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專題十一 生物技術(shù)實(shí)踐專題突破練1白色污染屬于全球性的環(huán)境問題,為了治理白色污染,我國科學(xué)院研究團(tuán)隊(duì)首次發(fā)現(xiàn)了能夠高效降解聚氨酯(PU)塑料的新菌種,并把該菌種命名為塔賓曲霉菌,在塔賓曲霉菌的作用下,兩周就可見塑料生物降解過程,兩個(gè)月后其培養(yǎng)基上的塑料聚合物基本消失。這項(xiàng)成果為土壤污染處理和生態(tài)修復(fù)提供了新的線索,也為處理塑料垃圾開辟了新途徑。請回答下列問題:(1)在進(jìn)行微生物的培養(yǎng)時(shí)需要用到培養(yǎng)基,若要對該菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),需要使用_培養(yǎng)基;若要分離、純化該菌種,需要使用_培養(yǎng)基;若要篩選該菌種,則需要使用以_為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。(2)若要測定樣品溶液中該菌種的數(shù)目,可將100 mL含該菌種的樣品溶液稀釋104倍后,取0.1 mL稀釋液均勻涂布在選擇培養(yǎng)基表面,測得菌落數(shù)的平均值為240個(gè),且空白對照組平板上未出現(xiàn)菌落,則100 mL原菌液中含有塔賓曲霉菌_個(gè)。與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比,試分析該方法的優(yōu)缺點(diǎn):_(優(yōu)缺點(diǎn)各答一個(gè))。(3)請你結(jié)合該菌株的特性對處理塑料垃圾給出一條合理建議:_。答案(1)液體固體聚氨酯(PU)塑料(2)2.4109優(yōu)點(diǎn):能夠只計(jì)數(shù)活菌數(shù)目;缺點(diǎn):統(tǒng)計(jì)的活菌數(shù)目往往比實(shí)際數(shù)目低(3)在垃圾填埋場噴灑塔賓曲霉菌菌液解析(1)液體培養(yǎng)基具有可以進(jìn)行通氣培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn)。在通氣或在振蕩的條件下可增加供氧量,增加微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收,有利于細(xì)胞生長,提高微生物數(shù)量。因此若要對該菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),需要使用液體培養(yǎng)基;分離純化微生物需要使用固體培養(yǎng)基;若要篩選該菌種,則需要使用以聚氨酯(PU)塑料為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。(2)每毫升(mL)樣品中的菌株數(shù)(CV)M,其中,C表示某稀釋度下的平板上生長的平均菌落數(shù),V表示涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積,M表示稀釋倍數(shù)。把數(shù)據(jù)代入此公式可求出每毫升樣品中的菌株數(shù),即每毫升樣品中的菌株數(shù)(CV)M2400.11042.4107,因此100 mL原菌液中含有塔賓曲霉菌2.41071002.4109個(gè)。與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比,其優(yōu)點(diǎn)是能夠只計(jì)數(shù)活菌數(shù)目;缺點(diǎn)是統(tǒng)計(jì)的活菌數(shù)目往往比實(shí)際數(shù)目低。(3)結(jié)合該菌株的特性對處理塑料垃圾的建議:由于塔賓曲霉菌能夠降解塑料,因此可以在垃圾填埋場噴灑塔賓曲霉菌菌液,以便于其能降解塑料,減少白色污染。2酸奶是牛奶、羊奶或馬奶經(jīng)過發(fā)酵制成的一種食品,其發(fā)酵原理與泡菜制作非常相似。