5畢業(yè)論文外文翻譯

溫州大學(xué)本科畢業(yè)論文 樂(lè)清野生種群泥螺同工酶的生化遺傳分析農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào) Journal of Agricultural Biotechnology 2007,15 (2): 242246泥蚶能量代謝相關(guān)的同工酶的分析蘇秀榕1 呂振明1 李太武1 劉志明2 錢 錕3（1.寧波大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院，寧波315211；2.美國(guó)東新墨西哥大學(xué)生物學(xué)系，帕特魯斯88130；3. 美國(guó)舊金山大學(xué)生物學(xué)系，舊金山23430）摘要：利用聚丙烯酰胺凝膠電泳分析了泥蚶（Tegillarca granosa）能量代謝相關(guān)的10 種同工酶。酯酶和-淀粉酶是同能量吸收有關(guān)的酶，主要分布于消化腺里。蘋果酸脫氫酶、蘋果酸酶、異檸檬酸脫氫酶、琥珀酸脫氫酶、醇脫氫酶、乳酸脫氫酶、6- 磷酸葡萄糖脫氫酶和三磷酸腺苷激酶是與能量代謝相關(guān)的酶。泥蚶的能量供應(yīng)有3種途徑：有氧呼吸、無(wú)氧酵解和磷酸戊糖途徑。從泥蚶體內(nèi)含有很高活性的6-磷酸葡萄糖脫氫酶可知，磷酸戊糖途徑是泥蚶糖代謝的主要途徑，NADP為供能體。同其它貝類相比，泥蚶的三磷酸腺苷激酶的活性很低，這與它們的埋棲生活不活躍運(yùn)動(dòng)的習(xí)性是一致的。關(guān)鍵詞：泥蚶；能量代謝；同工酶中圖分類號(hào)：S185 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1304（2007）02-0242-05有3類與能量代謝有關(guān)的酶，它們分別參與有氧呼吸、無(wú)氧酵解和磷酸戊糖途徑。泥蚶，亦稱血蚶和蚶子，屬于蚶科，泥蚶屬，瓣鰓類，是中國(guó)四大傳統(tǒng)水產(chǎn)養(yǎng)殖貝類之一（Wang et al.,1993）。泥蚶含豐富的蛋白質(zhì)和維生素B12，口感良好，故大規(guī)模養(yǎng)殖于我國(guó)沿海地區(qū)。近年來(lái)，隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖面積的增加和農(nóng)業(yè)的大規(guī)模發(fā)展，在沿海區(qū)域出現(xiàn)了一些泥蚶疾病，造成泥蚶產(chǎn)量大幅度減少（Li et al., 2003）。造成這種現(xiàn)象的可能原因，除了海洋環(huán)境的惡化及蚶科種質(zhì)資源的退化外，能量代謝的失衡也是一主要原因。因此，應(yīng)持續(xù)發(fā)展農(nóng)業(yè)和人工繁育技術(shù)，進(jìn)一步改善海洋的生態(tài)環(huán)境和泥蚶的遺傳質(zhì)量，也有必要去探索海洋生物的生物能學(xué)，這將幫助我們研究這種生物的能量代謝問(wèn)題。曾采用同工酶電泳技術(shù)對(duì)馬來(lái)西亞半島的6個(gè)地理種群的蝸牛進(jìn)行了研究（Choh et al., 2006）。共研究了25種定居于沿海的蝸牛（軟體動(dòng)物門，腹足類）的4個(gè)高度多態(tài)性的同工酶位點(diǎn)（無(wú)機(jī)焦磷酸酶，肽酶及兩個(gè)酯酶基因）（Mollusca, Gastropoda）(Zasavskaya and Pudovkin, 2005)。本文則采用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)對(duì)分布于各個(gè)組織的參與泥蚶生理活動(dòng)及能量代謝的同工酶進(jìn)行研究。本研究的最終目的就是為了探索該物種是如何進(jìn)行能量吸收、能量分布和能量代謝的。1 材料與方法1.1 材料采集由浙江省海水養(yǎng)殖研究所提供常見的泥蚶樣品，將活體運(yùn)回到實(shí)驗(yàn)室后立即對(duì)其進(jìn)行解剖并分別取出外套膜、閉殼肌、鰓、足和消化腺等5種組織，分裝并保存于-70冰箱中備用。1.2 樣品制備對(duì)上述5種內(nèi)臟器官分別進(jìn)行精確稱量。用蒸餾水清洗后，放入玻璃勻漿器，按1:3比例加入0.05巰基乙醇為勻漿緩沖液，在冰浴中勻漿。于4，12000轉(zhuǎn)/分離心30min。取上清液貯存于-70冰箱（Li et al., 2002）。1.3 電泳采用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)（Hu and wang, 1985）分析組織中的同工酶。對(duì)電泳后的膠片染色并保存于7.5醋酸。將凝膠置于凝膠電泳圖像分析系統(tǒng)中進(jìn)行分析。1.4 同工酶的命名同工酶帶按從負(fù)極到正極的方向進(jìn)行命名（Wang, 1996）。