jī)鹽、碳源、有機(jī)氮源、植物生長(zhǎng)激素、維生素等成分。（1）無(wú)機(jī)鹽 有大量元素和微量元素，30毫克每升為界限，大量有氮、硫、磷、鉀、鎂、鈣、氯、鈉。微量有鐵、錳、碘、鉬、銅、鋅。（2）碳源 常用碳源為碳水化合物、肌醇、甘油、乳糖和半乳糖。天然提取物如椰子乳、對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)和培養(yǎng)也有重要意義。（3）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑 常見的植物激素有生長(zhǎng)素、分裂素、赤霉素、脫落酸、乙烯。（4）有機(jī)氮源 常用蛋白質(zhì)水解物或各種氨基酸，有機(jī)氮源對(duì)細(xì)胞的早期生長(zhǎng)有利，氨基酸的加入是為了代替或增加氮源的供應(yīng)。（5）維生素 通常是維生素自養(yǎng)型，但大多數(shù)不能滿足需要請(qǐng)簡(jiǎn)述HAT培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞的篩選原理。HAT培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞的原理 HAT培養(yǎng)基是指含有次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶脫氧核苷三種物質(zhì)的細(xì)胞培養(yǎng)基。 利用HAT培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞（1） 經(jīng)融合后細(xì)胞將以多種形式出現(xiàn)：融合的脾細(xì)胞瘤細(xì)胞、融合的脾細(xì)胞脾細(xì)胞、融合的瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞、未融合的脾細(xì)胞、未融合的瘤細(xì)胞以及細(xì)胞的多聚體形式等。正常的脾細(xì)胞在培養(yǎng)基中存活僅57天，無(wú)需特別篩選，細(xì)胞的多聚體形式也容易死去。而未融合的瘤細(xì)胞則需進(jìn)行特別的篩選去除。（2） 融合所用的瘤細(xì)胞是經(jīng)毒性培養(yǎng)基選出的中間合成途徑缺失株（例如嘌呤的中間合成途徑缺失株和嘧啶的中間合成途徑缺失株），即只有起始合成途徑。效應(yīng)B細(xì)胞雖不增殖，但有兩條DNA合成途徑。（3）氨基蝶呤是葉酸的拮抗劑，可阻礙起始合成途徑。HAT培養(yǎng)基中含有氨基蝶呤時(shí)，細(xì)胞只有中間合成途徑，所以必須供給核苷酸。雜交瘤細(xì)胞的起始合成途徑被氨基喋呤阻斷，但可通過中間合成途徑利用以培養(yǎng)基中次黃嘌呤和胸腺嘧啶脫氧核苷為原料進(jìn)行合成。而缺失中間合成途徑的瘤細(xì)胞，失去增殖能力。從而選擇出雜交瘤細(xì)胞。生物技術(shù)在制藥中有那些應(yīng)用?生物技術(shù)應(yīng)用于制藥工業(yè)可大量生產(chǎn)廉價(jià)的防治人類重大疾病及疑難癥的新型藥物，具體體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：（1）基因工程制藥，利用基因