GB5009.215-2016食品安全國家標準食品中有機錫的測定.pdf

中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 6食品安全國家標準食品中有機錫的測定2 0 1 6 - 0 8 - 3 1發(fā)布2 0 1 7 - 0 3 - 0 1實施中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會發(fā) 布G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 6 前 言 本標準代替G B/T5 0 0 9.2 1 52 0 0 8 食品中有機錫含量的測定 。本標準與G B/T5 0 0 9.2 1 52 0 0 8相比, 主要變化如下: 標準名稱修改為“ 食品安全國家標準 食品中有機錫的測定” ; 標準文本格式的更新。G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 61 食品安全國家標準食品中有機錫的測定1 范圍本標準規(guī)定了食品中有機錫的氣相色譜-脈沖火焰光度檢測器檢測方法。本標準適用于魚類、 貝類、 葡萄酒和醬油等樣品中二甲基錫、 三甲基錫、 一丁基錫、 二丁基錫、 三丁基錫、 一苯基錫、 二苯基錫、 三苯基錫的測定。2 原理分別以一甲基錫為單取代有機錫的內標, 三丙基錫為二、 三取代有機錫的內標, 采用內標法定量。在試樣中定量加入一甲基錫和三丙基錫內標, 超聲輔助將有機錫提取出來, 有機溶劑萃取, 提取后的樣品溶液經凝膠滲透色譜凈化、 戊基格林試劑衍生、 衍生化產物再經弗羅里硅土(F l o r i s i l) 凈化, 采用氣相色譜-脈沖火焰光度檢測器(G C - P F P D) 測定。3 試劑和材料除非另有說明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 正己烷(n- C6H1 4) : 重蒸。3.1.2 四氫呋喃(CH2CH2O CH2CH2) : 重蒸。3.1.3 乙酸乙酯(CH3C OO C2H5) : 重蒸。3.1.4 環(huán)己烷(C6H1 2) : 重蒸。3.1.5 甲醇(CH3OH) 。3.1.6 無水乙醚(C2H5O C2H5) 。3.1.7 溴代正戊烷(n- C5H1 2B r) 。3.1.8 無水硫酸鈉(N a2S O4) : 將無水硫酸鈉置干燥箱中, 于1 2 0干燥4h, 冷卻后, 密閉保存。3.1.9 氯化鈉(N a C l) 。3.1.1 0 硫酸(H2S O4) : 優(yōu)級純。3.1.1 1 鹽酸(HC l) : 優(yōu)級純。3.1.1 2 氫溴酸(H B r) 。3.1.1 3 乙二胺四乙酸二鈉(E D T AN a2) 。3.1.1 4 金屬鈉(N a) 。3.1.1 5 鎂條(M g) 。3.1.1 6 環(huán)庚三烯酚酮(t r o p o l o n e) :9 8%。3.1.1 7 弗羅里硅土(F l o r i s i l) :0.1 4 7mm0.2 5mm(6 0目1 0 0目) ,1 2 0烘烤1 2h。3.1.1 8 聚苯乙烯凝膠:0.0 7 5mm0.1 4 7mm(1 0 0目2 0 0目) , 或同類產品。G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 62 3.2 試劑配制3.2.1 環(huán)庚三烯酚酮-正己烷溶液(0.0 3%) : 量取正己烷1 0 0m L, 加入0.0 3g環(huán)庚三烯酚酮混勻。