某生物技術(shù)科技項(xiàng)目建議書【最新精品】.doc

項(xiàng)目建議書項(xiàng)目領(lǐng)域：生物技術(shù)項(xiàng)目名稱：移植排斥反應(yīng)的預(yù)測(cè)、診斷試劑盒的開發(fā)生產(chǎn)單位：陜西瑞奇生物科技有限公司專業(yè)好文檔2一、基本信息1.項(xiàng)目負(fù)責(zé)人基本情況姓名胡軍性別男出生年月1962.10學(xué)歷研究生學(xué)位博士獲得最終學(xué)位院校第四軍醫(yī)大學(xué)所學(xué)專業(yè)移植免疫學(xué)現(xiàn)從事專業(yè)移植免疫學(xué)職稱講師職務(wù)/主要工作經(jīng)歷1982-1989年，在河南省確山縣衛(wèi)生防疫站從事流行病防治工作。1989-1992年，在第四軍醫(yī)大學(xué)微生物學(xué)教研室病毒及其免疫專業(yè)讀碩士學(xué)位。1992-1996年在第四軍醫(yī)大學(xué)微生物學(xué)教研室從事病毒及其免疫和移植免疫的研究工作。1996-1999年，在第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院心血管病研究所移植免疫學(xué)專業(yè)讀博士學(xué)位。1999-2001年在第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院心血管病研究所從事移植免疫學(xué)研究。2001年至今，從事生物技術(shù)產(chǎn)品的開發(fā)研究，主要從事移植免疫學(xué)產(chǎn)品的開發(fā)工作。專業(yè)好文檔3主要工作成績(jī)從事過的主要重大項(xiàng)目情況、研究成果和獲知識(shí)產(chǎn)權(quán)情況（不限字?jǐn)?shù)）1、軍隊(duì)重大課題心肺聯(lián)合移植臨床研究2002.05-2005.12主要參加者。項(xiàng)目進(jìn)展順利。2、心臟移植臨床與基礎(chǔ)研究項(xiàng)目的主要參加者，已獲得陜西省科技進(jìn)步一等獎(jiǎng)。3、已獲得國家發(fā)明專利一項(xiàng)，已申請(qǐng)的發(fā)明專利一項(xiàng)，準(zhǔn)備申請(qǐng)的專利兩項(xiàng)。2.項(xiàng)目基本信息項(xiàng)目?jī)?nèi)容摘要（限500字）：器官移植排斥反應(yīng)預(yù)測(cè)、診斷產(chǎn)品的開發(fā)生產(chǎn)器官移植是臨床上發(fā)展最迅速的一個(gè)領(lǐng)域，據(jù)權(quán)威機(jī)構(gòu)預(yù)測(cè)，到二十一世紀(jì)中葉，外科手術(shù)的一半都將是器官置換。世界上已有70多萬人接受了器官移植，而且這個(gè)數(shù)字還在以每年5萬多例的速度增加，但臨床上對(duì)器官移植病人的選擇及移植后排斥反應(yīng)的無創(chuàng)診斷、監(jiān)測(cè)手段等尚未建立起來；這嚴(yán)重制約了器官移植的發(fā)展和水平的提高。本項(xiàng)目把基因工程技術(shù)和傳統(tǒng)免疫學(xué)方法及新建立的免疫學(xué)方法結(jié)合起來，制備世界通用的HLA抗原標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞，為器官移植前的供、受體搭配，移植后排斥反應(yīng)的預(yù)測(cè)、診斷提供快捷、敏感、特異、可靠、無創(chuàng)的科學(xué)檢測(cè)方法，該方法目前已用于臨床心臟移植的排斥反應(yīng)的診斷，經(jīng)過大量的臨床活檢對(duì)照有很好的一致性，該方法的最佳反應(yīng)條件也已基本建立，目前只需制備出通用檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)所需的原材料即可進(jìn)行產(chǎn)品的大規(guī)模生產(chǎn)。該項(xiàng)目的成功填補(bǔ)了世界器官移植領(lǐng)域的空白，對(duì)急性排斥反應(yīng)的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，明顯提高移植患者的生存質(zhì)量，延長(zhǎng)存活期限均具有革命性的重要作用。