第一節(jié)工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生.ppt

1、第一節(jié) 工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生,噴灑農(nóng)藥對(duì)棉鈴蟲(chóng)種群密度影響的曲線(xiàn)圖,普通棉花(無(wú)抗蟲(chóng)特性),蘇云金芽孢桿菌,獲得,抗蟲(chóng)基因,導(dǎo)入,棉花細(xì)胞,（目的基因）,載體,與 連接,(受體細(xì)胞),重組DNA分子,抗蟲(chóng)性狀,表達(dá),1、基因載體,作為運(yùn)載工具，將外源基因（目的基因）送入受體細(xì)胞。,作用：,質(zhì)粒（最常用）、噬菌體和某些動(dòng)植物病毒,種類(lèi)：,本質(zhì)：,DNA分子,細(xì)菌、酵母菌、放線(xiàn)菌等 最常用的是大腸桿菌的質(zhì)粒,來(lái)源：,結(jié)構(gòu)：,雙鏈環(huán)狀,特點(diǎn)：,自我復(fù)制,2、限制性核酸內(nèi)切酶,能夠識(shí)別和切割DNA分子內(nèi)一小段特殊核苷酸序列的酶。,含義：,磷酸二酯鍵,切割部位：,產(chǎn)生相同的粘性未端,作用結(jié)果：,

2、大腸桿菌中的一種限制性核酸內(nèi)切酶（EcoRI）只能識(shí)別GAATTC序列，并只能在G和A之間切開(kāi),舉例：,5，,5，,5，,5，,3，,3，,3，,3，,酶,酶,已知限制性?xún)?nèi)切酶的識(shí)別序列和切點(diǎn)是AAGCTT，限制性?xún)?nèi)切酶的識(shí)別序列和切點(diǎn)是GGATCC,請(qǐng)畫(huà)出切割后的粘性末端（參看課本P2圖1-1）,DNA片段,DNA片段,3、DNA連接酶,磷酸二酯鍵,連接部位：,將具有末端堿基互補(bǔ)的兩個(gè)DNA片段連接起來(lái),作用：,活動(dòng)：模擬重組DNA的構(gòu)建,活動(dòng)說(shuō)明：4人為一組 1.組長(zhǎng)：1人，由拿到工具的同學(xué)擔(dān)任，負(fù)責(zé)活動(dòng)任務(wù)的分配 和總指揮 2.切割：1人，由組長(zhǎng)分配，用剪刀切割質(zhì)粒和目的基因 3.連接：

3、1人，由組長(zhǎng)分配，用訂書(shū)機(jī)代表DNA連接酶，訂 書(shū)針代表磷酸二酯鍵連接 DNA片段 4.展示：1人，由組長(zhǎng)分配，負(fù)責(zé)展示小組活動(dòng)成果并發(fā)言（得到了幾種不同的結(jié)果，為什么能得到該結(jié)果）,任務(wù)一：已知EcoRI的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-GAATTC-,現(xiàn)將多個(gè)目的基因1（紅色）與多個(gè)質(zhì)粒經(jīng)酶切后混合并加入DNA連接酶，可能得到哪些不同的結(jié)果（最多考慮切割片段的兩兩結(jié)合）？,質(zhì)粒與目的基因連接（正向、反向）、質(zhì)粒與質(zhì)粒連接、目的基因與目的基因連接、目的基因自身環(huán)化、質(zhì)粒自身閉合,任務(wù)二：已知EcoRI和Hind的識(shí)別序列和切點(diǎn)分別是-GAATTC-, -AAGCTT,現(xiàn)將多個(gè)目的基因2（綠色）與多個(gè)質(zhì)粒經(jīng)酶切后混合并加入DNA連接酶，可能得到哪些不同的結(jié)果(最多考慮切割片段的兩兩結(jié)合？),質(zhì)粒與目的基因連接（正向）、質(zhì)粒與質(zhì)粒連接、目的基因與目的基因連接,已知BamHI和Bgl的識(shí)別序列和切點(diǎn)分別是-GGATCC-和 -AGATCT-,在質(zhì)粒上有BamHI的一個(gè)切點(diǎn)，在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)Bgl的切點(diǎn)。請(qǐng)問(wèn)能否將目的基因與質(zhì)粒連接在一起？,思維拓展,能。因?yàn)橛蓛煞N限制性切割后所形成的黏性末端是相同的。,思維拓展,下圖表示四種限制性核酸內(nèi)切酶BamH， EcoRI，Hind以及Bgl的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)。為防止酶切后含目的基因的DNA片段自身連接呈環(huán)狀，下列不能同時(shí)切割的目的