3.2.2 氯化鈉溶液(2 0g/L) : 稱取氯化鈉1 0 0g, 溶于水并稀釋至5 0 0m L。3.2.3 飽和氯化鈉溶液: 在1 0 0m L水中加入過量氯化鈉, 水浴使溶解, 恢復室溫后要求結晶析出。3.2.4 甲醇-水溶液(4+1) : 取甲醇適量, 制備甲醇-水(4+1) 溶液, 并根據每1m L甲醇加1L鹽酸的要求, 加入鹽酸, 制得含鹽酸的甲醇-水(4+1) 溶液。3.2.5 氫溴酸-四氫呋喃溶液(1+2 0) : 取氫溴酸和四氫呋喃各適量, 按照1+2 0的比例制備成溶液。3.3 標準品3.3.1 有機錫標準品及其標準溶液: 見附錄A。除二甲基錫、 三丁基錫純度為9 5%外, 其他標準品純度均大于9 7%。3.3.2 內標: 一甲基錫(MMT) 和三丙基錫(T P r T) 標準品: 純度9 8%。3.4 標準溶液配制3.4.1 有機錫標準貯備液: 準確稱取有機錫的標準品適量, 置于1 0m L燒杯中, 加入甲醇-水溶液(3 .2 .4)溶解,轉移到1 0m L容量瓶中, 并稀釋至刻度。于-2 0冰箱保存。3.4.2 內標標準貯備溶液: 準確稱取內標適量, 置于1 0m L燒杯中, 加入甲醇-水溶液(3.2.4) 溶解, 轉移到1 0m L容量瓶中, 并稀釋至刻度。于-2 0冰箱保存。3.4.3 有機錫標準及內標中間溶液: 量取有機錫標準或內標貯備液適量, 用甲醇-水溶液(3.2.4) 稀釋1 0 0倍, 質量濃度見附錄A。于-2 0冰箱保存。3.4.4 有機錫標準及內標工作溶液: 量取有機錫標準或內標中間液適量, 置于1 0m L容量瓶中, 加入甲醇-水溶液(3.2.4) 并稀釋至刻度, 濃度見附錄A。于-2 0冰箱保存。4 儀器和設備4.1 氣相色譜儀(G C) : 配脈沖火焰光度檢測器(P F P D) , 硫濾光片。4.2 色譜柱:D B - 1毛細管柱或等效柱, 柱長3 0m, 膜厚0.2 5m, 內徑0.2 5mm。4.3 組織勻漿器。4.4 振蕩器。4.5 超聲波清洗器。4.6 旋轉蒸發(fā)儀。4.7 氮氣濃縮器。4.8 三口瓶、 分液漏斗和加熱回流裝置。4.9 加熱磁力攪拌裝置。4.1 0 玻璃層析柱。4.1 1 分析天平: 感量為1m g。4.1 2 電加熱套。5 分析步驟5.1 戊基格林試劑的合成5.1.1 乙醚重蒸與除水: 在3 5下, 采用全玻璃蒸餾裝置重蒸兩次。G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 63 在蒸餾的乙醚中, 加入光潔金屬鈉片, 至不再產生明顯氣泡后, 放置1h2h, 繼續(xù)加入金屬鈉片,保存?zhèn)溆谩?.1.2 溴代正戊烷的重蒸: 量取溴代正戊烷1 0 0m L, 置于蒸餾瓶中, 在1 4 0下, 采用全玻璃蒸餾裝置重蒸兩次, 餾分避光收集。5.1.3 鎂屑的制備: 取鎂條, 刮去表面氧化膜層, 用剪刀剪成約0.3mm的碎屑, 用正己烷洗滌2次3次,揮干, 保存?zhèn)溆谩?.1.4 戊基溴化鎂的合成: 稱取鎂屑1 0g, 置5 0 0m L三口瓶中, 加入重蒸乙醚1 0 0m L, 加入攪拌子。在攪拌下, 滴加重蒸溴代正戊烷6 0m L和重蒸乙醚5 0m L的混合溶液。反應發(fā)生后, 停止攪拌。當反應速度減緩后, 繼續(xù)滴加上述溴代正戊烷和乙醚的混合溶液, 并攪拌。調節(jié)滴加速度, 使反應瓶中的乙醚保持微沸狀態(tài)。當反應緩慢時, 開始加熱, 保持反應發(fā)生, 繼續(xù)加熱回流至反應完全, 得到戊基溴化鎂溶液約2 0 0m L, 溶液呈灰黑色混濁狀態(tài)。將合成的戊基溴化鎂分裝至棕色小瓶中, 封口, 干燥器內保存。