支原體肺炎診斷及病原學(xué)檢測.ppt

支原體肺炎診斷及病原學(xué)檢測,肺炎支原體肺炎的診斷,臨床表現(xiàn)影像學(xué)表現(xiàn)病原學(xué)診斷,臨床表現(xiàn)及實驗室檢查,潛伏期1-3周起病形式多樣，多數(shù)患者僅以低熱、疲乏起病部分患者可以突發(fā)高熱并伴有明顯的頭痛、肌痛、惡心等全身中毒癥狀,呼吸道癥狀以干咳最突出，常持續(xù)4周以上，多伴有顯著咽痛，偶有胸痛、痰中帶血；呼吸道以外的癥狀中，以耳痛、麻疹樣或猩紅熱樣皮疹較多見,陽性體征以顯著的咽部充血和耳鼓膜充血較多見外周血白細胞總數(shù)和中性粒細胞比例多正常，有些患者可升高,病變多為邊緣模糊、密度較低的云霧樣片狀浸潤影，從肺門向外周肺野放射，肺實質(zhì)受累時也可呈大片實變影,肺部陽性體征少而影像表現(xiàn)明顯是支原體肺炎的一個重要特點,與普通細菌性肺炎通常表現(xiàn)為下肺單一的實變影或片狀浸潤影相比，支原體肺炎累及上肺者或同時累及雙肺者更多一些，且吸收較慢,肺部影像學(xué)表現(xiàn),病原學(xué)診斷,血清特異性抗體檢測傳統(tǒng)檢測方法：明膠凝集法，補體結(jié)合試驗。無法區(qū)分IgG和IgM酶免疫試驗或免疫熒光法：可以分別檢測特異性IgG和IgM，1周出現(xiàn)，3周高峰，但部分反復(fù)發(fā)生肺炎支原體感染的成年患者，特異性IgM可能持續(xù)陰性血清冷凝集試驗：不再做為肺炎支原體感染的診斷參考快速培養(yǎng)鑒定法基于核酸技術(shù)的肺炎支原體檢測方法,最早采血時間應(yīng)在起病后的7-10天，這樣才能確定是否MP感染,血清學(xué)診斷標準,診斷“金標準”：急性期及恢復(fù)期的雙份血清標本中，肺炎支原體特異性抗體滴度呈4倍或4倍以上增高，均可確診肺炎支原體感染明膠顆粒凝集試驗特異性抗體滴度l：160，或補體結(jié)合試驗特異性抗體滴度1：64，或特異性IgM陽性，也可作為診斷肺炎支原體近期感染或急性感染的依據(jù)。MP-IgM陽性代表著近期感染。MP-IgG陽性一般代表著既往感染。,人類對Mp無先天免疫性，尚無可實際應(yīng)用的有效疫苗，感染后也不能產(chǎn)生完全的保護性免疫Mp特異性的IgM抗體在發(fā)病后不久即可出現(xiàn)升高，14周內(nèi)達到峰值，然后在幾個月內(nèi)逐漸下降到?jīng)]有臨床意義的水平。急性感染后IgM的持續(xù)時間在不同個體中差異較大。兒童的IgM反應(yīng)一般強于成人，約50%的成人患者無法在Mp感染后測到IgM的升高IgG的出現(xiàn)時間晚于IgM，5周左右達到峰值，上升速度較慢且在體內(nèi)的持續(xù)時間較長（4年左右），但在感染數(shù)月后就會下降到較低水平。有些兒童無法測得明顯的IgG反應(yīng)特異性IgA的免疫反應(yīng)與IgM類似，但其在成年人尤其是老年人中的反應(yīng)水平更高,MP的免疫性,血清學(xué)檢測原理,冷凝集試驗：MP感染患者血清中常含有較高滴度的寒冷紅細胞凝集素（簡稱冷凝集素）。它能與患者自身紅細胞或“O”型人紅細胞于04條件下起凝集反應(yīng)，在37時已凝集的紅細胞呈可逆性的完全散開。,凝集試驗與ELISA的原理比較,補體結(jié)合實驗,冷凝集試驗：冷凝集素是對Mp最早的體液反應(yīng)，50%的病人在Mp感染第2周時的滴度可達到1:32以上，而6周內(nèi)即降至感染前的水平。冷凝集試驗雖然簡便、快速，但它不是針對Mp的特異性試驗，多種其他微生物感染（如EB病毒、巨細胞病毒、肺炎克雷伯菌）和自身免疫性疾病時冷凝集素滴度均可升高。同時，該試驗的敏感性也只有5060%，對于12歲以下的兒童其敏感性則更差補體結(jié)合試驗(CFT)：十幾年前，CFT仍是Mp血清學(xué)試驗的標準方法，但越來越多的研究表明該方法的敏感性和特異性都不夠高。CFT所用的抗原為Mp的氯仿-甲醇糖脂抽提物，它可與人類、細菌及植物的某些抗原表位發(fā)生交叉反應(yīng)（如腦膜炎時，CFT滴度可明顯升高）。CFT測定的主要是IgM，對IgG不很敏感，導(dǎo)致其整體敏感性偏低。,各血清學(xué)檢測方法的特點,間接血凝試驗(PHA)：將提純的Mp抗原連接到紅細胞（禽類或羊）上，與血清中的抗Mp抗體可發(fā)生凝集反應(yīng)。該試驗的敏感性和特異性均明顯優(yōu)于CFT。PHA不能區(qū)分抗體的類型，因此單份測定出現(xiàn)低滴度的抗體陽性結(jié)果并不能確定是既往感染還是新近感染。明膠顆粒凝集試驗(PA)：其原理與間接血凝試驗基本相同，只是用人工合成的明膠顆粒取代了紅細胞作為凝集試驗的載體，從而使結(jié)果判定更清晰，靜置穩(wěn)定性更好，非特異性反應(yīng)大大減少，檢測的敏感性也有了進一步提高（對IgM和IgA更敏感）,酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：是目前Mp血清學(xué)試驗中常用的方法，可分開檢測IgM、IgG和IgA，敏感性和特異性均能達到較高的水平。雖然單次測定IgM（或IgA）陽性即可基本判定為Mp的新近感染，但陰性時卻無法排除感染的可能性。IgG一般須進行間隔2周以上的雙份血清測定，有4倍以上滴度上升時才能做出Mp新近感染的診斷。因此，在ELISA測定中應(yīng)強調(diào)同時檢測IgG和IgM（或IgA），且最好能對間隔2周以上的雙份配對血清進行抗體轉(zhuǎn)化情況的測定，從而做出明確的診斷其它方法：間接免疫熒光試驗（IFA）、乳膠凝集試驗（LA）、免疫印跡測定（WB）、黏附抑制試驗、放射免疫沉淀試驗、補體介導(dǎo)的殺傷試驗等,其他病原學(xué)檢測方法,PCR、單克隆抗體法等檢測分泌物中抗原及DNA，敏感性、特異性高，可用于早期診斷，但操作復(fù)雜，同位素、假陽性的問題限制了推廣和使用，PCR實驗條件要求嚴格，只限于實驗研究。MP的分離培養(yǎng)和鑒定是