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維生素C含量測(cè)定方法綜述 勁舞團(tuán)SF 1 摘要 目前研究維生素C測(cè)定方法的報(bào)道較多 如滴定法 光度分析法 高效液相色譜法等 各種方法各有特點(diǎn) 特別是高效液相色譜法是近年來(lái)發(fā)展較快的一種方法 本文對(duì)近年來(lái)有關(guān)維生素C的測(cè)定方法進(jìn)行了綜述 2 關(guān)鍵詞 維生素C滴定法光度分析法高效液相色普法等 3 概述 維生素C是可溶于水的無(wú)色結(jié)晶 是一種分子結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的維生素 維生素C有防治壞血病的功能 所以在醫(yī)藥上常把它叫做抗壞血酸 維生素C能保持巰基酶的活性和谷胱甘肽的還原狀態(tài) 起解毒作用等 其廣泛存在于植物組織中 新鮮的水果 蔬菜 特別是棗 辣椒 苦瓜 柿子葉 獼猴桃 柑橘等食品中含量尤為豐富 準(zhǔn)確測(cè)定維生素C的含量 對(duì)飲食健康 醫(yī)療保健都具有十分重要的意義 近年來(lái)報(bào)道的測(cè)定方法主要有滴定法 光度法 高效液相色譜法等 4 維生素C的結(jié)構(gòu)式 維生素C 六碳的多羥基內(nèi)酯 5 6 1滴定法測(cè)定維生素C 1 12 6一二氯靛酚法1 2微量滴定法 7 2 6 二氯酚靛酚滴定法測(cè)定維生素C含量 其能還原2 6 二氯酚靛酚染料 維生素C具有還原性的烯二醇基 我們通過(guò)氧化還原滴定來(lái)測(cè)定維生素C 8 2 6 二氯靛酚法 原理 2 6 二氯靛酚是一種染料 其氧化型在酸性介質(zhì)中為紅色 堿性介質(zhì)中為藍(lán)色 與Vc反應(yīng)后 生成無(wú)色的還原型酚亞胺 因此 在酸性條件下 用2 6 二氯靛酚滴定至溶液顯玫瑰紅色 即為終點(diǎn) 無(wú)需另加指示劑 9 2 6 二氯靛酚法 方法 取本品適量 約相當(dāng)于Vc50mg 用適量水溶解 置100ml量瓶中 加偏磷酸 醋酸試液20ml 再用水稀釋置刻度 搖勻 精密量取稀釋液適量 約相當(dāng)于Vc2mg 置50ml的錐形瓶中 加偏磷酸 醋酸試液5ml 用2 6 二氯靛酚滴定液滴定 至溶液顯玫瑰紅色 并持續(xù)5s不褪 空白試驗(yàn) 取偏磷酸 醋酸試液5 5ml 加水15ml 用2 6 二氯靛酚滴定液滴定 計(jì)算 V V0 F T W W 標(biāo)示量 標(biāo)示量 反應(yīng)摩爾比 100 10 維生素C2 6 二氯酚靛酚維生素C2 6 二氯酚靛酚 還原型 氧化型 粉紅色 氧化型 還原型 2 6 二氯酚靛酚染料的鈉鹽在水溶液中顯藍(lán)色 在酸性溶液中呈紅色 被還原后紅色消失 11 碘量法 原理 由于維生素C分子中的烯二醇基有極強(qiáng)的還原性 能被碘氧化 用碘滴定VCEC6H6O6 C6H8O6 0 18 EI2 I 0 535終點(diǎn) 淀粉為指示劑 溶液出現(xiàn)穩(wěn)定的藍(lán)色即為終點(diǎn)反應(yīng)式 12 碘量法 碘的濃度由已知濃度的Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定反應(yīng)式 計(jì)算式 Wvc C I2 V I2 M vc m vc 100 13 碘量法 注意 測(cè)定時(shí) 加HAC使溶液呈弱酸性原因 1 Vc還原性很強(qiáng) 在空氣中很容易被氧化 在堿性介質(zhì)中更甚 2 I2在堿性介質(zhì)中會(huì)發(fā)生歧化反應(yīng)加HAC可減少VC的副反應(yīng) 避免實(shí)驗(yàn)誤差 14 電位滴定法 原理 根據(jù)滴定過(guò)程中電池電動(dòng)勢(shì)的變化來(lái)確定反應(yīng)終點(diǎn) Pt為指示電極 甘汞作參比電極E池 E E E液接電位 EI2 I k 常數(shù) 15 電位滴定法 原理 具體來(lái)說(shuō) 隨著滴定劑的加入 由于發(fā)生化學(xué)反應(yīng) 待測(cè)離子濃度將不斷變化 從而指示電極電位發(fā)生相應(yīng)變化 導(dǎo)致電池電動(dòng)勢(shì)發(fā)生相應(yīng)變化 