2 結(jié)果2.1 有關(guān)能量吸收的同工酶的表達(dá)2.1.1 酯酶見圖1-A，泥蚶的酯酶（EST）同工酶結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，其在幾乎所有被測(cè)定的組織中都有很高的活性，尤其是在消化腺。這種高活性的酯酶可能與消化腺的生理功能有關(guān)。2.1.2 -淀粉酶見圖1-B，泥蚶的-淀粉酶（-AMY）同工酶在消化腺中有很高的活性，但在其他組織中沒有發(fā)現(xiàn)該酶的活性。-淀粉酶的分布是與消化腺的生理功能相一致的。2.2 同工酶表達(dá)與能量代謝2.2.1 蘋果酸脫氫酶圖2所示的是蘋果酸脫氫酶（MDH）同工酶在泥蚶不同組織中的表達(dá)情況?？傮w而言，蘋果酸脫氫酶的活性在5個(gè)組織中均較高，但經(jīng)更仔細(xì)的觀察可知，蘋果酸脫氫酶在消化腺、閉殼肌和足等組織中的活性相對(duì)更高，而在其它兩個(gè)組織中表現(xiàn)出相對(duì)較低的活性。2.2.2 蘋果酸酶圖3所示的是蘋果酸酶（ME）同工酶在泥蚶不同組織中的表達(dá)情況。總體而言，蘋果酸酶在消化腺和足部有更高的活性，同時(shí)在這兩個(gè)組織中同工酶的譜帶也更復(fù)雜些。2.2.3 異檸檬酸脫氫酶圖4所示的是異檸檬酸脫氫酶（IDH）同工酶在泥蚶不同組織中的表達(dá)情況。異檸檬酸脫氫酶幾乎在所有的組織中都有較高的活性，但在外套膜和鰓組織中的活性相對(duì)較低。2.2.4 琥珀酸脫氫酶圖5所示的是琥珀酸脫氫酶（SCD）同工酶在泥蚶不同組織中的表達(dá)情況。除足部外，在其它4種組織中的酶活性大致相同。2.2.5 醇脫氫酶圖6所示的是醇脫氫酶（ADH）同工酶在泥蚶各組織中的分布。總體而言，醇脫氫酶在所有組織中幾乎都有較高的活性，在酶活性的強(qiáng)弱上并無(wú)顯著差異，且不同組織中同工酶譜的表達(dá)也無(wú)顯著差異。2.2.6 乳酸脫氫酶圖7所示的是乳酸脫氫酶（LDH）同工酶在泥蚶5個(gè)組織中表達(dá)的情況。相對(duì)而言，該酶在足和消化腺中活性最高，但與該組織中的其他同工酶相比，乳酸脫氫酶同工酶的活性是不高的。2.2.7 6-磷酸葡萄糖脫氫酶圖8所示的是6磷酸葡萄糖脫氫酶（G-6-PDH）同工酶在泥蚶5種組織中分布的情況。除足部外，該酶在其它4組織中都有相對(duì)較高的且相似的酶活性。2.2.8 三磷酸腺苷激酶圖9所示的是三磷酸腺苷激酶（ATPase）同工酶在泥蚶5種組織中表達(dá)的情況。該酶的活性在足和消化腺中較高，而在其它3組織中活性相對(duì)較低。該酶的表達(dá)具較強(qiáng)的組織特異性。3 討論3.1 泥蚶能量吸收的可能途徑泥蚶是一種濾食性貝類，它所攝食的食物主要是硅藻。據(jù)報(bào)道，兩年齡泥蚶胃和腸的食物中有97.7是硅藻。本研究證明，泥蚶含有大量的酯酶和-淀粉酶，這就為利用藻類來(lái)喂養(yǎng)泥蚶奠定了生理基礎(chǔ)；同時(shí)也表明，酯類和碳水化合物可能是泥蚶能量攝入的主要渠道?，F(xiàn)在沒有明確的證據(jù)可以表明蛋白質(zhì)在泥蚶的能量吸收中占有重要的地位。在本研究中也沒有發(fā)現(xiàn)高活性的谷氨酸脫氫酶（Robainas et al., 2005），這也可能表明，蛋白質(zhì)并不是泥蚶能量代謝的主要能源，同時(shí)也表明谷氨酸脫氫酶并不是蛋白質(zhì)降解過(guò)程中必不可少的物質(zhì)。但這兩種可能性都還有待于進(jìn)一步確認(rèn)。3.2 泥蚶能量代謝的方式和能量利用率通過(guò)簡(jiǎn)要的分析表明，在與泥蚶能量代謝有關(guān)的同工酶中，有氧呼吸途徑的酶活性是最高的，而磷酸戊糖途徑中的酶活性相對(duì)較低。這表明，如同大多數(shù)動(dòng)物，泥蚶的主要能源供應(yīng)是來(lái)自有氧呼吸，而無(wú)氧呼吸和磷酸戊糖途徑只是發(fā)揮能量代謝的輔助作用。在相同條件下，有氧呼吸可以產(chǎn)生更多的能量，所以它是生物進(jìn)化的一個(gè)重要指標(biāo)。紅血球是泥蚶機(jī)體中存在有氧呼吸的重要證據(jù)。無(wú)氧呼吸是另一個(gè)重要的能量代謝途徑。泥蚶是生活在海灘泥沙中的一種貝類，生態(tài)條件相當(dāng)不穩(wěn)定。有時(shí)候潮水能為泥蚶提供豐富的氧氣。在其他時(shí)候，它是暴露在干燥的低氧條件下。在這種情況下，無(wú)氧呼吸顯示出了極其重要的作用。據(jù)報(bào)道，泥蚶可以在長(zhǎng)時(shí)間暴露在干燥的環(huán)境下，這全都要?dú)w功于這種重要的能量代謝途徑。另一方面，由于泥蚶往往會(huì)把自身埋在泥土里，從而度過(guò)寒冷的冬季氣候。在這種特殊時(shí)期里，無(wú)氧呼吸在其能量供應(yīng)方面也起著不可或缺的作用。至于磷酸戊糖途徑，從圖9可知，泥蚶體內(nèi)有高活性的G-6-PDH，表明可能有相當(dāng)大比例的碳水化合物能以此途徑代謝。該途徑可為泥蚶的脂類代謝提供豐富的NADP（Oliveira et al., 2005; van Riel et al., 2005）。ATP酶是直接參與能量代謝的，所以