為了研究影響酸奶發(fā)酵效果的因素,某小組在A、B兩容器中加入一定量的鮮牛奶,將等量的甲、乙兩菌種(都能產(chǎn)生乳酸)分別接入其中并混勻,密封后再將兩者置于適宜條件下進(jìn)行發(fā)酵,并在6 h內(nèi)定期取樣觀測發(fā)酵效果?;卮鹣铝袉栴}:(1)制作酸奶和泡菜與制作果酒相比,相同點(diǎn)是_。上述實(shí)驗(yàn)過程中可能會影響酸奶品質(zhì)的操作是_,為什么?_。(2)在家庭制作葡萄酒時(shí),容器瓶的蓋子選下列哪種?_(填“有螺旋可旋轉(zhuǎn)的”或“密封不可開啟的”),為什么?_。(3)在制作酸奶時(shí),人們還會在鮮奶中加一定量的蔗糖,其原理是_。發(fā)現(xiàn)6 h內(nèi)的酸奶發(fā)酵效果越來越好,無法確定發(fā)酵的最佳時(shí)間。若要確定最佳發(fā)酵時(shí)間,可以_。有人提供的自制酸奶信息表明:酸奶制作時(shí)間可長可短,有的季節(jié)23小時(shí)即可,有的季節(jié)需要1012小時(shí)。影響發(fā)酵效果的非生物因素可能是_。答案(1)都是利用微生物在無氧條件下進(jìn)行無氧呼吸定期取樣觀測發(fā)酵效果因?yàn)榇蜷_瓶蓋取樣,可能會造成雜菌污染(2)有螺旋可旋轉(zhuǎn)的因?yàn)榫凭l(fā)酵會產(chǎn)生較多的二氧化碳,有螺旋可旋轉(zhuǎn)的瓶蓋擰松可排出二氧化碳?xì)怏w,有利于發(fā)酵的持續(xù)進(jìn)行(3)為乳酸菌提供乳酸發(fā)酵所需的原料,改善口感延長發(fā)酵時(shí)間,觀測發(fā)酵效果以找到最好的發(fā)酵效果所對應(yīng)的時(shí)間溫度解析(1) 酸奶可用多種鮮奶制作,和泡菜制作的原理一樣,都是乳酸發(fā)酵,即都是利用微生物在無氧條件下進(jìn)行無氧呼吸。制作酸奶的過程中,定期取樣觀測發(fā)酵效果須在無菌條件下進(jìn)行(或進(jìn)行無菌操作)。打開瓶蓋取樣時(shí),外界空氣進(jìn)入發(fā)酵液,有可能會造成雜菌污染,進(jìn)而影響酸奶品質(zhì)。(2)制作果酒的原理是酵母菌的酒精發(fā)酵,即在無氧條件下將葡萄糖分解為酒精和CO2;在果酒發(fā)酵過程中產(chǎn)生較多的二氧化碳需及時(shí)排出,才有利于發(fā)酵的持續(xù)進(jìn)行??梢?,在家庭制作葡萄酒時(shí),容器瓶的蓋子應(yīng)選擇有螺旋可旋轉(zhuǎn)的,其原因在于:有螺旋可旋轉(zhuǎn)的瓶蓋擰松可排出二氧化碳?xì)怏w,有利于發(fā)酵的持續(xù)進(jìn)行。(3)在制作酸奶時(shí),人們在鮮奶中加一定量的蔗糖,一方面是為乳酸菌提供乳酸發(fā)酵所需的原料,另一方面是改善口感。要確定酸奶發(fā)酵的最佳時(shí)間,可以延長發(fā)酵時(shí)間,觀測發(fā)酵效果,找到最好的發(fā)酵效果所對應(yīng)的時(shí)間。依題意可知:不同的季節(jié),酸奶制作的時(shí)間不同,說明影響發(fā)酵效果的非生物因素可能是溫度。3豆豉是大豆經(jīng)過發(fā)酵制成的一種食品。為了研究影響豆豉發(fā)酵效果的因素,某小組將等量的甲、乙兩菌種分別接入等量的A、B兩桶煮熟大豆中并混勻,再將兩者置于適宜條件下進(jìn)行發(fā)酵,并在32 h內(nèi)定期取樣觀測發(fā)酵效果?;卮鹣铝袉栴}:(1)該實(shí)驗(yàn)的自變量是_、_。(2)若發(fā)酵菌為好氧菌,則發(fā)酵容器內(nèi)_(填“上層”“中層”或“下層”)大豆的發(fā)酵效果比較好。(3)32 h內(nèi)的發(fā)酵效果越來越好,且隨發(fā)酵時(shí)間的延長直線上升。為確定最佳發(fā)酵時(shí)間,需要_發(fā)酵時(shí)間,觀測發(fā)酵效果,發(fā)酵效果_時(shí)對應(yīng)的時(shí)間即為最佳發(fā)酵時(shí)間。(4)從大豆到豆豉的過程中,大豆中的成分會發(fā)生類似腐乳制作過程中的變化,即蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)開,脂肪轉(zhuǎn)變?yōu)開,直接原因是發(fā)酵菌產(chǎn)生了_。