DNAzol基因組DNA快速提取試劑盒操作方法及步驟說明書

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:/ TRIpure Reagent 抽提指南 目錄號 RP02 使用手冊 實驗室使用，僅用于體外 TRIpure Reagent 抽提指南 目錄號 RP02 使用手冊 實驗室使用，僅用于體外 TRIpure Reagent 抽提指南 目錄號 RP02 使用手冊 實驗室使用，僅用于體外DNAzol 基因組DNA快速提取試劑目錄號：DN26目錄編號包裝單位DN260150mlDN2602100mlv 產(chǎn)品介紹：DNAzol 是一種完全的、可直接使用的基因組DNA提取試劑，簡單高效，結(jié)果可靠，可快速提取基因組DNA，適用于多種大量或少量樣品。DNAzol 可在一個步驟中裂解細(xì)胞并水解RNA，經(jīng)過乙醇沉淀后即可快速得到基因組DNA。整個過程只需10-30 分鐘，DNA 回收率可達70-100，得到的DNA 不需再純化，可直接用于Southern 雜交、斑點雜交、分子克隆、PCR 反應(yīng)和其他分子生物學(xué)應(yīng)用。v 產(chǎn)品儲存：室溫保存至少一年。v 注意事項：DNAzol 有毒害性，應(yīng)避免直接接觸皮膚和眼睛。v 操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）1. 裂解，勻漿a. 組織： 25-50mg 組織加1ml DNAzol ，使用勻漿儀處理5-10 次。少量（5-10mg）柔軟組織，如脾或腦組織，可切成或者搗成小塊使用微量取樣器吹打混勻，室溫放置5-10 分鐘。b. 細(xì)胞：單層培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)直接裂解，倒出培養(yǎng)基，加入DNAzol 用取樣器吹打幾次混勻。每10cm2 細(xì)胞培養(yǎng)板加0.75-1.0ml DNAzol。c. 細(xì)胞沉淀或懸浮液：每1-3107 細(xì)胞（體積小于0.1ml）加1ml DNAzol，反復(fù)吹打混勻。以上均要使用大口徑槍頭吹打，以免過度剪切斷基因組。2. 離心4 -25，10000g 離心10 分鐘。將得到的上清轉(zhuǎn)入新管。此步驟去除組織碎片、部分水解的RNA和多糖。如果所提樣品為含較多細(xì)胞和細(xì)胞外物質(zhì)的樣品，如肝、肌肉和大部分植物組織等，或要提取不含RNA 的DNA 時，可加此步驟。其他樣品可省略此步。3. 沉淀每使用1ml DNAzol 加0.5ml 100%乙醇，顛倒離心管5-8 次，混勻樣品至出現(xiàn)DNA沉淀，室溫放置1-3分鐘?？梢钥匆奃NA 絮狀沉淀，讓沉淀自然沉降到管底，盡可能吸棄上清。用槍頭攪?yán)@DNA貼附在離心管上端壁上，仔細(xì)吸棄剩下的在管底和管壁的上清。如果因為剪切太厲害導(dǎo)致形成小片段或者量少的DNA(少于15ug)，無法纏繞到槍頭上，可在4 -25，4000g 離心1-2分鐘沉淀DNA，棄上清。4. 漂洗用0.8-1ml 75乙醇漂洗DNA 兩次。漂洗時，將DNA 懸浮在乙醇中，顛倒離心管3-6 次，然后靜置0.5-1 分鐘使DNA 沉降到管底，盡可能吸棄上清。如果需要，可在4 -25，1000g 離心1-2 分鐘沉淀DNA。從組織中提取DNA 時，如需去除其他內(nèi)含物，第一次漂洗可用70DNAzol 和30乙醇的溶液代替75乙醇。5. 溶解用槍吸去殘余的乙醇，晾干幾秒鐘后立刻用8mM NaOH溶解DNA（DNA暴露于空氣幾秒鐘都會大大加大溶解難度，因此乙醇晾后立刻溶解）。可將沉淀吸到大口徑槍頭中緩慢通過數(shù)次來幫助溶解。TE緩沖液和水溶解效果不完全，因此建議用堿溶液，可更快速且徹底的溶解。通常，從107 細(xì)胞或10-20mg 動物組織中提取的DNA 可用0.2-0.3ml 8mM NaOH溶解，使DNA濃度約為0.2-0.3ug/ul。如果從植物、肝臟、肌肉等富含糖原的材料提取DNA，最后可能會有一些殘留物（多糖）無法溶解，可以用12,000Xg離心10分鐘去除。8mM NaOH容易被空氣氧化，應(yīng)該用不超過6個月的2-4mol的NaOH儲存液，每月配制一次。 6. 結(jié)果檢測以8mM NaOH溶液溶解的DNA（用DNAzol提取的DNA在Tris緩沖液中溶解效果不好）在紫外分光光度計檢測A260/A280，A260 為1 相當(dāng)于5