4、國自然萬能模板.docx

關(guān)注微信公眾號 ，回復(fù)“國自然”，即可獲得全部國自然資源，涵蓋：模板、視頻、經(jīng)驗(yàn)、中標(biāo)標(biāo)書、指南解讀、技術(shù)路線、更有公眾號獨(dú)家板塊內(nèi)容！報(bào)告正文（一）立項(xiàng)依據(jù)與研究內(nèi)容1、項(xiàng)目的立項(xiàng)依據(jù)XXX疾病及其研究進(jìn)展XXXX疾?。╔XXXXX，XXX英文名稱）是XXX系統(tǒng)(消化、呼吸、神經(jīng)等等)常見的一種疾病類型，多數(shù)是由于XXXX出現(xiàn)功能紊亂以及XXXX功能失調(diào)等所誘發(fā)，主要表現(xiàn)為XXXX（臨床癥狀或者臨床特征），致使XXX組織或者器官發(fā)生XXXX等癥狀，可以引起XXXX、XXXX以及XXXX等嚴(yán)重后果。同時(shí)，XXXX（該疾病）也是導(dǎo)致其他類XXXX相關(guān)疾病的主要原因之一。目前的研究表明，XXX疾病主要是由于XXXX所引起的（或者說跟XXX有關(guān)，也可以說關(guān)于該疾病的發(fā)病機(jī)制還沒有研究清楚），對于該疾病的治療，目前尚沒有有效的治療方法或者藥物（或者目前已有藥物有哪些不足，存在哪些問題）。近年來，隨著xxxx的改變，我國XXX疾病的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升且年輕化的趨勢。大量的基礎(chǔ)和臨床研究表明，導(dǎo)致XXX疾病的危險(xiǎn)因素主要包括：XXXXXX等。其中XXX的失調(diào)/XXX功能紊亂/XXXX異常等是引起該疾病的主要原因所在。所以，調(diào)節(jié)XXXX方面的功能是目前治療和預(yù)防XXXX疾病發(fā)生和發(fā)展的主要關(guān)注途徑。如針對XXX疾病主要?jiǎng)右虻乃幬锪uXXXX、XXXX以及XXXX等已經(jīng)逐漸成為該疾病的主要藥物。但是該類藥物目前存在XXXX方面的缺點(diǎn)（成本高、副作用大等等），所以開發(fā)新的治療該類疾病的靶向藥物顯得至關(guān)重要。注：該部分主要內(nèi)容是提出臨床問題，可以是某一個(gè)疾病、或者某一個(gè)疾病過程中的一個(gè)問題等等，所以該段最好按照以下順序來寫：1、 臨床現(xiàn)象某某疾病是怎么回事（疾病簡介），或者在某疾病的治療或者發(fā)生、發(fā)展過程中觀察到的某個(gè)臨床現(xiàn)象。2、 該臨床現(xiàn)象的癥狀、危害及嚴(yán)重性主要描述該臨床現(xiàn)象（一般是某種疾?。┑呐R床癥狀、嚴(yán)重程度、危害性或嚴(yán)重性等。3、 提出臨床問題即在目前某種臨床現(xiàn)象（疾?。┐嬖谀男┎蛔慊蛘呶唇鉀Q的問題急需解決。XXXX分子及其介導(dǎo)的信號通路在XXX疾病中的作用已有的研究的發(fā)現(xiàn)，XXXXX分子及其所介導(dǎo)的XXX信號通路在XXX疾病發(fā)生和發(fā)展的過程中發(fā)揮著非常關(guān)鍵的作用。（接下來主要介紹該分子及信號通路在該疾病發(fā)生過程中的作用，可以通過相關(guān)的綜述來寫）XXX分子是一個(gè)XXXX家族的蛋白，主要功能是XXX，主要介導(dǎo)XXX信號通路等，研究證明XXX在XXXX過程中有作用。（大概一兩百字介紹該分子）XXX信號通路是什么，怎么傳導(dǎo)，下游激活哪些基因表達(dá)，在XXX疾病或者臨床問題中是否有過研究。如果有過研究，詳細(xì)說明以往的研究證明XXXX信號通路是如何參與該疾病的發(fā)生過程的。因此，提示我們XXXX可能在XXX疾病過程中發(fā)揮著重要作用/可能是XXX臨床問題產(chǎn)生的關(guān)鍵機(jī)制所在等。注：該部分內(nèi)容主要是敘述你的研究將要涉及到的分子或者信號通路，比如某一個(gè)microRNA或者某條關(guān)鍵信號通路等，這里的介紹一定要是跟自己項(xiàng)目研究的內(nèi)容是相關(guān)的，盡量詳細(xì)介紹。XXXX分子可能通過XXX通路進(jìn)而在XXX疾病過程中發(fā)揮作用首先介紹自己的研究基礎(chǔ)工作我們前期的研究發(fā)現(xiàn)：XXXX在XX疾病中具有什么作用。（這里可以使用條目列出自己前期的研究成果）其次根據(jù)自己的研究成果提出科學(xué)假說根據(jù)我們前期的研究工作，我們認(rèn)為：XXXX（提出自己的工作假說）。我們發(fā)現(xiàn)XXX分子在XXX中具有明確的功能，可能是這一臨床問題的關(guān)鍵所在，然而其發(fā)揮作用的內(nèi)在機(jī)制尚不清晰。