不但具有廣泛的社會(huì)效益，而且還具有巨大的經(jīng)濟(jì)效益。該試劑盒的出現(xiàn)會(huì)大力推動(dòng)器官移植領(lǐng)域的發(fā)展，終將使全球器官移植的總體水平有明顯提高。本項(xiàng)目原材料的制備使用的技術(shù)是目前最先進(jìn)的基因工程技術(shù)；其所用的混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法是目前免疫學(xué)專家公認(rèn)的，反映機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)最好的體外模型；所用的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)抑制試驗(yàn)是我們近期才新建立的一個(gè)細(xì)胞免疫學(xué)檢測(cè)的新方法，并已申請(qǐng)專利，故本項(xiàng)目產(chǎn)品短期內(nèi)被其他更先進(jìn)的技術(shù)和方法所取代的可能性不大。所使用的主要原材料和主要技術(shù)均立足國內(nèi)，采購渠道通暢。器官移植排斥反應(yīng)預(yù)測(cè)、診斷、監(jiān)測(cè)領(lǐng)域在世界上屬于一個(gè)尚未開發(fā)的領(lǐng)域,尚未有與排斥反應(yīng)診斷有關(guān)的試劑盒推出,我們申請(qǐng)國內(nèi)外專利后可保護(hù)20年。目前排斥反應(yīng)預(yù)測(cè)試劑盒已獲國家發(fā)明專利，正在申請(qǐng)美、日、德、英、印五國的專利；排斥反應(yīng)診斷試劑盒已申請(qǐng)國家發(fā)明專利。本產(chǎn)品的出現(xiàn)將搶占全球器官移植領(lǐng)域產(chǎn)品的至高點(diǎn)。本項(xiàng)目產(chǎn)品以出口為主，市場(chǎng)約4-5億美元/年（市場(chǎng)上無同類競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品）。預(yù)計(jì)總投資約5000萬元人民幣，首期投資需1000-1500萬元人民幣。投資到位后18-24個(gè)月可具備批量投產(chǎn)條件，生產(chǎn)能力為年產(chǎn)80萬套，投產(chǎn)一年后年產(chǎn)150萬套。屆專業(yè)好文檔5時(shí)，年銷售收入20億元人民幣，稅收3億元人民幣，凈利潤(rùn)8億元人民幣。產(chǎn)品上市后一年可收回全部投資。二、項(xiàng)目情況專業(yè)好文檔61、研究的目的及意義、應(yīng)用需求、研究開發(fā)的必要性（不限字?jǐn)?shù)）1.1項(xiàng)目研究的目的、意義針對(duì)危害人類健康的各器官的終末期疾病，器官移植是目前唯一的治療手段。器官移植術(shù)前排斥反應(yīng)的預(yù)測(cè)、術(shù)后排斥反應(yīng)的監(jiān)測(cè)與診斷，以及最大限度地減少甚至避免病理排斥反應(yīng)的發(fā)生等是臨床器官移植急需解決的問題，也是國內(nèi)外共同關(guān)注的熱點(diǎn)和難點(diǎn)問題。本項(xiàng)目通過基因工程技術(shù)和細(xì)胞工程技術(shù)，建立HLA抗原標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞檢測(cè)平臺(tái)，為器官移植前的供受體搭配、移植后排斥反應(yīng)的預(yù)測(cè)、監(jiān)測(cè)、診斷、預(yù)防和技術(shù)服務(wù)保障提供快捷、敏感、特異、可靠、無創(chuàng)的科學(xué)檢測(cè)方法。該項(xiàng)目的成功填補(bǔ)了世界器官移植領(lǐng)域的空白，對(duì)排斥反應(yīng)的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，明顯提高移植患者的生存質(zhì)量，延長(zhǎng)存活期限均具有革命性的重要作用。