生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)記錄和實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)

第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)記錄和實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)正確記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程及書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告，是訓(xùn)練學(xué)生進(jìn)行正規(guī)實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練的重要內(nèi)容。實(shí)驗(yàn)是在理論指導(dǎo)下的科學(xué)實(shí)踐，目的在于經(jīng)過(guò)實(shí)踐，掌握科學(xué)觀察的基本方法和技能，培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)思維、分析判斷和解決實(shí)際問(wèn)題的能力。也是培養(yǎng)探求真知、尊重科學(xué)事實(shí)和真理的學(xué)風(fēng)，以及培養(yǎng)科學(xué)態(tài)度的重要環(huán)節(jié)。為此，要求學(xué)生在實(shí)驗(yàn)前必須預(yù)習(xí)、理解從基本原理和實(shí)驗(yàn)基本操作步驟、注意事項(xiàng)，列出所需試劑和儀器，實(shí)驗(yàn)中組織安排好時(shí)間，嚴(yán)肅認(rèn)真地執(zhí)行操作，細(xì)致觀察變化，如實(shí)作好記錄、書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告等。一、實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)記錄要整潔、字跡清楚。實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象、結(jié)果和數(shù)據(jù)，耍及時(shí)地直接記在記錄本。原始記錄必須準(zhǔn)確簡(jiǎn)練、詳盡、清楚。記錄時(shí)，應(yīng)做到如實(shí)正確記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，不可夾雜主觀因素。在實(shí)驗(yàn)條件下觀察到的現(xiàn)象，也應(yīng)如實(shí)仔細(xì)地記錄下來(lái)。在定量實(shí)驗(yàn)中觀測(cè)到的數(shù)據(jù)，如稱(chēng)量物的重量、滴定管的讀數(shù)、光電比色計(jì)的光密度值等，都應(yīng)設(shè)計(jì)一定的表格準(zhǔn)確記錄。并應(yīng)根據(jù)儀器的精確度準(zhǔn)確記錄有效數(shù)字。要求對(duì)實(shí)驗(yàn)的每個(gè)結(jié)果都應(yīng)正確無(wú)遺漏地做好記錄。實(shí)驗(yàn)中使用儀器的類(lèi)型、試劑的規(guī)格、化學(xué)反應(yīng)式、分子量、濃度等，都應(yīng)記錄清楚。實(shí)踐過(guò)程中，應(yīng)一絲不茍，努力培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)。完整的實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)包括日期、實(shí)驗(yàn)題目、目的、操作、結(jié)果。二、實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)整理和總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及記錄，寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。實(shí)驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括實(shí)驗(yàn)名稱(chēng)、實(shí)驗(yàn)日期、目的要求、原理、試劑配制、儀器設(shè)備、操作方法；實(shí)驗(yàn)結(jié)果、討論等項(xiàng)內(nèi)容。書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告時(shí)，目的和要求、原理以及操作方法部分應(yīng)作簡(jiǎn)單扼要的敘述，但對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)必須寫(xiě)清楚。對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果部分，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求，把所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、歸納、分析和對(duì)比，并盡量總結(jié)成各種圖表，如標(biāo)準(zhǔn)曲線圖以及實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較表等。還應(yīng)針對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行必要的說(shuō)明和分析。討論部分不是對(duì)結(jié)果的重述，而是對(duì)實(shí)驗(yàn)方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果和異?，F(xiàn)象進(jìn)行探討和評(píng)論，以及對(duì)于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的認(rèn)識(shí)、體會(huì)和建議。一般實(shí)驗(yàn)，要有結(jié)論，結(jié)論要簡(jiǎn)要扼要，說(shuō)明本次實(shí)驗(yàn)所獲得的結(jié)果。1. 實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)包括哪些內(nèi)容？2. 玻璃儀器的清洗有哪些基本要求？3. 請(qǐng)分別敘述分光光度技術(shù)、層析技術(shù)、電泳技術(shù)原理、及實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)4. 血液樣品、尿液樣品及組織樣品制備的常用方法有哪些？實(shí)驗(yàn)八 血清乳酸含量的測(cè)定（乳酸脫氫酶法）實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆昭迦樗岷繙y(cè)定的原理，了解血清乳酸測(cè)定的常用方法。實(shí)驗(yàn)原理乳酸脫氫酶（LD）在輔酶I(NAD)存在下將乳酸氧化成丙酮酸，同時(shí)伴有NAD轉(zhuǎn)化成還原型輔酶I（NADH），其反應(yīng)式如下：L乳酸NAD丙酮酸NADHH在pH值為9.8時(shí)，平衡偏向乳酸氧化為丙酮酸一方。