2 人類性染色質(zhì)小體的制備和觀察

1、實驗二人類性染色質(zhì)小體（巴氏小體）的制備與觀察,一、目的,1，掌握人類x小體（巴氏小體）玻片標(biāo)本制作方法。 2，觀察識別巴氏小體形態(tài)特征及所在部位，鑒定個體的性別。,二、原理,巴氏小體又稱X小體：正常女性，位于間期細(xì)胞核中，緊貼核膜內(nèi)緣，大小約11.5 um，呈現(xiàn)三角或橢圓形小體，數(shù)量為x染色體數(shù)減一。巴氏小體是由于女性兩個X染色體中的一個失活形成的。 具有兩個（或以上）X染色體的細(xì)胞中，不活化的X染色體所濃縮形成的緊密結(jié)構(gòu)。 它會依附在細(xì)胞核邊緣的核膜內(nèi)側(cè)，雖然此染色體上的小部份區(qū)域能保持著活躍的狀態(tài)，但大多數(shù)的基因都是不會表現(xiàn)的。只有位于性腺之細(xì)胞內(nèi)的巴爾氏體在進(jìn)行減數(shù)分裂時會再度活化。,

2、Lyon的劑量補償學(xué)說認(rèn)為：女性有兩個X染色體，但所表達(dá)的絕大部分遺傳物質(zhì)與只有1個X染色體的男性是一樣多的。 這是因為女性的X染色體中只有1個保持活性，而另一個是晚復(fù)制的，沒有活性。該失活的染色體在形態(tài)學(xué)上呈異染色體，即DNA螺旋壓的很緊，染色深而致密，稱之為巴氏小體。,三、實驗材料,口腔粘膜細(xì)胞，毛根鞘細(xì)胞，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，牙簽，吸管，固定液（乙醇:冰醋酸3:1），乙醇，二甲苯，卡寶品紅染液,四、實驗步驟,1）取材 口腔粘膜細(xì)胞：受檢者清水漱口數(shù)次，用潔凈牙簽從女性口腔兩側(cè)刮取粘膜，原位刮23次，第1次舍去，第2，3次分別涂于干凈載玻片上。 發(fā)根細(xì)胞：拔取女性帶有毛囊的頭發(fā)（約2c

3、m），置于載玻片上。,2）固定 口腔粘膜細(xì)胞加入新配置的固定液（95%乙醇:冰醋酸3:1），固定30min以上，空氣干燥。,2）固定 毛囊細(xì)胞-拔取一根毛根比較大的毛發(fā)，在一張干凈的載玻片中央滴一滴45%的醋酸，靜置約5分鐘，待毛根稍軟后，用鑷子尖把外層毛囊的組織細(xì)胞輕輕刮下，棄去毛干。將細(xì)胞用解剖針在載玻片上均勻攤平，并在空氣中晾干。 實驗改進(jìn)意見：拿起上述發(fā)根的梢部，將其上毛囊細(xì)胞輕輕蹭于另一干凈載片上即可達(dá)到轉(zhuǎn)移的目的。（若用刀片或鑷子將毛囊細(xì)胞刮下，可造成細(xì)胞的堆積，同樣會出現(xiàn)多層細(xì)胞的現(xiàn)象。1根發(fā)根的毛囊細(xì)胞可以轉(zhuǎn)移到3-4張載片上，以達(dá)到充分利用實驗材料的目的。觀察時又可以看到清晰

4、的單層涂布細(xì)胞，便于觀察統(tǒng)計。）,3）染色、制片 滴加染液，室溫10min（勿干）； 在95%的酒精中分色1-3分鐘； 在無水乙醇中繼續(xù)分色兩次，每次1分鐘 用二甲苯透明兩次，每次約3分鐘； 加蓋玻片，壓片。,巴氏小體為女性細(xì)胞中所特有的染色體結(jié)構(gòu)，是1條X染色體呈異固縮狀態(tài)所形成，各實驗室所統(tǒng)計的觀察率不盡相同，從30一50不等，有些實驗室中在男性的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)X小體有2%的出現(xiàn)率，但小體結(jié)構(gòu)不規(guī)范、典型。 巴氏小體常位于核膜內(nèi)側(cè)。直徑為1m左右，其形狀有微凸形、三角形、卵形、短棒形和雙球形等。觀察時需注意巴氏小體與細(xì)胞的比例。 正常女性細(xì)胞中僅可觀察到1個巴氏小體，而正常男性細(xì)胞中無巴氏小體或僅在個別細(xì)胞中有不典型的巴氏小體存在。,箭頭所示為巴氏小體（女性細(xì)胞左中存在，男性細(xì)胞右中沒有）,六、注意事項,1在實驗中取材時應(yīng)該注意安全； 2如果用毛囊細(xì)胞進(jìn)行試驗，采樣前應(yīng)清 洗頭發(fā)，因出油后拔取毛發(fā)時不易帶出毛囊細(xì)胞。,程序,取材：受檢者清水漱口數(shù)次，用潔凈牙簽從女性口腔兩側(cè)刮取粘膜，原位刮23次，第1次舍去，第2，3次分別涂于干凈載玻片上。 固定：口腔粘膜細(xì)胞加入新配置的固定液（95%乙醇:冰醋酸3:1），固定30min以上，空氣干燥。（固定液勿干） 染色、制片：滴