不但具有廣泛的社會(huì)效益，而且還具有巨大的經(jīng)濟(jì)效益。該試劑盒的出現(xiàn)會(huì)大力推動(dòng)器官移植領(lǐng)域的發(fā)展，終將使全球器官移植的總體水平有明顯提高。由于該項(xiàng)目填補(bǔ)了世界器官移植領(lǐng)域的空白，它的出現(xiàn)將搶占全球器官移植領(lǐng)域產(chǎn)品的至高點(diǎn)。將使我國在世界生物技術(shù)產(chǎn)品領(lǐng)域擁有一席之地。為我國生物技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展開辟一個(gè)新領(lǐng)域，對(duì)促進(jìn)我國生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)向多元化發(fā)展具有重要意義。1.2應(yīng)用需求及研究開發(fā)的必要性器官移植是目前臨床上發(fā)展最迅速的一個(gè)領(lǐng)域,有人預(yù)測(cè),到二十一世紀(jì)中葉,外科手術(shù)的一半都將是器官置換.目前世界上已有70多萬人接受了器官移植,而且這個(gè)數(shù)字還在以每年近5萬的速度增加,但目前臨床上對(duì)器官移植病人的選擇都是通過HLA抗原配型來比較供受體差異的大小，這種比較只是對(duì)供受體HLA抗原的客觀存在的差異性進(jìn)行比較，不能反映他們各自HLA抗原組合的功能狀況，而不同的抗原組合具有不同的免疫反應(yīng)性，所以，原來的方法不能反映一個(gè)人的HLA抗原組合對(duì)人類某一個(gè)HLA抗原的免疫反應(yīng)性。而本方法是一個(gè)功能性檢測(cè)方法，是了解一個(gè)人的HLA抗原組合對(duì)各種不同特定抗原反應(yīng)性的方法。這一方法所得結(jié)果更接近人體內(nèi)實(shí)際的免疫反應(yīng)狀況。目前對(duì)移植后排斥反應(yīng)的確定主要是通過有創(chuàng)，痛苦、非特異的活檢穿刺方法。臨床上急需的快捷、敏感、特異、可靠、無創(chuàng)的科學(xué)手段尚未建立。再者器官移植后,受體需終生使用免疫抑制劑,但服用該藥的劑量過大不僅導(dǎo)致費(fèi)用增加(一般一年需數(shù)萬元人民幣),且受體易患感染性疾病及惡性腫瘤等,服用劑量過小又會(huì)導(dǎo)致移植器官被排斥而失去功能,如何對(duì)具體的個(gè)體選擇合適的用藥劑量是長(zhǎng)期以來困擾臨床醫(yī)生的一個(gè)難題。多年來指導(dǎo)用藥的“金指標(biāo)”一直是上述的活檢穿刺,但由于活檢穿刺費(fèi)用高且有創(chuàng)、痛苦,不易為病人接專業(yè)好文檔7受,而且穿刺本身具有危險(xiǎn)性,不宜多做,故移植后在醫(yī)生未察覺的情況下突然因排斥反應(yīng)使移植器官失去功能而導(dǎo)致病人死亡情況屢有發(fā)生。再如,許多病人在移植后,由于經(jīng)濟(jì)原因而停用免疫抑制劑,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中有些病人停藥后并不發(fā)生排斥反應(yīng),也就是說這些病人對(duì)供體器官產(chǎn)生了免疫耐受，在未停藥的患者中，實(shí)際上可能有不少患者已對(duì)供體器官產(chǎn)生了耐受。然而，由于沒有一個(gè)科學(xué)的指標(biāo)去檢測(cè)并說明該患者已對(duì)供體器官產(chǎn)生了耐受，所以，醫(yī)生很難確定停用免疫抑制劑的時(shí)機(jī)，從而，使移植后停用免疫抑制劑成為一種冒險(xiǎn)。因此，本方法將對(duì)器官移植前的供受體選擇、移植后的排斥反應(yīng)的確定以及停用免疫抑制劑時(shí)機(jī)的掌控有革命性的貢獻(xiàn)。器官移植是治療許多器官終末期疾病的唯一方法。