所以，我們提出以下假說：XXXXX在某某疾病的過程中，通過作用于XXXX/表達(dá)上調(diào)/表達(dá)下調(diào)等等方式，激活XXXX信號通路，調(diào)控XXXX細(xì)胞功能，最終對某某疾病起到保護(hù)或者促進(jìn)的作用。注：這里重點(diǎn)介紹自己前期的工作基礎(chǔ)及研究結(jié)果，并最后根據(jù)自己的研究結(jié)果提出一個(gè)科學(xué)假說。概括研究內(nèi)容及研究價(jià)值 在我們前期研究工作的基礎(chǔ)上，本項(xiàng)目擬通過XXXX的方法/方式/手段，明確/闡明/驗(yàn)證XXXX，為進(jìn)一步理解XXXX以及XXXX疾病的藥物治療（藥物開發(fā)、靶點(diǎn)選擇）提供了理論依據(jù)（靶點(diǎn)、候選等）。注：該部分主要內(nèi)容就是概述自己研究的主要內(nèi)容，最終可能得出的結(jié)果，以及研究的意義和價(jià)值等。2、項(xiàng)目的研究內(nèi)容、研究目標(biāo)，以及你解決的關(guān)鍵問題。（1）研究內(nèi)容1）在人類組織學(xué)水平上驗(yàn)證XXX分子與疾病的相關(guān)性為了驗(yàn)證XXX是否與XXX疾病具有相關(guān)性，我們收集XXX例該疾病的臨床樣本，并使用qPCR、Western Blot、免疫組化等等方法，分別檢測XXX分子在mRNA水平、蛋白質(zhì)水平的表達(dá)情況以及組織中的分布等。根據(jù)所收集到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析該分子是否與該疾病存在顯著的相關(guān)性。2）在動(dòng)物水平上驗(yàn)證XXX對XXX疾病動(dòng)物模型的保護(hù)性作用及可能的作用機(jī)制為了驗(yàn)證XXX是否能夠影響XXX疾病的發(fā)生、發(fā)展過程，我們使用XXX誘導(dǎo)XXX疾病動(dòng)物模型，并檢測XXX在不同疾病動(dòng)物中的變大差異。同時(shí)給予動(dòng)物XXX相關(guān)的治療，然后分別收集不同組動(dòng)物的哪些樣本，使用什么方法做哪方面的相關(guān)等。分離XXX疾病動(dòng)物相關(guān)細(xì)胞，檢測XXXX的變化是否影響細(xì)胞的相關(guān)功能，如增殖、遷移、分化等。3）在細(xì)胞水平上明確XXX在該疾病過程中可能的機(jī)制為了進(jìn)一步明確XXXX在XXX疾病過程中的詳細(xì)機(jī)制，我們使用XXX細(xì)胞（細(xì)胞系或者分離的原代細(xì)胞），給予細(xì)胞什么處理或者怎么分組，培養(yǎng)多久后做哪些相關(guān)方面的檢測。如收集細(xì)胞總蛋白，檢測蛋白表達(dá)；收集細(xì)胞總RNA檢測基因表達(dá)變化；收集細(xì)胞做細(xì)胞功能檢測等。最終通過該部分實(shí)驗(yàn)明確XXX是通過什么機(jī)制在XXX疾病過程中發(fā)揮作用的。4）在動(dòng)物水平上驗(yàn)證XXX作為XXX疾病治療的可行性為了明確XXX分子或者其調(diào)控的XXX信號通路是否可以作為XXX疾病藥物治療的靶點(diǎn)，我們使用XXX（可以是蛋白分子或者信號通路的抑制劑等）作為藥物給予疾病動(dòng)物治療，治療后收集不同的樣本，檢測相關(guān)的疾病指標(biāo)，最終明確是否XXXX或者其調(diào)控的XXX信號通路可以作為XXX疾病治療的靶點(diǎn)。（2）研究目標(biāo)： 1）明確XXX是否與XX疾病的發(fā)生和發(fā)展具有臨床上的相關(guān)性；1）明確XXX是否對XX疾病具有保護(hù)性或促進(jìn)性作用；2）確定XXXX調(diào)控XXX功能可能的信號通路或關(guān)鍵性的靶點(diǎn)分子；3）驗(yàn)證XXX作為XX疾病藥物治療靶點(diǎn)的可行性。（3）你解決的關(guān)鍵科學(xué)問題1）明確XXX是否與XX疾病在臨床上存在相關(guān)性；2）成功構(gòu)建XXX實(shí)驗(yàn)檢測系統(tǒng)/實(shí)驗(yàn)方法等；3）明確XXX是如何通過參與XXX信號通路來發(fā)揮其對疾病的影響作用的。3、擬采取的研究方案及可行性分析（1）研究方案1）在人類組織水平上驗(yàn)證XXX與XX疾病是否具有相關(guān)性臨床樣本的收集主要包括收集的樣本數(shù)目，收集樣本的標(biāo)準(zhǔn)，哪些樣本需要排除在外，樣本中相關(guān)物質(zhì)或成分的分離、處理以及保存等等臨床樣本的檢測使用XXX方法（方法一），檢測XXXX；使用XXX方法（方法二），檢測XXXX；使用XXX方法（方法三），檢測XXXX。