計(jì)量點(diǎn)附近離子濃度發(fā)生突變 引起電位的突變 因此由測(cè)量工作電池電動(dòng)勢(shì)的變化就能確定終點(diǎn) 16 電位滴定法 右圖 電位滴定法基本儀器裝置計(jì)算式 與碘量法相同 Wvc C I2 V I2 M vc m vc 100 優(yōu)點(diǎn) 解決了滴定分析中遇到有色或渾濁溶液時(shí)無(wú)法指示終點(diǎn)的問題 17 2分光光度測(cè)定維生素C 2 12 4一二硝基苯肼分光光度法2 2鉬藍(lán)比色法2 3其他方法 18 2 4一二硝基苯肼分光光度法 原理 維生素C在空氣中尤其在堿性介質(zhì)中極易被氧化成脫氫抗壞血酸反應(yīng)式 19 2 4一二硝基苯肼分光光度法 pH 5 脫氫抗壞血酸內(nèi)環(huán)開裂 形成二酮古洛糖酸二酮古洛糖酸 20 2 4一二硝基苯肼分光光度法 脫氫抗壞血酸 二酮古洛糖酸均能和2 4 二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎脎在500nm波長(zhǎng)有最大吸收脎的結(jié)構(gòu) 21 分光光度法 樣品溶液與VC標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述方法同樣處理500nm處測(cè)吸光度下圖 721型分光光度計(jì) 22 鉬藍(lán)比色法 馬占玲等用鉬藍(lán)比色法測(cè)定青椒中還原型維生素C含量的基本原理和方法 測(cè)定波長(zhǎng)839nm 維生素C含量在0 004 0 024mg mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系 回收率為97 2 該方法簡(jiǎn)單 快速 準(zhǔn)確 23 鉬藍(lán)比色法 逯家輝等提出了一種測(cè)定維生素C的新方法 它是基于FolinB試劑與抗壞血酸在pH 3的三氯乙酸酸性介質(zhì)中反應(yīng)生成脫氫抗壞血酸 反應(yīng)產(chǎn)物在910nm波長(zhǎng)處有最大吸光度進(jìn)行定量分析 該方法的線性范圍為0 50 0 g mL 相關(guān)系數(shù)r 0 99986 回收率為98 12 102 15 24 差示旋光法 原理 方法 結(jié)果 維生素C片在不同PH值的溶液中旋光度有顯著差異 而片劑輔料旋光度保持不變差示旋光法消除輔料的影響 直接測(cè)出該制劑的含量 討論 與 25 差示旋光法 方法 TEXT 1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制準(zhǔn)確稱取維生素C精制品5 0g 乙二胺四乙酸鈉0 37g 置于100mL容量瓶中 用新沸冷卻的蒸餾水溶解 加水到指定刻度 配制成50mg mL的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液 TEXT 原理 方法 結(jié)果 討論 與 26 差示旋光法 2 比旋光度與溶液pH值的關(guān)系量取10 0mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)液于50mL量瓶中 用水稀釋至50mL 測(cè)定溶液的pH及旋光度 然后逐次分批加入氫氧化鈉固體 每次約50mg 每次溶解后 測(cè)定一次溶液的pH及其旋光度 得到維生素C溶液的pH及旋光度關(guān)系 原理 方法 結(jié)果 討論 與 27 差示旋光法 選定pH為2 2和6 2 28 差示旋光法 2 差示旋光度與溶液濃度關(guān)系吸取2 0 4 0 8 0 16 0 20 0mL的維生素C標(biāo)準(zhǔn)液各兩份 分別置于50mL的容量瓶 一份用pH2 2的鹽酸鹽緩沖液定容 一份用pH6 2的磷酸鹽緩沖液定容 靜置3min后 用220mm測(cè)定管 以前者為空白 測(cè)定后者的差示旋光度 a 文獻(xiàn)結(jié)果 線性方程為 a 0205 C 0 05 r 0 9964 原理 方法 結(jié)果 討論 與 29 差示旋光法 3 輔料干擾試驗(yàn)取混合輔料20mg 淀粉 硬脂酸鎂 EDTA 糊精等按處方比例混勻 兩份分別置于50mL的容量瓶 一份用pH2 