NY-T405-2000脫毒大蒜種蒜(苗)病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)程.pdf

B 1 5N丫中華 人 民 共 和 國(guó) 農(nóng) 業(yè) 行 業(yè) 標(biāo) 準(zhǔn)N Y / T 4 0 5 -2 0 0 0脫毒大蒜種蒜( 苗) 病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)程R u l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s - f r e e s e e d ( s e e d l i n g ) g a r l i c2 0 0 0 一 0 9 一 2 2 發(fā)布2 0 0 0 一 1 2 一 0 1 實(shí)施中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā) 布N Y / T 4 0 5 -2 0 0 0前言 為了有效地實(shí)施對(duì)脫毒大蒜種蒜質(zhì)量檢驗(yàn)和管理， 規(guī)范脫毒大蒜種蒜市場(chǎng)， 促進(jìn)大蒜脫毒技術(shù)的推廣， 實(shí)現(xiàn)脫毒大蒜種蒜( 苗) 病毒檢測(cè)的規(guī)范化、 標(biāo)準(zhǔn)化， 特制定本規(guī)程。 本規(guī)程在參照國(guó)內(nèi)外大蒜病毒檢測(cè)技術(shù)最新研究進(jìn)展的基礎(chǔ)上， 結(jié)合當(dāng)前國(guó)內(nèi) 生產(chǎn)實(shí)際， 力 求達(dá)到快速、 準(zhǔn)確、 可操作性強(qiáng)的檢測(cè)要求。檢測(cè)對(duì)象主要選擇生產(chǎn)上發(fā)生分布范圍 廣、 危害性大的 病毒。 檢測(cè)方法主 要采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附 檢測(cè)方法。 本規(guī)程內(nèi)容包括脫毒大蒜種蒜( 苗) 檢測(cè)的適用范圍、 檢測(cè)對(duì)象、 抽樣方法、 檢測(cè)方法和質(zhì)量要求。 本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位: 農(nóng)業(yè)部植物脫毒種苗質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心( 濟(jì)南) 、 山東省植物保護(hù)總站。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人: 李明立、 孫作文、 楊勤民、 劉敬東、 商明清、 盧增全。中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)脫毒大蒜種蒜( 苗) 病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)程N(yùn) Y / T 4 0 5 -2 0 0 0R u l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s - f r e e s e e d ( s e e d l i n g ) g a r l i c1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了脫毒大蒜種蒜( 苗) 的病毒檢測(cè)方法和操作規(guī)程。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于脫毒大蒜種蒜( 苗) 的病毒檢測(cè)。2 引用標(biāo)準(zhǔn) 下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文， 通過在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。本標(biāo)準(zhǔn)出版時(shí)， 所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會(huì)被修訂， 使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的可能性。 N Y / T 4 0 1 -2 0 0 。 脫毒馬鈴薯種薯( 苗) 病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)程3 定義 本標(biāo)準(zhǔn)采用下列定義。3 . 1 脫毒苗 應(yīng)用莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)獲得的再生試管苗， 經(jīng)檢測(cè)確認(rèn)不帶洋蔥黃矮病毒( O Y D V ) 、 大蒜普通潛隱病毒( G C L V ) ， 才確認(rèn)是脫毒苗。3 . 2 脫毒種蒜 從繁殖脫毒苗開始， 經(jīng)逐代繁殖 增加種蒜數(shù)量的種蒜生產(chǎn)體系生產(chǎn)出來的。 分原原種、 原種、 生產(chǎn)用種三個(gè)級(jí)別。3 . 2 . 1 原原種p r e - e l i t e 用脫毒苗在防蟲網(wǎng)室、 溫室條件下生產(chǎn)出的符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的種蒜。3 . 2 . 2 原種e l i t e 用原原種作種蒜， 在良好隔離條件下生產(chǎn)出的符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的種蒜。3 . 2 . 3 生產(chǎn)用種 c e r t i f i e d s e e d 用原種作種蒜， 在隔離條件下生產(chǎn)出的符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的種蒜。3 . 3 病毒病株允許率 脫毒種蒜繁殖田中 病毒病株的允許比 率。4 檢測(cè)對(duì)象 洋蔥黃矮病毒( O n i o n y e l l o w d w a r f v i r u s , O Y D V ) ; 大蒜普通潛隱病毒( G a r l i c c o m m o n l a t e n t v i r u s , G C L V ) ,抽樣組培苗抽樣 脫毒核心材料: 每株必須檢測(cè)。5引51中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部2 0 0 0 一 0 9 一 2 2批準(zhǔn)2 0 0 0 一 1 2 一 0 1 實(shí)施 ;N Y / T 4 0 5 -2 0 0 05 . 1 . 2 擴(kuò)繁苗: 隨機(jī)抽取 1 %-2 %的擴(kuò)繁苗檢測(cè)。5 . 2 田間抽樣5 . 2 . 1 原原種和原種抽樣: 大蒜生長(zhǎng)前、 中、 后期， 在目 測(cè)全田的基礎(chǔ)上， 采用五點(diǎn)取樣法， 抽樣數(shù)量為 一 一、0 . 1 h m ， 以 下2 0 0 株; 。1 1 -1 h m 5 o 0 株; 超出1 h m 面積， 劃出另一檢驗(yàn)區(qū)， 按本規(guī)程規(guī)定面積取樣。每株取葉片 1 一5g ， 低溫保濕存放待檢。5 . 2 . 2 生產(chǎn)用種抽樣: 抽鰲前一周， 在 目測(cè)全田的基礎(chǔ)上， 采用隨機(jī)取樣法， 0 . 1 h m， 以下檢驗(yàn) 2 點(diǎn)， 每點(diǎn) 1 0 0 株; 0 . 1 1 - 1 h m， 檢驗(yàn) 5 點(diǎn)， 每點(diǎn)1 0 0株; 1 . 1 -5 h m 檢驗(yàn) 1 0 點(diǎn)， 每點(diǎn) 1 0 0 株; 超出5 h m 面積， 劃出另一檢驗(yàn)區(qū)， 按本規(guī)程規(guī)定的面積取樣。取樣方法及樣品保存同5 . 2 . 1 ,5 . 3 商品種蒜抽樣 沒有經(jīng)過田間檢驗(yàn)的商品種蒜必須進(jìn)行鱗莖檢驗(yàn)。5 . 3 . 1 根據(jù)種蒜不同存放方式， 采用分層設(shè)點(diǎn)或隨機(jī)取樣的方法， 抽樣數(shù)量見表 1 , 表 1 種蒜抽樣數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)表種蒜總量， k g抽樣百分率， %抽樣最低數(shù)量, k g( 1 0 0 0 06 - 1 01 0 0 1 0 0 0 03 - 5注:不足抽樣最低數(shù)量的全部作為混合樣品。5 . 3 . 2 將第一次抽取的樣品混合后進(jìn)行二次抽樣， 隨機(jī)抽取 1 0 %的混合樣品檢測(cè)。6 檢測(cè)方法雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法( D A S - E