2）在動(dòng)物水平上驗(yàn)證XXX對XXX疾病動(dòng)物模型的保護(hù)性作用及可能的作用機(jī)制動(dòng)物實(shí)驗(yàn)使用什么方法構(gòu)建XX疾病動(dòng)物模型，動(dòng)物模型如何構(gòu)建，如何分組，每組如何處理等。在什么時(shí)間做哪些相關(guān)處理。如給藥處理X天后，使用XXX試劑麻醉動(dòng)物，分別取XXX、XXX、XXX等組織進(jìn)行相關(guān)檢查。體外實(shí)驗(yàn)使用XXX方法（方法一），檢測XXXX；使用XXX方法（方法二），檢測XXXX；使用XXX方法（方法三），檢測XXXX。3）在細(xì)胞水平上明確XXX在該疾病過程中可能的機(jī)制 細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及處理使用什么方法（如何操作），獲取什么細(xì)胞（如何獲?。?，該細(xì)胞如何培養(yǎng)（培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、細(xì)胞密度等），如何處理（處理劑量、時(shí)間），處理多長時(shí)間，如何分組等。處理方式有：過表達(dá)、基因抑制、藥物處理、相關(guān)抑制劑處理、相關(guān)激動(dòng)劑處理等。根據(jù)處理不同對細(xì)胞進(jìn)行分組。細(xì)胞功能檢測細(xì)胞增殖情況檢測：MTT法、CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)、CFSE染色等；細(xì)胞凋亡檢測：DNA ledder、caspase-3、Annexin V/PI染色等細(xì)胞遷移功能檢測：細(xì)胞劃線實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、過繼轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)，凝膠遷移實(shí)驗(yàn)等細(xì)胞分泌因子濃度檢測：Western Blot、FACS、ELISA等細(xì)胞分化檢測：qPCR、WB檢測關(guān)鍵因子、流式檢測關(guān)鍵蛋白、鏡下細(xì)胞表型觀察等。4）在動(dòng)物水平上驗(yàn)證XXX作為XXX疾病治療的可行性 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)構(gòu)建動(dòng)物模型，不同劑量給藥分組（給藥可以是該分子的重組蛋白、功能性抑制劑、中和性抗體以及該分子所調(diào)節(jié)的信號通路的抑制劑等），不給藥組作為陽性對照，健康組作為陰性對照。疾病指標(biāo)檢測檢測疾病相關(guān)指標(biāo)，具體根據(jù)研究的疾病不同而定。（2）研究技術(shù)這里詳細(xì)敘述幾種該項(xiàng)目中使用到的但是不是常規(guī)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，詳細(xì)到該實(shí)驗(yàn)操作的每一步驟，可以分條陳述.常用實(shí)驗(yàn)研究技術(shù)如下：1） XX疾病動(dòng)物模型的構(gòu)建；2） 逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒/腺病毒介導(dǎo)的基因過表達(dá)和基因沉默技術(shù)；3） 通過細(xì)胞劃線實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力；4） Annexin V/PI雙染色檢測細(xì)胞凋亡水平；5） CFSE染色檢測細(xì)胞增殖；6） 原代細(xì)胞分離機(jī)培養(yǎng)；7） 免疫共沉淀檢測蛋白-蛋白之間相互作用；8） 染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測DNA-蛋白質(zhì)相互作用；9） RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀檢測RNA與蛋白之間相互作用；（3）技術(shù)路線 技術(shù)路線圖（可以根據(jù)研究內(nèi)容放置四個(gè)）（4）可行性分析理論上的可行性課題設(shè)計(jì)合理，技術(shù)平臺成熟本課題組長期進(jìn)行XX疾病或臨床問題的研究，對該領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀和問題非常了解，并在該領(lǐng)域進(jìn)行了相關(guān)性的研究，在此已有的研究基礎(chǔ)上我們找到并提出XXXX的假說。XXX在該疾病中表達(dá)異常，且我們發(fā)現(xiàn)其表達(dá)水平與疾病發(fā)生具有相關(guān)性。