2的鹽酸鹽緩沖液定容 一份用pH6 2的磷酸鹽緩沖液定容 濾去不溶物 濾液在兩種pH值測(cè)定差示旋光度 文獻(xiàn)結(jié)果 輔料的差示旋光度為零 說(shuō)明輔料對(duì)維生素C含量的測(cè)定不干擾 原理 方法 結(jié)果 討論 與 30 差示旋光法 4 穩(wěn)定性試驗(yàn)同一測(cè)試樣品 在120min內(nèi) 每隔3min測(cè)定一次差示旋光度 文獻(xiàn)結(jié)果 差示旋光度基本不變 原理 方法 結(jié)果 討論 與 31 差示旋光法 5 回收率試驗(yàn)精密稱取維生素C精制品500 0mg兩份 分別置于50mL容量瓶中 各加入20mg輔料 分別用鹽酸鹽緩沖液及磷酸鹽緩沖液配制成50mL溶液 測(cè)定差示旋光度 文獻(xiàn)結(jié)果 平均回收率為97 8 變異系數(shù)cv為1 03 原理 方法 結(jié)果 討論 與 32 差示旋光法 方法 TEXT 6 樣品測(cè)定取維生素C片劑10片 稱重研碎后分別用鹽酸鹽緩沖液及磷酸鹽緩沖液配制成50mL溶液 相當(dāng)于含Vc20mg mL 濾去不溶物 測(cè)定濾液的差示旋光度 根據(jù)回歸方程計(jì)算其含量 TEXT 原理 討論 方法 結(jié)果 與 33 差示旋光法 方法 TEXT 1 維生素易被氧化 空氣及水中的氧均可使其氧化分解 配制溶液時(shí)使用新沸冷卻水 同時(shí)加人EDTA作為穩(wěn)定劑 2 樣品測(cè)定時(shí) 片劑部分物質(zhì)不能完全溶解 必須過(guò)濾除去 然后測(cè)定濾液的差示旋光度 TEXT 原理 討論 方法 結(jié)果 與 34 3高效液相色譜法測(cè)定維生素C 3 1HYPERSIL C8色譜柱法3 2VenusilXBP C18柱法3 3其他方法 35 HYPERSIL C8色譜柱法 采用HYPERSIL C8色譜柱 用0 1 低濃度的草酸作流動(dòng)相 陳昌云等采用0 05mol L磷酸二氫鉀緩沖液 甲醇 80 20 v v 作流動(dòng)相 流速為1 0mL min 二極管陣列檢測(cè)器 檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm 36 3 2VenusilXBP C18柱法 系統(tǒng)采用VenusilXBP C18柱 4 6x250mm 5 g 用0 2 的偏磷酸的水溶液作為流動(dòng)相 流速1ml min 檢測(cè)波長(zhǎng)240nm 維生素C濃度在0 1 1 0mg mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系 該方法回收率99 89 標(biāo)準(zhǔn)偏差0 91 操作簡(jiǎn)便 靈敏 可靠 37 薄層掃描法 原理維生素C具有較強(qiáng)還原性 可使藍(lán)色染料2 6 二氯靛酚鈉定量地還原成無(wú)色的酚亞胺 而本身被氧化成去氫抗壞血酸 利用此特征進(jìn)行薄層掃描法測(cè)定含量 38 薄層掃描法 操作方法與結(jié)果 1 試紙的制備2 6 二氯靛酚鈉 DCP Na 溶于無(wú)水乙醇配成0 05 的DCP Na乙醇溶液 濾紙?jiān)谑⒂蠨CP Na乙醇溶液的展開缸中浸漬3min 邊浸邊搖展開缸 使濾紙均勻著色 充分被染料溶液所飽和 取出懸掛于暗處 晾干后 立即放入干燥器中避光保存 備用 39 薄層掃描法 2 緩沖溶液的配制稱取檸檬酸水合物10g 放入1000ml容量瓶中 加入1M氫氧化鈉420ml 并用蒸餾水稀釋至刻度 此溶液的pH應(yīng)為3 5 否則 用酸或堿調(diào)整pH值 保存于冰箱中 40 薄層掃描法 3 掃描條件確定在制備的染料試紙上定量點(diǎn)上維生素C對(duì)照品進(jìn)行掃描 維生素C在290nm處有最大吸收 420nm處無(wú)吸收 故選擇 1 290nm 2 420nm 雙波長(zhǎng)反射式鋸齒掃描 原理 方法 結(jié)果 討論 與 41 薄層掃描法 4 線性實(shí)驗(yàn)4 1 對(duì)照品溶液的配制精密稱取維生素C標(biāo)準(zhǔn)品100mg 用緩沖溶液配成lmg ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液 