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補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn),Complement-dependent cytotoxicity,LOGO,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?LOGO,實(shí)驗(yàn)原理,LOGO,實(shí)驗(yàn)主要材料,LOGO,操作步驟,一、小鼠胸腺細(xì)胞懸液的制備 46周齡小鼠斷頸處死，取出胸腺放至含有3 mL RPMI 1640培養(yǎng)液的平皿中，以剪刀和鑷子將組織處理成單細(xì)胞懸液，利用移液器取出后放入試管內(nèi)備用。,胸腺,注意事項(xiàng)： 小鼠斷頸要迅速、徹底，以防小鼠掙扎過(guò)程中出血過(guò)多，也可事先摘眼球放血。,LOGO,操作步驟, 振蕩混勻，置37C水浴箱，10min , 振蕩混勻，置37C水浴箱，20min , 振蕩混勻，滴片加蓋玻片，鏡檢,Ag+Ab,+ complement,二、細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)： 按下表加樣,PBS,LOGO,結(jié)果觀察,臺(tái)盼藍(lán)染色：如果細(xì)胞膜不完整、破裂，臺(tái)盼藍(lán)染料進(jìn)入細(xì)胞，細(xì)胞變藍(lán)。 如果細(xì)胞膜完整，細(xì)胞不為臺(tái)盼藍(lán)染色，則為正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞。此方法對(duì)反映細(xì)胞膜的完整性，區(qū)別壞死細(xì)胞有意義。,A,B,A. 對(duì)照組 B. 實(shí)驗(yàn)組,注意事項(xiàng)： 臺(tái)盼藍(lán)染色后放置時(shí)間不能太長(zhǎng)，否則出現(xiàn)假陽(yáng)性。,

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