5.2 試樣制備魚去皮及刺, 制成肉糜; 貝類試樣取可食組織制成勻漿; 葡萄酒和醬油試樣混合均勻。魚貝類試樣制成勻漿后, 可采用冷凍干燥, 制成凍干粉末, 置-2 0以下低溫保存。5.2.1 試樣提取5.2.1.1 魚類樣品準確稱取試樣適量, 加入乙二胺四乙酸二鈉0.1 5g和2 0g/L氯化鈉溶液5m L, 搖勻, 加入內標工作溶液5 0L, 加入氫溴酸-四氫呋喃溶液(1+2 0) (3.2.5)1 5m L, 超聲5m i n。如果為濕樣, 加入飽和氯化鈉溶液1m L, 搖勻, 加入內標工作溶液5 0L, 加入氫溴酸-四氫呋喃溶液(1+2 0) (3.2.5)1 5m L, 超聲5m i n。5.2.1.2 貝類樣品準確稱取試樣適量, 加入2 0%氯化鈉溶液5m L, 搖勻, 加入內標工作溶液5 0L, 加入氫溴酸-四氫呋喃溶液(1+2 0) (3.2.5)1 5m L, 超聲5m i n。5.2.1.3 葡萄酒等液體樣品量取試樣1 0m L, 加入氯化鈉2g, 搖勻, 加入內標工作溶液5 0L, 加入氫溴酸-四氫呋喃溶液(1+2 0)(3.2.5)1 5m L, 超聲5m i n。5.2.2 試樣溶液的凈化在試樣溶液中加入含0.0 3%環(huán)庚三烯酚酮的正己烷2 5 m L, 振蕩萃取4 0 m i n, 離心1 0 m i n(30 0 0r/m i n) ,靜置分層, 吸取有機相轉移至茄形瓶中, 在殘渣中加入正己烷1 0m L, 振蕩萃取1 0m i n,離心1 0m i n(30 0 0r/m i n) , 靜置分層, 吸取有機相。合并至茄形瓶中, 旋轉蒸發(fā)濃縮至近干。5.2.3 凝膠滲透色譜凈化5.2.3.1 凝膠柱的裝填: 取聚苯乙烯凝膠, 用四氫呋喃-乙酸乙酯(1+1) 溶液浸泡過夜。用玻璃棉封堵內徑為1.7c m1.8c m的玻璃層析柱底端, 濕法加入浸泡好的凝膠, 凝膠自然沉降, 穩(wěn)定后柱長約為1 5c m。5.2.3.2 凈化: 在試樣提取液的濃縮殘渣中加入四氫呋喃-乙酸乙酯(1+1) 溶液1m L, 將此溶液全部轉G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 64 移至層析柱上, 用1m L四氫呋喃-乙酸乙酯(1+1) 溶液洗滌茄形瓶。待層析柱中試液溶液的液面降至接近凝膠時, 將洗液轉移至柱上。用四氫呋喃-乙酸乙酯(1+1) 溶液洗脫, 棄去0m L1 8m L流分, 收集1 8m L3 3m L流分, 收集流出體積1 5m L。5.2.4 戊基溴化鎂格林試劑衍生將5.2.3.2收集的凈化溶液旋轉蒸發(fā)濃縮近干, 加入環(huán)己烷1 0m L, 繼續(xù)旋轉蒸發(fā)濃縮至約1m L,轉移至1 0m L離心管中, 用環(huán)己烷洗滌茄形瓶, 合并在離心管中, 并定容至2m L。用1m L注射器加取上述合成的戊基溴化鎂格林試劑0.8m L, 渦旋振蕩混勻, 超聲反應1 5m i n后, 逐滴加入0.5m o l/L硫酸約3m L, 振搖, 終止衍生反應, 渦旋振搖, 靜置使上層溶液澄清。5.2.5 弗羅里硅土(F l o r i s i l) 柱凈化5.2.5.1 層析柱裝填: 用玻璃棉封堵玻璃柱底端后, 從底部到頂部依次裝入活化弗羅里硅土(F l o r i s i l)1.5g、無水硫酸鈉2g, 用正己烷1 0m L預淋洗。5.2.5.2 凈化: 將5.2.4衍生溶液的上層有機相全部轉移至弗羅里硅土柱上, 當柱中溶液的液面降至無水硫酸鈉層時, 用正己烷洗脫, 收集洗脫液5m L, 在氮氣流下濃縮至約1m L后, 轉移至另一根填以1.5g弗羅里硅土(F l o r i s i l) 和2g無水硫酸鈉的層析柱上, 用正己烷-甲苯(5+1) 溶液1 0m L預淋洗, 用正己烷-甲苯(5+1) 溶液洗脫, 收集1 0m L流分。