實(shí)驗(yàn)六葉綠素的提取、分離

1、最新資料推薦葉綠素的提取、分離一 、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握從植物葉中提取葉綠素的方法。2. 了解紙層層析的原理，掌握紙層析的一般操作和定性鑒定方法。二、實(shí)驗(yàn)原理1. 葉綠素提取原理：葉綠素等是脂溶性的有機(jī)分子，根據(jù)相似相溶的原理，葉綠體中含有葉綠體色素（葉綠素 a 和 b、胡蘿卜素及葉黃素）等色素分子溶于有機(jī)溶劑而不溶于有極性的水。故在研磨和收集葉綠色素時(shí)要用丙酮或乙醇等有機(jī)溶劑提取而不用水。2. 色素分離的原理：紙層析是用濾紙作為載體的一種色層分析法，其原理主要是利用混合物中各組分在；流動(dòng)相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分離。濾紙上吸附的水為固定相（濾紙纖維常能吸20% 左右的水），有機(jī)

2、溶劑如乙醇等為流動(dòng)相，色素提取液為層析試樣。把試樣點(diǎn)在濾紙的濾液細(xì)線位置上，當(dāng)流動(dòng)相溶劑在濾紙的毛細(xì)管的作用下，連續(xù)不斷地沿著濾紙前進(jìn)通過濾液細(xì)線時(shí)，試樣中各組份便隨著流動(dòng)相溶劑向前移動(dòng)，并在流動(dòng)相和固定相溶劑之間連續(xù)一次有一次的分配。結(jié)果分配比比較大的物質(zhì)移動(dòng)速度較快，移動(dòng)距離較遠(yuǎn)；分配比較小的物質(zhì)移動(dòng)較慢，移動(dòng)距離較近，試樣中各組分分別聚集在濾紙的不同的位置上，從而達(dá)到分離的目的。剪紙形狀濾液基線毛細(xì)管點(diǎn)樣薄層色譜展開三 、儀器和藥品1最新資料推薦研缽、毛細(xì)管、漏斗、紗布、小燒杯、試管、培養(yǎng)皿等95% 酒精、丙酮、石油醚碳酸鈣，石英砂四、實(shí)驗(yàn)步驟（ 1） 取菠菜或其他植物新鮮葉片 20g

3、左右，洗凈，用濾紙擦干，去掉葉柄和中脈剪碎，放入研缽。（ 2） 研缽中加入少量碳酸鈣和石英砂，加 4-5ml無水乙醇， 研磨至糊狀， 再加 10ml無水乙醇充分混勻以提取葉片勻漿中的色素，15-20分鐘后， 過濾入 50ml 錐形瓶中加塞待用。分離：（ 1） 取圓形定性濾紙一張（直徑15cm ），將其剪成濾紙條（15cm 2cm ），將其 2cm 一端剪去兩側(cè)，中間留一長(zhǎng)約1.5cm ，寬約 0.5cm 的窄條，并在濾紙剪口上方用鉛筆畫一條直線，作為畫濾液細(xì)線的基準(zhǔn)線（注意：濾液線必須距底邊1-1.5cm ）。 用毛細(xì)管吸取乙醇葉綠體色素提取液，沿紙條的濾液線涂，等風(fēng)干后，再重復(fù)操作數(shù)2-3次

4、。 （用濾液涂圓點(diǎn)狀類似）（ 2）在層析缸中加入適量（約2ml ）的丙酮作為推動(dòng)劑，將濾紙條帶有色素的一端輕輕插入層析缸中， 使濾紙條下端浸入推動(dòng)劑中。迅速蓋好層析缸蓋，靜置 40-60min 。此時(shí)，推動(dòng)劑借毛細(xì)管引力順濾紙條向上擴(kuò)散，并把葉綠體色素向上推動(dòng)，不久即可看到各種色素的條帶。（ 3）當(dāng)推動(dòng)劑前沿接近濾紙邊緣時(shí)，取出濾紙，風(fēng)干，即可看到分離的各種色素，從上到下為：胡蘿卜素為橙黃色、葉黃素為鮮黃色、葉綠素a 為藍(lán)綠色，葉綠素b 為黃綠色，用鉛筆標(biāo)出各種色素的位置和名稱。五、數(shù)據(jù)記錄2最新資料推薦六、注意事項(xiàng)：1. 紙層析法中所用的有機(jī)溶劑如丙酮、石油醚等，一般有揮發(fā)性、并有一定毒性，使用時(shí)要注意密封層析，避免吸入過多有害揮發(fā)物。2. 葉綠素分布于基粒的片層薄膜上，加入少許二氧化硅是為了磨碎細(xì)胞壁、質(zhì)膜、葉綠體被膜和光合片成，使色素溶解于酒精中。3. 插入層析液的濾紙條一端剪去兩個(gè)角，由于液面的不同位置表面張力不同，紙條接近液面時(shí)，其邊緣的表面的張力較大，層析液沿濾紙邊緣擴(kuò)散過快，而導(dǎo)致色素帶分離不整齊的現(xiàn)象。4. 加入的層析液要適量，濾紙放入層析缸時(shí)色素濾液線不能接入層析液，為了防止濾紙條倒入層析液中而使層析實(shí)驗(yàn)失敗。同時(shí)，防止因液體表面張力引起層析液沿濾紙條向上的 “壁流 ”而導(dǎo)致色素溶解。七、思考題：1. 在研磨