我們在前期工作中已成功的通過XXX實(shí)驗(yàn)方法，發(fā)現(xiàn)XX現(xiàn)象，部分驗(yàn)證了我們所提出的假說。所以該項(xiàng)目在理論上完全可行。技術(shù)上的可行性申請者長期從事XXX方面的研究，對于該領(lǐng)域所必需的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，如細(xì)胞凋亡、增殖、分化及遷移等功能的檢測、相關(guān)動(dòng)物模型的構(gòu)建等申請者及申請者團(tuán)隊(duì)人員均已熟練掌握。另外，在前期的研究工作中，我們已經(jīng)成功建立的XXX技術(shù)或?qū)嶒?yàn)系統(tǒng)，能夠保證該項(xiàng)目的順利展開。同時(shí)，XXX實(shí)驗(yàn)材料我們已經(jīng)與XXX單位合作，對方單位已經(jīng)授權(quán)或愿意協(xié)助我們完成哪些方面的實(shí)驗(yàn)以及給予提供實(shí)驗(yàn)材料等。該項(xiàng)目在技術(shù)上是可行的。條件上的可行性本課題組具備細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)必需的儀器設(shè)備，如流式細(xì)胞儀、熒光定量PCR儀、免疫組化相關(guān)設(shè)備、熒光顯微鏡等。申請者所在單位還擁有SPF級動(dòng)物房，科室建有疾病樣本庫，保留了大量的XX疾病相關(guān)的臨床標(biāo)本，包括組織蠟塊、新鮮組織（液氮保存）、基因組DNA、全血和血清，可以為本試驗(yàn)提供標(biāo)本來源。XX醫(yī)院XX科介紹，包括學(xué)科地位，科技獎(jiǎng)項(xiàng)，承擔(dān)課題，教授副教授數(shù)量等，表現(xiàn)綜合實(shí)力強(qiáng)，科研能力和技術(shù)力量雄厚。XX醫(yī)院一向重視科研工作，具有多科協(xié)作的優(yōu)良傳統(tǒng)，能夠在經(jīng)費(fèi)、儀器、設(shè)備和人員上保障本課題的順利完成。申請者擁有豐富的科研經(jīng)驗(yàn)和能力，背景良好。（介紹申請人科研背景），所以該項(xiàng)目在條件上也是可行的。4、 本項(xiàng)目的特色及創(chuàng)新之處XXX分子是不是第一次研究，如果是則是一個(gè)創(chuàng)新點(diǎn)；XXX分子在XX疾病中的發(fā)揮作用，之前有沒有報(bào)道，如果沒有也算是創(chuàng)新點(diǎn)；XXX分子參與的XX信號通路激活是否可以解釋XX疾病的發(fā)生發(fā)展過程，如果是也是一個(gè)創(chuàng)新點(diǎn)；XXX是否可以作為藥物治療靶點(diǎn)，也可以作為一個(gè)創(chuàng)新點(diǎn)。5、年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究結(jié)果（1）年度計(jì)劃2016.012016.06：組織樣本的收集及檢測：收集XXX例組織樣本，使用熒光定量PCR、Western Blot以及免疫組化等方法，檢測XXX基因在正常對照以及XX疾病患者中的表達(dá)水平變化，該基因與XX疾病的臨床相關(guān)性。2016.07-2016.12：構(gòu)建XX疾病動(dòng)物模型，分析XX基因在不同得病程度的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的表達(dá)變化。同時(shí)使用相關(guān)藥物治療動(dòng)物，并檢測藥物治療后XXX基因與XX疾病的相關(guān)性。2017.01-2017.06：分離正常動(dòng)物以及得病動(dòng)物的XXX組織細(xì)胞，使用病毒感染在細(xì)胞中過表達(dá)或者siRNA基因沉默XXX基因，然后檢測XXX基因相關(guān)信號通路分子的表達(dá)水平變化、信號通路活化程度，以及XXX基因表達(dá)改變后對細(xì)胞增殖、分化、遷移等功能的影響。2017.07-2017.12：進(jìn)一步在細(xì)胞水平驗(yàn)證XXX基因調(diào)控XX疾病的分子水平作用機(jī)制。 2018.01-2018.06：誘導(dǎo)XX疾病動(dòng)物模型，分別使用體外重組表達(dá)的XXX蛋白分子、XXX蛋白抑制劑、XXX相關(guān)信號通路抑制劑等給予動(dòng)物不同劑量藥物治療，檢測疾病相關(guān)指標(biāo)的變化，評估XXX是否可以作為XX疾病藥物治療的作用靶點(diǎn)。2018.07-2018.12：整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，撰寫論文，準(zhǔn)備結(jié)題，