在器官移植后，供受體間HLA抗原的差異將引起排斥反應(yīng)，排斥反應(yīng)仍是目前影響心、肝、腎、骨髓等器官或細(xì)胞移植后1年、5年、10年存活率的主要因素，如果有一個(gè)在移植以前可以挑選供受體使之合理搭配(即挑選那些移植后可能發(fā)生排斥反應(yīng)較輕或不發(fā)生排斥反應(yīng)的供受體進(jìn)行移植,這一點(diǎn)對(duì)骨髓移植尤為重要)、在移植后能檢測(cè)有無排斥反應(yīng)發(fā)生、移植器官有無淋巴細(xì)胞慢性浸潤(rùn)及受體對(duì)供體器官有無免疫耐受發(fā)生等的無創(chuàng)檢測(cè)方法,對(duì)指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理調(diào)整免疫抑制劑用量、使之適時(shí)停藥(將大大減輕病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)),提高病人生存質(zhì)量，降低移植病人的死亡率,延長(zhǎng)移植器官的存活時(shí)間具有重要意義,這將有力推動(dòng)器官移植事業(yè)的發(fā)展。所以,隨著接受器官移植的患者的不斷增加及移植免疫學(xué)的迅速發(fā)展,建立一套完善的移植前對(duì)供受體選擇,移植后監(jiān)測(cè)受體對(duì)供體特異性免疫狀態(tài)的無創(chuàng)檢測(cè)方法,對(duì)供體器官的長(zhǎng)期存活已變得越來越重要。但在本方法出現(xiàn)以前,臨床上尚沒有一個(gè)快捷、敏感、特異、可靠、無創(chuàng)的科學(xué)的指標(biāo)來指導(dǎo)移植前供體的挑選,移植后排斥反應(yīng)和免疫耐受的診斷,及免疫抑制劑用量調(diào)整的方法。專業(yè)好文檔82主要研究開發(fā)內(nèi)容、擬解決的技術(shù)難點(diǎn)、創(chuàng)新突破點(diǎn)以及預(yù)期達(dá)到的目標(biāo)、主要經(jīng)濟(jì)技術(shù)指標(biāo)和水平（不限字?jǐn)?shù)）2.1本項(xiàng)目研究開發(fā)的主要內(nèi)容：將傳統(tǒng)免疫學(xué)檢測(cè)方法和現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)有機(jī)結(jié)合，建立一套可應(yīng)用于臨床器官移植排斥反應(yīng)預(yù)測(cè)的快捷、敏感、特異、可靠、無創(chuàng)的科學(xué)方法；在進(jìn)行傳統(tǒng)免疫學(xué)研究過程中建立一個(gè)全新的免疫學(xué)方法，應(yīng)用于排斥反應(yīng)的臨床診斷。主要研究?jī)?nèi)容有：(1)排斥反應(yīng)預(yù)測(cè)：它是運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)，建立表達(dá)HLA-類和類抗原的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞株，使每株細(xì)胞上只表達(dá)一個(gè)HLA抗原。再把這些幾乎包含了人類全部HLA抗原的細(xì)胞株的細(xì)胞分別放入細(xì)胞培養(yǎng)板各孔之中，制成標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞板作為抗原板，用該抗原板通過混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法來檢測(cè)受體對(duì)哪些HLA抗原反應(yīng)強(qiáng)、對(duì)哪些HLA抗原反應(yīng)弱，從而指導(dǎo)我們?yōu)槭荏w挑選合適的供體器官，以減少移植后排斥反應(yīng)的發(fā)生。其主要研究?jī)?nèi)容包括：A、HLA抗原缺失細(xì)胞系（作為HLA抗原表達(dá)的空白細(xì)胞載體）的選擇與鑒定，已完成。B、通過EB病毒感染的方法建立包含已知人類全部HLA抗原的幾十個(gè)細(xì)胞系（該項(xiàng)工作已經(jīng)基本完成），并分別從這些細(xì)胞中提取mRNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，再通過PCR方法從反轉(zhuǎn)錄的cDNA中克隆出目的基因進(jìn)行測(cè)序，該項(xiàng)工作正在進(jìn)行中，已經(jīng)完成了其中一部分。