氯化汞與家兔急性腎功能不全

氯化汞與家兔急性腎功能不全摘要：【目的】 復(fù)制急性中毒性腎衰動物模型，通過對腎功能指標(biāo)的檢測及腎臟形態(tài)學(xué)改變的觀察，了解中毒家兔腎功能的改變。判斷、分析致病因素及導(dǎo)致急性腎衰的可能發(fā)病機(jī)制 【方法】 取家兔兩只，分為實(shí)驗(yàn)組（急性腎功能不全）和對照組，分別對家兔行心臟采血和膀胱取尿，分別測定并比較兩兔的血清肌酐和尿肌酐含量以及酚紅排泄率，比較腎衰家兔和正常家兔的腎臟排泄功能，最后取兩兔腎臟觀察比較。 【結(jié)果】 與正常家兔相比，急性腎衰家兔尿肌酐、尿/血肌酐比值（10:1）、酚紅排泄率均明顯下降，血肌酐含量也有所下降，腎比重減小，腎臟外觀蒼白腫大，切面蒼白，皮髓質(zhì)分界不清。 【結(jié)論】 氯化汞可直接損傷腎小球和腎小管引起器質(zhì)性腎功能衰竭，引起腎小管上皮細(xì)胞變性壞死，腎血管收縮，腎血流減少，腎灌注壓下降，腎小管排泌功能、腎小管上皮細(xì)胞重吸收功能障礙?！娟P(guān)鍵詞】氯化汞；急性腎功能不全；血肌酐；尿肌酐；尿肌酐/血肌酐；酚紅排泄率【引言】腎臟是一個(gè)多功能器官，其主要功能之一是泌尿功能。腎臟通過調(diào)節(jié)腎血流、腎小球?yàn)V過率、腎小管排泌與重吸收以及排泄體內(nèi)代謝物質(zhì)以維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。當(dāng)腎血流量減少，腎小球?yàn)V過率下降或腎小管排泌重吸收功能障礙時(shí)，腎的泌尿功能受到影響，從而導(dǎo)致腎功能不全。11、實(shí)驗(yàn)材料和方法1.實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)對象：家兔1.2藥品和試劑：氨基甲酸乙酯、生理鹽水、葡萄糖、酚紅、NaOH、醋酸、堿性苦味酸、肌酐標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液1.3實(shí)驗(yàn)器材：手術(shù)器械一套、試管、分光光度計(jì)、水浴鍋、離心機(jī)2.實(shí)驗(yàn)方法2.1復(fù)制腎功能衰竭模型：于實(shí)驗(yàn)前一天，取兩只家兔，稱重，一只皮下或肌肉注射1HgCl2(o810mlkg)造成急性腎功能衰竭，為實(shí)驗(yàn)組兔；另一只皮下或肌肉注射等量的生理鹽水(10mlkg)作為對照組兔。2.2麻醉手術(shù)：家兔稱重，按5 ml/kg體重劑量于耳緣靜脈緩慢注射200 g/L氨基甲酸乙酯麻醉。2.3心臟采血：在心尖搏動最劇烈的地方用干燥針管，垂直進(jìn)針進(jìn)行取血。放置10min后，3000r/min離心15min，小心吸取血清置于另一干燥管中，備測血肌酐。2.4腹部手術(shù)：將麻醉的兔子仰臥位固定于手術(shù)臺上，下腹部正中剪毛，在恥骨聯(lián)合上約15cm處做切口，長約4cm，暴露膀胱，用注射器收集2ml尿液于試管中，做尿肌酐檢查。隨后在膀胱底部，找出兩側(cè)輸尿管，并分離之。在近膀胱端結(jié)扎輸尿管，稍等片 刻，待其略充盈后，用眼科剪剪一小口，向腎臟方向插入一細(xì)塑料管(塑料管事先用肝素沖洗或充滿肝素)，結(jié)扎并固定，用于收集尿液。2.5血清和尿液肌酐含量測定苦味酸沉定蛋白法：（1）血清肌酐含量測定取硬質(zhì)試管3只編號，分別為空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及測定管。按表1加樣，混勻，37水浴30min，用分光光度計(jì)以波長510nm，空白管調(diào)零，讀OD值。然后，各管加50%乙酸溶液兩滴，放置6min后，再測定OD值。按式計(jì)算血清肌酐（Crp）： （2）尿肌酐測定：按表2加樣，混勻，放10min后加蒸餾水6.0ml，搖勻，用分光光度計(jì)以波長530nm，空白管調(diào)零，讀OD值。按式計(jì)算尿肌酐（Cru）： 2.6酚紅排泄率測定：1)兩組家兔分別耳緣靜脈注射o6酚紅溶液(1mlkg)，接著從頸外靜脈插管處注射20葡萄糖溶液(30mlkg)。收集從開始注射酚紅起15min或30min的尿液，換算成單位時(shí)間的尿量(mlmin)。 2）將收集的尿液倒入500ml量筒內(nèi)，加10NaOH lOml，用自來水補(bǔ)充至500ml處，混勻后，取出適當(dāng)量放入與比色管口徑相同的試管中與標(biāo)準(zhǔn)比色管比較，得出15min或30min內(nèi)腎臟酚紅排泄率。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.