5.2.6 濃縮在氮氣流下, 將5.2.5.2凈化的試樣溶液濃縮定容至1.0m L, 轉移進進樣小瓶中, 待G C測定。5.3 儀器參考條件氣相色譜參考條件:a) 色譜柱1):D B - 1柱( 或等效柱) , 柱長3 0m, 膜厚0.2 5m, 內徑0.2 5mm。1) 給出這一信息是為了方便本標準的使用者, 并不表示對該產品的認可, 如果其他等效產品具有相同的效果, 則可使用這些等效的產品。b) 采用不分流方式, 進樣口溫度2 8 0。c) 柱溫程序: 開始溫度為5 0 , 保持1 m i n; 以1 0 /m i n升溫至1 2 0 ;5 /m i n升溫至2 0 0;1 0/m i n升溫至2 8 0, 保持5m i n。d) 載氣為高純氮氣( 純度9 9.9 9 9%) 。e) 脈沖火焰光度檢測器參考條件: 模式: 硫濾光片; 溫度:3 5 0 ; 燃氣和助燃氣流速: 空氣12 1m L/m i n, 氫氣2 2m L/m i n, 空氣21 1m L/m i n; 光電倍增管電壓:5 5 0V; 門檻時間:4m s; 門延遲時間:5m s; 激發(fā)電壓:1 0 0mV。5.4 標準曲線制作準確稱取不含有機錫的對應食物樣品作為空白基質適量, 加入5m L2 0%氯化鈉溶液, 分別加入有機錫混合標準溶液0L、1 0L、3 0L、5 0L、1 0 0L、2 0 0L、4 0 0L及內標工作溶液5 0L, 按試樣提取與凈化過程要求同步操作。吸取標準系列溶液1L注入氣相色譜儀進行分析, 得到色譜圖( 參見附錄B.1及附錄B.2) , 以保留時間定性。5.5 試樣溶液的測定吸取試樣溶液1L注入氣相色譜儀中, 得到色譜圖( 參見附錄B.3) , 以保留時間定性。計算目標G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 65 化合物與內標的峰面積或峰高比, 以標準系列溶液中目標有機錫的進樣量(n g) 與對應的目標有機錫與內標的峰面積或峰高比繪制線性曲線, 根據線性曲線計算試樣中有機錫含量。6 分析結果的表述試樣中目標有機錫含量( 以S n計) 的質量分數按式(1) 計算:X=Afm(1) 式中:X 試樣中目標有機錫含量( 以S n計) , 單位為微克每千克(g/k g) 或微克每升(g/L) ;A 試樣色譜峰與內標色譜峰的峰高比值對應的目標有機錫質量( 以S n計) , 單位為納克(n g) ;f 試樣稀釋因子;m 試樣稱樣量, 單位為克(g) 或毫升(m L) 。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示, 結果保留三位有效數字。7 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的2 0%。8 其他本方法定量限( 以S n計) 為: 二甲基錫0.5g/k g、 三甲基錫1.2g/k g、 一丁基錫1.5g/k g、 二丁基錫0.5g/k g、 三丁基錫0 .6g/k g、 一苯基錫1 .7g/k g、 二苯基錫0.8g/k g、 三苯基錫0.8g/k g。G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 66 附 錄 A有機錫標準溶液的制備 有機錫標準溶液的制備見表A.1。表A.1 有機錫標準溶液的制備組 分貯備溶液的質量濃度g/L中文名稱英文縮寫含有機錫以S n計中間溶液的質量濃度(