答案(1)菌種發(fā)酵時(shí)間(2)上層(3)延長最好(4)氨基酸和多肽脂肪酸和甘油蛋白酶和脂肪酶解析(1)由題干信息可知,導(dǎo)致發(fā)酵效果不同的因素包括:兩桶中的不同菌種及每桶發(fā)酵的時(shí)間差異,即該實(shí)驗(yàn)的自變量是菌種和發(fā)酵時(shí)間。(2)好氧菌在氧氣充足的條件下發(fā)酵較好。若發(fā)酵菌為好氧菌,因發(fā)酵容器的上層氧氣較為充足,所以發(fā)酵容器內(nèi)上層大豆的發(fā)酵效果比較好。(3)由于32 h內(nèi)的發(fā)酵效果越來越好,且隨發(fā)酵時(shí)間的延長直線上升,因此,不能據(jù)此得出最佳發(fā)酵時(shí)間。若要得出最佳的發(fā)酵時(shí)間,則需要延長發(fā)酵時(shí)間,觀測發(fā)酵效果,發(fā)酵效果最好時(shí)對應(yīng)的時(shí)間即為最佳發(fā)酵時(shí)間。(4)腐乳制作過程中,蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)榘被岷投嚯?,脂肪轉(zhuǎn)變?yōu)楦视秃椭舅?,直接原因是發(fā)酵菌產(chǎn)生了蛋白酶和脂肪酶。4泡菜是我國傳統(tǒng)發(fā)酵食品之一,回答下列與泡菜制作相關(guān)的問題:(1)制作泡菜時(shí),乳酸菌發(fā)酵第一階段的產(chǎn)物有_。(2)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液分離純化乳酸菌時(shí),需用_對泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋,進(jìn)行梯度稀釋的理由是_。測定乳酸菌活菌數(shù)目通常用的接種方法是_。(3)下圖為乳酸菌的數(shù)量、乳酸的含量、亞硝酸鹽的含量隨時(shí)間變化的曲線,三幅圖的縱軸表示的含義依次為_、_、_。(4)研究發(fā)現(xiàn),第810天的泡菜,酸爽可口,更適于食用,原因是_。答案(1)丙酮酸和H(2)無菌水泡菜濾液中菌的濃度很高,直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落稀釋涂布平板法(3)乳酸菌的數(shù)量亞硝酸鹽的含量乳酸的含量(4)乳酸菌發(fā)酵不斷產(chǎn)生乳酸,pH值下降,使泡菜酸爽可口;亞硝酸鹽含量較低,更適于食用解析(1)制作泡菜時(shí),乳酸菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生乳酸。乳酸菌發(fā)酵第一階段的產(chǎn)物有丙酮酸和H。(2)由于泡菜濾液中菌的濃度很高,直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落,所以欲從泡菜濾液中分離純化乳酸菌時(shí),需用無菌水對泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋。測定乳酸菌活菌數(shù)目通常用的接種方法是稀釋涂布平板法。(3)在發(fā)酵初期,先有需氧菌活動,當(dāng)產(chǎn)生厭氧環(huán)境時(shí),乳酸菌才開始活動,乳酸菌和乳酸的量較小,由于硝酸鹽還原菌的活動,亞硝酸鹽的含量有所增加;發(fā)酵中期,由于乳酸菌產(chǎn)生大量乳酸,其他菌的活動受到抑制,此時(shí)乳酸菌數(shù)量達(dá)到高峰,乳酸的量繼續(xù)積累,由于硝酸鹽還原菌的活動受到抑制,同時(shí)形成的亞硝酸鹽又被分解,因而亞硝酸鹽含量下降;發(fā)酵后期,由于乳酸的積累,酸度繼續(xù)加大,乳酸菌的活動開始受到抑制,乳酸菌數(shù)量下降,乳酸的量繼續(xù)積累,硝酸鹽還原菌的活動完全被抑制。因此,三幅圖的縱軸表示的含義依次為乳酸菌的數(shù)量、亞硝酸鹽的含量、乳酸的含量。(4)第810天的泡菜,酸爽可口,更適于食用的原因是乳酸菌發(fā)酵不斷產(chǎn)生乳酸,pH值下降,使泡菜酸爽可口;亞硝酸鹽含量較低,更適于食用。