對照組（正常）與實(shí)驗(yàn)組（腎衰）家兔血清肌酐、尿肌酐及酚紅排泄率測定值如下：實(shí)驗(yàn)組與對照組相比，尿肌酐/血肌酐值降低，酚紅排泄率下降，腎比重減小。2. 對照組與實(shí)驗(yàn)組家兔腎臟形態(tài)比較：正常腎臟顏色為紅褐色，正常腎臟的切面色澤鮮艷，皮髓質(zhì)分界清晰；急性腎衰竭家兔腎臟重量增加，中毒腎臟表面顏色蒼白，體積增大，表面腫脹。中毒腎臟切面為蒼白色，皮髓質(zhì)分界不清，偶有淤血。正常腎腎衰竭3、分析與討論1.氯化汞引起家兔急性腎功能不全的機(jī)制：氯化汞是一種有毒的重金屬化合物，在腎內(nèi)蓄積量最高，主要貯存于近曲小管。由于汞是許多活性酶的非特異性抑制劑，胞膜是汞的首要作用點(diǎn)，故汞對腎小管細(xì)胞具有明顯的毒害作用，造成腎小管壞死。壞死的腎小管上皮細(xì)胞及脫落上皮細(xì)胞和微絨毛碎屑、細(xì)胞管型或血紅蛋白、肌紅蛋白等阻塞腎小管，使原尿不易通過，引起少尿。同時(shí)，管腔內(nèi)壓升高，繼而使腎小球囊內(nèi)壓力升高，當(dāng)后者壓力與膠體滲透壓之和接近或等于腎小球毛細(xì)管內(nèi)壓時(shí)，遂引起腎小球?yàn)V過停止。有效濾過壓降低，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過率下降，近曲小管重吸收水鈉減少，致密斑分泌腎素，激活腎素-血管緊張素系統(tǒng)，促進(jìn)水鈉潴留。且毛細(xì)血管內(nèi)皮損傷、腫脹，致濾過膜通透性降低也引起腎小球率過濾下降。2.急性腎功能衰竭時(shí)的功能代謝變化：（本實(shí)驗(yàn)中毒家兔處于少尿期）尿變化：少尿或無尿；低比重尿；尿鈉高；血尿、蛋白尿、管型尿。水中毒：ARF時(shí)，因少尿、分解代謝所致內(nèi)生水增多、攝入水過多等原因，導(dǎo)致體內(nèi)水潴留、稀釋性低鈉血癥和細(xì)胞水腫。嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)心功能不全、肺水腫和腦水腫。高鉀血癥：尿量減少使鉀隨尿排出減少；組織損傷和分解代謝增強(qiáng)，使鉀大量釋放到細(xì)胞外液；酸中毒時(shí)，細(xì)胞內(nèi)鉀離子外溢；低鈉血癥，使遠(yuǎn)端小管的鉀鈉交換減少。代謝性酸中毒：GFR降低，使酸性代謝產(chǎn)物在體內(nèi)蓄積；腎小管分泌H+和NH3能力降低，使NaHCO3重吸收減少；分解代謝增強(qiáng)，固定酸產(chǎn)生增多。氮質(zhì)血癥：血中尿素、肌酐、尿酸等非蛋白氮含量顯著增高，稱氮質(zhì)血癥，其發(fā)生主要是由于腎臟排泄功能障礙和體內(nèi)蛋白質(zhì)分解增加所致，少尿期，氮質(zhì)血癥進(jìn)行性加重，嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)尿毒癥2。3. 肌酐的代謝與清除：肌酐是肌酸代謝的最終產(chǎn)物，體內(nèi)的肌酸大部分與磷酸結(jié)合生成磷酸肌酸，磷酸肌酸與能量代謝有關(guān)。在體外肌酐與肌酸可以互變，在酸性溶液中，肌酸及易脫水而變成肌酐，在堿性溶液中，肌酐則可變回肌酸。但是，在體內(nèi)肌酸脫水生成肌酐是一種不可逆反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)中，氯化汞中毒所致家兔急性腎功能衰竭為器質(zhì)性腎衰，因此造成血中肌酐排泄障礙，尿肌酐含量明顯下降，而腎衰組血肌酐較對照組有所下降，可能是實(shí)驗(yàn)操作過程中的測量誤差引起。4. 氯化汞中毒導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞損傷，尿量減少，酚紅排泄率降低。酚紅排泄率是反映腎血流量與腎小管排泌功能的指標(biāo)。在實(shí)驗(yàn)中注射大量的葡萄糖溶液是為了造成滲透性利尿，利于排除酚紅。酚紅是一種對人體無害的紅色染料，經(jīng)靜脈注射后，大部分與血漿蛋白結(jié)合，除20%為肝臟清除，經(jīng)膽道排出外，其余則由腎臟排出。在腎臟的排泌過程中，94%由近曲小管上皮細(xì)胞主動排泌，小部分不與白蛋白結(jié)合者可從腎小球?yàn)V過，尿中排出4%左右，2%通膽汁到大腸由糞便排出，因?yàn)榉蛹t大部分通過近曲小管分泌、排出，所以其尿中排出量，可作為判斷近曲小管排泌功能的指標(biāo)。4、實(shí)驗(yàn)結(jié)論氯化汞可直接損傷腎小球和腎小管引起器質(zhì)性腎功能衰竭，引起腎小管上皮細(xì)胞變性壞死，腎血管收縮，腎血流減少，腎灌注壓下降，腎小管排泌功能、腎小管上皮細(xì)胞