C、選擇一種能在真核細(xì)胞中表達(dá)、并且能整合到宿主細(xì)胞基因組中的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體，構(gòu)建HLA抗原表達(dá)載體，該項(xiàng)工作正在進(jìn)行中（已構(gòu)建出10余個(gè)抗原表達(dá)載體）。D、把HLA抗原表達(dá)載體經(jīng)包裝后轉(zhuǎn)染入細(xì)胞中表達(dá)（正在進(jìn)行中）。E、篩選穩(wěn)定表達(dá)某一個(gè)HLA抗原的細(xì)胞建株、并進(jìn)行鑒定。F、重復(fù)上述工作，建立分別表達(dá)不同HLA抗原近100個(gè)亞型抗原的細(xì)胞株。G、探索用這些細(xì)胞株作為刺激細(xì)胞進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的最佳條件。H、建立這些細(xì)胞株的大規(guī)模培養(yǎng)條件，用這些細(xì)胞制備包含人類全部HLA抗原的檢測(cè)板。I、用這種HLA抗原檢測(cè)板，通過混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)為器官移植受者挑選供體，專業(yè)好文檔9同時(shí)對(duì)移植后的患者進(jìn)行監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)已對(duì)供體器官產(chǎn)生免疫耐受的患者，并指導(dǎo)其逐漸停用免疫抑制劑。J、建立用這些細(xì)胞株作為刺激細(xì)胞進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)抑制試驗(yàn)的最佳條件。(2)排斥反應(yīng)等的診斷：在進(jìn)行移植免疫學(xué)的研究過程中，我們又建立了一個(gè)全新的免疫學(xué)方法，由于其實(shí)驗(yàn)方法與混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)相似，反應(yīng)結(jié)果和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果完全相反，暫時(shí)我們把它叫做混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)抑制試驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)可以用來檢測(cè)外周血中活化淋巴細(xì)胞的特異性，故使用上述HLA抗原板即可檢測(cè)器官移植受者體內(nèi)有無HLA抗原活化的淋巴細(xì)胞，從而判斷體內(nèi)有無排斥反應(yīng)發(fā)生。該方法不但可以用于診斷排斥反應(yīng)，也可能用于各種傳染病的診斷和預(yù)防。挑選上述已被EB病毒轉(zhuǎn)化的細(xì)胞株中相互不具有相同抗原的細(xì)胞株，以他們?yōu)檩d體，通過上述基因工程的方法，把其它的未包含在所挑選的載體中的HLA抗原分別轉(zhuǎn)入其中并表達(dá)，使一個(gè)細(xì)胞表達(dá)盡可能多的HLA抗原。從而使這些細(xì)胞株表達(dá)幾乎人類全部的HLA抗原。用這些表達(dá)較多HLA抗原的細(xì)胞株制備HLA抗原板，通過混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)抑制試驗(yàn)對(duì)器官移植病人進(jìn)行排斥反應(yīng)監(jiān)測(cè),并探索其最佳反應(yīng)條件。選擇上述兩種細(xì)胞板中的一種細(xì)胞板進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)抑制試驗(yàn)，對(duì)器官移植后的患者進(jìn)行排斥反應(yīng)監(jiān)測(cè)、診斷和預(yù)防。對(duì)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)抑制試驗(yàn)方法在臨床感染性疾病診斷方面的應(yīng)用進(jìn)行探索性研究，爭(zhēng)取早日把該方法應(yīng)用到流腦、乙腦病