加入肼或氨基脲與丙酮酸生成產(chǎn)物而使丙酮酸不斷被除去，使反應(yīng)進(jìn)一步向右移動(dòng)，從而驅(qū)動(dòng)反應(yīng)完成。通過(guò)分光光度法（340nm）或熒光法測(cè)定NADH的生成量來(lái)測(cè)得樣本中乳酸得量。NADH吸光度的升高速率與樣品中乳酸濃度成正比，故用連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定乳酸濃度。實(shí)驗(yàn)器材1. 分光光度計(jì)2. 試管3. 移液管4. 恒溫水浴箱5. 注射器6. 離心機(jī)實(shí)驗(yàn)試劑1. TrisEDTA肼緩沖液 將三羥甲基氨基甲烷（Tris）60.5g和乙二胺四乙酸（EDTA）4g溶解于800ml水中，加水合肼11ml，調(diào)pH值到9.8，再定容到1000ml。4保存。2. 0.1mmol/L輔酶I 稱(chēng)輔酶I65.4mg，加塞保存于20。用前加3ml水溶解。3. 乳酸脫氫酶 純化的乳酸脫氫酶硫酸銨懸液，比活力約為550u/mg。4. 應(yīng)用基質(zhì)液 取緩沖液27ml，輔酶I液3ml，乳酸脫氫酶液40ul混勻。4可穩(wěn)定24h.5. 20mmol/L乳酸儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)液 稱(chēng)取乳酸鋰192mg溶于100ml水中，4可穩(wěn)定6個(gè)月。6. 乳酸應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液 分別取20mmol/L乳酸儲(chǔ)存液1.0和2.5ml，各用水在10ml容量瓶中定容至10ml，其濃度分別為2和5mmol/L.4下可穩(wěn)定2個(gè)月。實(shí)驗(yàn)步驟1. 標(biāo)本采集：為了避免血液乳酸在采血時(shí)發(fā)生變化，受試者應(yīng)處于空腹休息狀態(tài)，最好不用止血帶以防止前臂缺氧而致乳酸含量增加。進(jìn)針后不立即采血，等幾分鐘后再采血，然后放入預(yù)置有碘乙酸鈉的標(biāo)本管中，碘乙酸鈉的最終濃度為0.05。待凝固后分離血清。2. 取10X100cm小試管3只，分別寫(xiě)清測(cè)定管，標(biāo)準(zhǔn)管和空白管，然后按下表進(jìn)行操作。表中所用試劑適合于自動(dòng)化儀器操作，如用手工法而又無(wú)小比色皿可適當(dāng)放大標(biāo)本及試劑量。血清乳酸脫氫酶法測(cè)定乳酸操作表（單位：ml）測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清樣本0.02乳酸應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液0.02重蒸餾水0.02應(yīng)用基質(zhì)1.01.01.0立即混勻，37保溫5min，于340nm用空白管調(diào)零，測(cè)定各管吸光度變化速率。結(jié)果分析血清中乳酸量X標(biāo)準(zhǔn)管乳酸濃度（mmoml/L）安靜狀態(tài)下，健康人靜脈血內(nèi)乳酸含量為0.52.2mmoml/L，動(dòng)脈血乳酸水平低于靜脈血。餐后比基礎(chǔ)水平高2050。腦脊液乳酸水平預(yù)血乳酸水平無(wú)關(guān)，16歲以下兒童得腦脊液乳酸水平為1.12.8mmoml/L乳酸是糖酵解的最終產(chǎn)物，在生理?xiàng)l件下，大多數(shù)組織以有氧氧化為主，但少數(shù)組織如皮膚，視網(wǎng)膜，腎髓質(zhì)和血細(xì)胞等組織在有氧時(shí)也能進(jìn)行糖酵解，其中以皮膚的糖酵解速度最快。成熟的紅細(xì)胞僅靠糖酵解獲得能量。在病理情況下，如嚴(yán)重貧血、大量出血、呼吸障礙及心血管疾患等所引起的機(jī)體缺氧時(shí)，致使糖酵解過(guò)度，造成乳酸生成過(guò)多，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生乳酸酸中毒。運(yùn)動(dòng)時(shí)乳酸主要在骨骼肌中生成，然后透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入血液。在正常情況下，乳酸在生成和消除處于動(dòng)態(tài)平衡中，血乳酸濃度為1-2mmol/L，運(yùn)動(dòng)員血乳酸安靜值與常人無(wú)差異，但是在賽前情緒緊張時(shí)，血乳酸濃度安靜值有可能升高到3mmol/L左右，這與腎上腺分泌增多有關(guān)。運(yùn)動(dòng)時(shí)血乳酸濃度上升，上升的起始運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度約在50%-60%VO2max，耐力運(yùn)動(dòng)員由于有氧代謝能力強(qiáng)，升高的起始強(qiáng)度推遲到60%-70%VO2max。運(yùn)動(dòng)時(shí)血乳酸濃度的變化與運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度有關(guān)。劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)，肌肉內(nèi)糖的無(wú)氧分解加強(qiáng)，血乳酸濃度顯著升高。運(yùn)動(dòng)時(shí)血乳酸濃度的變化與所動(dòng)用的能量系統(tǒng)有關(guān)。以磷酸原系統(tǒng)供能為主的運(yùn)動(dòng)，血乳酸生成量較少，血乳酸一般不超過(guò)4mmol/L；以糖酵解系統(tǒng)供能為主的運(yùn)動(dòng)，血乳酸可達(dá)15mmol/L 以上；而以有氧氧化系統(tǒng)供能為主的運(yùn)動(dòng)，血乳酸在4mmol/L左右。速度耐力性運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目的高水平運(yùn)動(dòng)員，運(yùn)動(dòng)成績(jī)好者，運(yùn)動(dòng)后血乳酸最大濃度值也高；耐力性運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目的運(yùn)動(dòng)員，在完成相同亞極量運(yùn)動(dòng)負(fù)荷時(shí)，優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)后血乳酸相對(duì)較低。根據(jù)這一特點(diǎn)可用以評(píng)定運(yùn)動(dòng)員訓(xùn)練水平或選材。可根據(jù)運(yùn)動(dòng)后血乳酸的消除速率來(lái)評(píng)定運(yùn)動(dòng)員有氧代謝能力，若恢復(fù)速度快，表示有氧代謝能力強(qiáng)。所以用測(cè)定血乳酸含量變化作為評(píng)定機(jī)體有氧化代謝和無(wú)氧代謝能力以及訓(xùn)練手段、方法的重要指標(biāo)。注意事項(xiàng)血乳酸測(cè)定時(shí)取樣時(shí)間非常重要，安靜值應(yīng)在早晨起床前安靜時(shí)采樣；運(yùn)動(dòng)后血乳酸的測(cè)定應(yīng)根據(jù)不