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文檔簡介
1、.,08級微生物學實驗考試試題解答PPT,PPT制作人: 36號 龔鵬 解說人 : 35號 張青 36號 龔鵬 37號 曾澤文,第八組,.,問題:,某細菌肥料是由相關的不同 組成的一個菌群并通過混合培養(yǎng)得到的一種產(chǎn)品。 的多少是質(zhì)量好壞的一個重要標志之一,請設計一個實驗方案來檢測該細菌肥料的質(zhì)量?在實驗過程中為減少實驗誤差提高數(shù)據(jù)的可靠性,應該注意那些操作步驟?,微生物,活菌數(shù),.,我們的思路,一、題目分析 二、實驗設計 三、解題總結(jié),.,一、題目分析,某細菌肥料是由相關的 組成的一個菌群并通過混合培養(yǎng)得到的一種產(chǎn)品。 的多少是質(zhì)量好壞的一個重要標志之一,請設計一個實驗方案來檢測該細菌肥料的質(zhì)
2、量?在實驗過程中為減少實驗誤差提高數(shù)據(jù)的可靠性,應該注意那些操作步驟? 從題目我們可以看出該題目的要求是 ; 因此,必須考慮以下幾個問題:,不同微生物,活菌數(shù),檢測單位質(zhì)量細菌肥料中的活菌數(shù),減少實驗誤差,.,1、該細菌肥料中的不同微生物,通過查找資料我們了解到細菌肥料,一般有 、 、 、 和 等分成。由此,我們推斷該細菌肥料中大概有 、 和 。,瘤菌劑,固氮菌劑,磷細菌劑,抗生菌劑,復合菌劑,細菌,真菌,放線菌,有哪幾種?,.,2、如何 這些微生物?,選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng); 用平板分離法分離。,分離純培養(yǎng),.,3、怎樣,采用平板培養(yǎng)計數(shù)法要求操作熟練、準確,否則難以得到正確結(jié)果。 要求樣品成分混
3、勻,保證每個活細胞都能分別形成菌落;盡可能選用選擇性培養(yǎng)基,保證計數(shù)菌落圍有效菌落。,減少實驗誤差?,解決方法:,.,思考之后,鑒于,以上幾點我們綜合考慮,最終決定采 用 分離純化微生物并測定樣品中活菌數(shù)。,稀釋涂布平板法,.,二、實驗設計,1、實驗目的 2、實驗原理 3、實驗過程,.,1、實驗目的,檢測單位質(zhì)量樣品細菌肥料中的 。,活菌數(shù),.,2、實驗原理,,分離培養(yǎng)樣品中的不同微生物。不同的培養(yǎng)基,由于營養(yǎng)成分不同,因此具有選擇性,適合改培養(yǎng)基的微生物就可以生長;反之,則不能生長,根據(jù)不同的選擇培養(yǎng)基,我們可以分離出樣品中的不同微生物。 ,是種統(tǒng)計物品含菌數(shù)的有效方法。方法如下:將待測樣品
4、經(jīng)適當稀釋之后,其中的微生物充分分散成單個細胞,取一定量的稀釋樣液涂布到平板上,經(jīng)過培養(yǎng),由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落,即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞;統(tǒng)計菌落數(shù),根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。,利用選擇培養(yǎng)基,平板菌落計數(shù)法,.,3、實驗過程,(一)樣品的處理和稀釋 (二)培養(yǎng)基的配置及倒平板 (三)涂布 (四)培養(yǎng) (五)計數(shù)和報告,.,(一)樣品的處理和稀釋,1.以無菌操作取檢樣10g,放于盛有90ml滅菌蒸餾水的滅菌三角瓶內(nèi)(瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的玻璃珠),經(jīng)充分研磨、搖床震蕩制成1:10的均勻稀釋液。 2.用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml
5、,注入含有9ml滅菌蒸餾水稀釋液的試管內(nèi),振搖試管混合均勻,制成1:100的稀釋液。 3.另取1ml滅菌吸管,按上項操作順序,制10倍遞增稀釋液,如此每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管。,.,操作示意圖:,.,【注意1:樣品稀釋誤差】,1、為減少樣品稀釋誤差,在連續(xù)遞次稀釋時,每一稀釋液應充分振搖,使其均勻,同時每一稀釋度應更換一支吸管。 2、在進行連續(xù)稀釋時,應將吸管內(nèi)液體沿管壁流入,勿使吸管尖端伸入稀釋液內(nèi),以免吸管外部粘附的檢液溶于其內(nèi)。 3、為減少稀釋誤差,最好采用取10mL稀釋液,注入90mL緩沖液中。,.,(二)培養(yǎng)基的配置及倒平板,1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(培養(yǎng)細菌用) 2、高
6、氏I號培養(yǎng)基(培養(yǎng)放線菌用) 3、馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基(分離真菌用),.,倒36個培養(yǎng)皿,操作圖,.,【注意2:倒平板誤差】,1. 倒平板時傾注培養(yǎng)基的量規(guī)定不一,從1220ml不等,一般以15ml較為適宜,平板過厚可影響觀察,太薄又易于干裂。傾注時,培基底部如有沉淀物,應將底部棄去,以免與菌落混淆而影響計數(shù)觀察。 2.為使菌落能在平板上均勻分布,檢液加入平皿后,應盡快傾注培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)混勻,可正反兩個方向旋轉(zhuǎn),檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿所用時間不宜超過20min,以防止細菌有所死亡或繁殖。,.,(三)涂布,操作方法: 選擇個 4個稀釋度,以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液放在無菌的已經(jīng)凝固
7、的培養(yǎng)基平板上,然后用無菌的玻璃涂棒把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上,每個稀釋度做3個平皿。,.,(四)培養(yǎng),待瓊脂凝固后,將含高氏I號培養(yǎng)基和馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基的平板倒置與28溫室中培養(yǎng)3-5d,牛肉膏蛋白胨平板倒置與37溫室中培養(yǎng)1-2d。,.,【注意3】,1、無菌操作:操作中必須有“無菌操作”的概念,所用玻璃器皿必須是完全滅菌的,不得殘留有細菌或抑菌物質(zhì)。所用剪刀、鑷子等器具也必須進行消毒處理。樣品如果有包裝,應用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。 2、操作應當在超凈工作臺或經(jīng)過消毒處理的無菌室進行。,.,(五)計數(shù)和報告,操作方法: 培養(yǎng)到時間后,取出培養(yǎng)皿,計算平板內(nèi)菌落數(shù)目。計數(shù)時可用肉眼觀察,必要時用放大鏡檢查,以防遺漏。在記下各平板的菌落總數(shù)后,求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù),計算出每克樣品中的菌落數(shù)。 計算方法: 每克樣品中的菌落數(shù)(個)=同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)(個)稀釋倍數(shù),.,結(jié)果統(tǒng)計,將計數(shù)結(jié)果填入下表,.,【注意4:計數(shù)誤差】,1. 到達規(guī)定培養(yǎng)時間,應立即計數(shù)。 2計數(shù)時應選取菌落數(shù)在30300之間的平板 3不同稀釋度的菌落數(shù)應與稀釋倍數(shù)成反比。 4當平板上有鏈狀菌落生長時,要仔細觀察 清楚再計數(shù)。,.,三、解題總結(jié),首先,看到這個題目時,我們覺得最難的就是,不知道該
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