5長春花植物中含有復(fù)雜的生物堿,其中長春花堿是目前應(yīng)用最廣泛的天然植物抗腫瘤藥物之一,提取方法如下:長春花干燥粉碎纖維素酶處理加入pH為4.0的酸中恒溫水浴加堿調(diào)pH至8.0四氯化碳萃取?;卮鹣铝袉栴}:(1)長春花干燥粉碎后再用纖維素酶處理的原因是_。(2)纖維素酶是一類復(fù)合酶,實(shí)驗(yàn)室常用_法鑒別微生物是否產(chǎn)生纖維素酶。(3)長春花堿微溶于水,易溶于酸中,由此推測,后續(xù)提取加堿的目的是_。(4)四氯化碳的沸點(diǎn)為76.8 ,長春花堿的沸點(diǎn)為211216 ,由此推測,四氯化碳萃取后,除去四氯化碳獲得純凈的長春花堿的方法是_。(5)本實(shí)驗(yàn)中纖維素酶在不同pH和溫度處理后,提取得到的長春花堿含量如圖所示,a、b、c曲線最大值對應(yīng)的溫度均為50 ,原因是_;從酶的功能特性考慮,為了提取更多的長春花堿,需要提供的條件是_(至少回答出3點(diǎn))。答案(1)增大纖維素與纖維素酶的接觸面積,提高纖維素的降解率(2)剛果紅染色(3)讓溶解于酸中的長春花堿析出(4)加熱至76.8211 之間的某溫度,蒸發(fā)除去四氯化碳(5)在不同pH條件下,纖維素酶的最適溫度均為50 ,該溫度下纖維素酶活性最高,提取的長春花堿含量最多適宜的溫度、pH和纖維素酶用量解析(1)長春花為植物,其細(xì)胞存在由纖維素組成的細(xì)胞壁,長春花干燥粉碎后再用纖維素酶處理,可以增大纖維素與纖維素酶的接觸面積,提高纖維素的降解率。(2)纖維素酶是一類復(fù)合酶,實(shí)驗(yàn)室常用剛果紅染色法鑒別微生物是否產(chǎn)生纖維素酶。(3)由于長春花堿微溶于水,易溶于酸中,后續(xù)提取加堿可以讓溶解于酸中的長春花堿析出。(4)由于四氯化碳的沸點(diǎn)為76.8 ,長春花堿的沸點(diǎn)為211216 ,四氯化碳萃取后,可利用兩者之間的熔沸點(diǎn)區(qū)別,即加熱至76.8211 之間的某溫度,蒸發(fā)除去四氯化碳,即可獲得純凈的長春花堿。(5)本實(shí)驗(yàn)中纖維素酶在不同pH和溫度處理后,三條曲線最大值對應(yīng)的溫度均為50 ,說明在不同pH條件下,纖維素酶的最適溫度均為50 。在該溫度下纖維素酶活性最高,提取的長春花堿含量最多。長春花植物中含有復(fù)雜的生物堿,提取長春花堿需要用到纖維素酶,從酶的功能特性考慮,為了提取更多的長春花堿,需要提供適宜的纖維素酶用量。又由于溫度與pH會影響到酶的活性,因此還需提供適宜的溫度和pH。6提取植物有效成分時(shí),不同的有機(jī)物具有不同的理化特性,所采用的提取方法也不同。分析下列提取植物有效成分的實(shí)驗(yàn),回答相關(guān)問題:(1)薔薇花精油是由薔薇花提煉而成??梢郧鍩峤舛?,清潔皮膚,還能凈化心靈。下面是某同學(xué)設(shè)計(jì)的提取薔薇花精油的實(shí)驗(yàn)流程:圖中的A表示_過程,加入的甲物質(zhì)是_,乙物質(zhì)是_。B過程的目的是_。(2)提取檸檬精油時(shí),不用上述提取薔薇花精油的方法,原因是_。為了提高出油率,需將檸檬皮干燥去水,并用_浸泡。(3)胡蘿卜素化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定,易溶于有機(jī)溶劑,可采用萃取法提取。萃取時(shí)選擇的有機(jī)溶劑應(yīng)具有的特點(diǎn)是_(答出三點(diǎn)即可)。(4)提取胡蘿卜素的萃取裝置要在加熱瓶口安裝回流冷凝裝置,其目的是_。答案(1)水蒸氣蒸餾NaCl無水Na2SO4除去無水Na2SO4(2)水中蒸餾會導(dǎo)致原料焦糊和有效成分水解等問題石灰水(3)具有較高的沸點(diǎn)、能夠充分溶解胡蘿卜素、不與水混溶(4)防止加熱時(shí)有機(jī)溶劑揮發(fā)解析(1)分析“提取薔薇花精油的實(shí)驗(yàn)流程”圖可知:A表示水蒸氣蒸餾過程,加入的甲物質(zhì)
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