精密稱取維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液1 2 3 4 5ml 分別置于10ml容量瓶中 用緩沖溶液稀釋至刻度 4 2 測(cè)定用5 l定量毛細(xì)管 分別吸取上述溶液各5 l 點(diǎn)于試紙上 點(diǎn)樣后晾干 并將試紙固定在20cm 20cm玻璃板上 放入薄層掃描儀 測(cè)定 A的積分值 峰面積 作為縱坐標(biāo)Y 點(diǎn)樣量為橫坐標(biāo)X 得一直線方程Y 15692X 130225 r 0 9991 原理 方法 結(jié)果 討論 與 42 薄層掃描法 方法 TEXT 5 樣品的含量測(cè)定取維生素C片10片 研細(xì) 精密稱取平均片重一片的粉末 放入100ml容量瓶中 加入緩沖液至刻度 振搖 使維生素C溶解 放置 澄清 用吸液管取3ml移至10ml容量瓶中 用緩沖液稀釋至刻度 用5 l定量毛細(xì)管點(diǎn)樣品溶液與不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液于同一試紙上 然后掃描測(cè)定峰面積 由工作曲線法計(jì)算維生素C片中的維生素C含量 TEXT 原理 方法 結(jié)果 討論 與 43 薄層掃描法 6 回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取維生素C對(duì)照品20mg 其它原輔料適量 置10ml容量瓶中 加緩沖液稀釋至刻度 振搖 濾過(guò) 棄初濾液 分別吸取續(xù)濾液與對(duì)照品維生素C液各5 l點(diǎn)于同一試紙上 按上述條件進(jìn)行掃描測(cè)定 44 薄層掃描法 點(diǎn)樣時(shí)各點(diǎn)間距應(yīng)大于10mm 掃描測(cè)不定期波長(zhǎng)可做少量變動(dòng) 但每次測(cè)定必須固定同一測(cè)定波長(zhǎng)點(diǎn)樣量在3 8 l之間線性關(guān)系較好 當(dāng)點(diǎn)樣量為10 l 線性關(guān)系較差 原理 方法 結(jié)果 討論 與 45 結(jié)束語(yǔ) 總之 維生素C的測(cè)定方法很多 各種方法各有特點(diǎn) 常用的滴定法方法簡(jiǎn)單 但在滴定有色物質(zhì)終點(diǎn)不易判斷 分光光度法操作費(fèi)時(shí) 高效液相色譜法是目前發(fā)展較快的一種方法 方法靈敏 選擇性好 有較好的發(fā)展前景 毛細(xì)管電泳n51是近幾年新興的分析方法 具有效率高 分析時(shí)間短 樣品處理簡(jiǎn)單等特點(diǎn) 但有待于進(jìn)一步完善 46 參考文獻(xiàn) 1 吳春艷 水果中維生素C含量的測(cè)定及比較 J 武漢理工大學(xué)學(xué)報(bào) 2oo7 29 3 90 91 2 王元秀 莊海燕 微量滴定法測(cè)定獼猴桃中維生素C的含量 J1 濟(jì)南大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué)版 2001 15 4 374 3 張穎 等 不同產(chǎn)地枸杞子中維生素C含量測(cè)定 J 中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志 2004 24 8 500 501 4 袁葉飛 甄漢深 歐賢紅 分光光度法測(cè)定大棗中的維生素C含量 J 安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) 2006 25 2 40 41 5 馬占玲 等 青椒中還原型維生素C含量的測(cè)定 J 渤海大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué)版 2006 27 2 111 113 47 參考文獻(xiàn) 6 逯家輝 等 F0linB分光光度法測(cè)定蔬菜中維生素C的含量 J 分析檢測(cè) 2oo5 26 8 171 172 7 王艷穎 等 高效液相色譜法測(cè)定草莓中維生素C含量 J 大連大學(xué)學(xué)報(bào) 2006 27 2 21 22 8 姜波 范圣第 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