DB33T563-2005水產(chǎn)品中磺胺類殘留量的測(cè)定液相色譜法.doc

DB33/T 2005浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布2005-07-15實(shí)施2005-06-30發(fā)布水產(chǎn)品中磺胺類殘留量的測(cè)定 液相色譜法Determination of sulfonamide residues in aquatic productLiquid ChromatographyDB33/T 5632005DB33浙江省地方標(biāo)準(zhǔn)ICS65.150B50備案號(hào)：1DB33/T 5632005前 言本標(biāo)準(zhǔn)附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省海洋與漁業(yè)局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)檢中心（舟山）。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：鄭斌、陳雪昌、劉士忠、金彩杏、鐘志、劉琴。I水產(chǎn)品中磺胺類殘留量的測(cè)定 液相色譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基異噁唑殘留量的液相色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基異噁唑殘留量的測(cè)定，其它磺胺類藥物的測(cè)定可以參照本標(biāo)準(zhǔn)。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3 原理用乙酸乙酯提取，稀鹽酸反提取，正己烷脫脂，熒光胺衍生，反相色譜柱分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，磺胺 5-甲氧嘧啶為內(nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)法定量。4 試劑4.1 本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑在磺胺類藥物出峰處應(yīng)無干擾峰，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T 6682中一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。4.2 標(biāo)準(zhǔn)品：磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基異噁唑，磺胺 5-甲氧嘧啶，純度均大于98.0%。4.3 丙酮：色譜純。4.4 正己烷：色譜純。4.5 乙酸乙酯：色譜純。4.6 乙腈：色譜純。4.7 甲醇：色譜純。4.8 熒光胺：純度大于99.0%。4.9 乙酸鈉：分析純。4.10 冰乙酸：優(yōu)級(jí)純。4.11 鹽酸溶液：2mol/L，量取180mL鹽酸，加適量水并稀釋至1000mL。4.12 乙酸鈉溶液：3.5mol/L，稱取28.7g無水乙酸鈉溶于蒸餾水中，定容至100mL。4.13 熒光胺溶液：2mg/L，稱取0.03g熒光胺，加15mL丙酮，振搖至完全溶解，存放在暗處?，F(xiàn)配現(xiàn)用。4.14 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：100mg/L，稱取標(biāo)準(zhǔn)品10mg（稱準(zhǔn)至0.1mg），用甲醇溶解并定容至100mL。避光冷藏保存，保存期為一個(gè)月。4.15 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：1mg/L，移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1.00mL，用甲醇稀釋并定容至100mL，在室溫下混勻。4.16 內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液：100mg/L，稱取磺胺5-甲氧嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品10mg（稱準(zhǔn)至0.1mg），用甲醇溶解并定容至100mL。避光冷藏保存，保存期為一個(gè)月。4.17 內(nèi)標(biāo)中間液：1mg/L，移取內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液1.00mL，用甲醇稀釋并定容至100mL，在室溫下混勻。4.18 混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液20L、40L、100L、200L、400L，分別加入內(nèi)標(biāo)中間液100L，用2mol/L鹽酸（4.10）稀釋至2mL，配成濃度分別為0.01mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，其中內(nèi)標(biāo)濃度為0.05mg/L。5 儀器與設(shè)備5.1 液相色譜儀：配熒光檢測(cè)器。5.2 電子天平：感量0.0001g。5.3 電子天平：感量0.01g。5.4 高速組織搗碎機(jī)。5.5 均質(zhì)機(jī)。5.6 離心機(jī)。5.7 旋渦混勻器。5.8 氮吹儀。5.9 往復(fù)式振蕩器。5.10 聚丙烯離心管：15mL、50mL。5.11 容量瓶：10mL、20mL、50mL、100mL、200mL、500mL、1000mL。5.12 玻璃移液管：1mL、2mL、5mL、10mL。5.13 巴斯德吸管。6 色譜條件6.1 色譜柱：ODS-C18，5m，4.6mm250mm，或同類型號(hào)色譜柱。6.2 柱溫：45。6.3 流動(dòng)相：乙腈+乙酸溶液（38+62），500mL水中加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH至3.0配制成乙酸溶液。6.4 流速：1mL/min6.5 進(jìn)樣量：20L。6.6 激發(fā)波長(zhǎng)：405nm。6.7 發(fā)射波長(zhǎng)：495nm。7 步驟分析7.1 樣品制備從原始樣品中取出部分有代表性的樣品，高速組織搗碎機(jī)搗碎。四分法縮分出不少于500g樣品，混勻，均分成兩份。裝入清潔容器，加封，標(biāo)明標(biāo)記。-18以下冷凍保存。7.2 提取將樣品解凍，稱取2.00g，置于50mL聚丙烯離心管，加入磺胺5-甲氧嘧啶標(biāo)準(zhǔn)中間液（4.16）100L，用玻璃棒攪勻，再加乙酸乙酯10mL，均質(zhì)機(jī)14000rpm均質(zhì)1min，往復(fù)式振蕩器振動(dòng)10min，3000rpm離心10min，將乙酸乙酯層小心轉(zhuǎn)移到15mL具塞刻度試管中，40以下氮?dú)獯抵?mL。再向原離心管中加入乙酸乙酯10mL，旋渦混勻30s，振動(dòng)10min，3000rpm離心10min，將乙酸乙酯層小心轉(zhuǎn)移到原15mL具塞刻度試管中，40以下氮?dú)獯抵?mL。然后在試管中加入2.00mL 2mol/L的鹽酸溶液，旋渦混勻1min，加蓋后振動(dòng)10min，3000rpm離心8min，用巴斯德吸管移去乙酸乙酯層，在余液中加入正己烷5mL，旋渦混勻30s，3000rpm離心8min，用巴斯德吸管移去正己烷層，0.45m微孔濾膜過濾，濾液備用。7.3 衍生向樣品瓶中加入200L混合標(biāo)準(zhǔn)使用液或樣品提取液、200L乙酸鈉溶液和80L熒光胺溶液，旋渦混勻30s，20min后供液相色譜分析。7.4 色譜分析取衍生后的樣品提取液20L進(jìn)樣，記錄峰面積，響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間定性，內(nèi)標(biāo)法定量。磺胺類藥物色譜分析圖參見附錄A。7.5 工作曲線稱取空白樣品2.00g，分別添加混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（4.14）20L、40L、100L、200L、400L，樣品中每種磺胺殘留量分別為0.01mg/kg、0.02mg/kg、0.05mg/kg、0.10mg/kg、0.20 mg/kg，按7.2、7.3、7.4操作，以磺胺峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值為縱坐標(biāo)，磺胺含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。8 計(jì)算用色譜數(shù)據(jù)處理軟件或按下式計(jì)算樣品中磺胺殘留量：式中：X樣品中磺胺殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；s樣品溶液中磺胺峰面積，單位為counts；s1樣品溶液中內(nèi)標(biāo)峰面積，單位為counts；S標(biāo)準(zhǔn)溶液中磺胺峰面積，單位為counts；S1標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)峰面積，單位為counts；x加標(biāo)樣品中磺胺殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）。9 方法回收率濃度范圍為0.010mg/kg0.10mg/kg時(shí)，回收率見回收率表。表1 回收率表名稱回收率磺胺嘧啶88.0%111.8%磺胺甲基嘧啶90.0%110.8%磺胺二甲基嘧啶91.0%110.1%磺胺甲基異噁唑107.0%116.7%10 方法檢出限本方法檢出限為0.010mg/k