細(xì)菌常用的幾種試驗(yàn)ppt課件

1、菏澤市醫(yī)院病床微生物區(qū)系檢查中常用的幾種試驗(yàn)，1、常用實(shí)驗(yàn)方法，革蘭氏染色拉絲試驗(yàn)，耐酸染色氧化酶試驗(yàn)，觸酶試驗(yàn)，凝固酶試驗(yàn)，調(diào)理素實(shí)驗(yàn)衛(wèi)星試驗(yàn)，環(huán)磷酸腺苷桿菌肽敏感試驗(yàn)，硝酸鹽還原試驗(yàn)，脫氧核糖核酸酶試驗(yàn)，生化反應(yīng)血清分型(志賀菌、沙門(mén)氏菌、霍亂菌、鏈球菌)，2、革蘭氏染色，快速染色法：1、初級(jí)染色：結(jié)晶紫染色10 2，媒染：革蘭氏碘溶液染色10秒，水洗，干燥；3.脫色：用95%乙醇脫色1020秒，水洗，干燥；4.再染色：用沙黃色或紅色染色10秒鐘，水洗，干燥后鏡檢。5.結(jié)果判斷：革蘭氏染色呈紫色，革蘭氏染色呈紅色，3。革蘭氏陽(yáng)性菌是革蘭氏陰性菌，4。氫氧化鉀拉絲試驗(yàn)和“氫氧化鉀拉絲試驗(yàn)”能

2、快速鑒定革蘭氏陽(yáng)性菌。1.原理：由于革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁肽聚糖層數(shù)少于稀堿溶液，容易斷裂，并釋放出未斷裂的DNA螺旋，使KOH菌懸液變粘，攪拌后可將絲拉出，但2。試劑：4%氫氧化鉀水溶液。它應(yīng)該是新鮮準(zhǔn)備的。3.方法：取1滴4%氫氧化鉀水溶液放在干凈的載玻片上，取幾個(gè)新制備的菌落放在帶有接種環(huán)的固體培養(yǎng)基上，在氫氧化鉀溶液中攪拌混合均勻，每隔幾秒鐘提起接種環(huán)，看看絲是否能被拉出。4.結(jié)果：接種環(huán)能拉出絲為陽(yáng)性，懸絲仍為陰性。大多數(shù)革蘭氏陰性菌在5到10秒內(nèi)呈陽(yáng)性，有些需要30到45秒。60秒后革蘭氏陽(yáng)性菌仍為陰性。5、耐酸染色，1、一次染色：石炭酸變紅，加熱染色3-5分鐘，水洗，干燥；2.脫色：

3、用3%鹽酸酒精脫色3060秒，水洗，干燥；3.再染色：堿性亞甲藍(lán)60秒，水洗，干燥后鏡檢。4.結(jié)果判斷：抗酸菌為紅色，非抗酸菌為藍(lán)色。5.意義：用于區(qū)分抗酸細(xì)菌和非抗酸細(xì)菌。6.耐酸染色-耐酸細(xì)菌。7.氧化酶試驗(yàn)。原理：具有氧化酶的細(xì)菌首先氧化細(xì)胞色素C，然后氧化細(xì)胞色素C氧化對(duì)苯二胺產(chǎn)生有色醌。方法：取一小塊干凈的濾紙，涂上少許菌苔，加入一滴氧化酶試劑(對(duì)苯二胺溶液)，觀(guān)察顏色變化。判斷：它立即變成粉紅色，并迅速變成紫紅色，這是積極的，而它不改變顏色，是消極的。意義：從氣單胞菌和假單胞菌中鑒定腸桿菌科細(xì)菌，8，9，酶接觸試驗(yàn)，1。原理：具有過(guò)氧化氫酶的細(xì)菌可以催化過(guò)氧化氫，釋放新的生態(tài)氧，然

4、后形成分子氧和氣泡。2.方法：用接種環(huán)挑取固體培養(yǎng)基上的菌落，置于干凈的玻片上，滴加3%過(guò)氧化氫溶液，觀(guān)察結(jié)果。3.結(jié)果判斷：5秒內(nèi)釋放的大量氣泡為陽(yáng)性。4.意義：大多數(shù)球菌酶接觸試驗(yàn)為陽(yáng)性，而鏈球菌為陰性，主要用于區(qū)分葡萄球菌和鏈球菌。10，11，血漿凝固酶試驗(yàn)，1。原理：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生兩種凝固酶。一種是結(jié)合凝固酶，它與細(xì)胞壁結(jié)合，使血漿中的纖維蛋白原變成纖維蛋白并粘附在細(xì)菌表面，發(fā)生凝集，這是通過(guò)玻片法測(cè)定的。另一種是細(xì)菌形成后從培養(yǎng)基中釋放的游離凝固酶，它可以將凝血原轉(zhuǎn)化為凝血酶物質(zhì)，從而凝固血漿，這可以通過(guò)試管法測(cè)定。2.方法：(1)玻片法：取一滴血漿和生理鹽水，滴在干凈的玻片上

5、。挑選要檢測(cè)的菌落，分別與血漿和生理鹽水混合。如果血漿中有明顯的凝集顆粒，而鹽水中沒(méi)有自凝，則為陽(yáng)性。(2)試管法：取兩根試管，加入0.5毫升血漿(用生理鹽水1: 4稀釋)，挑出幾個(gè)菌落，加入到測(cè)量管中，充分研磨并混合均勻，加入一個(gè)陽(yáng)性菌株到對(duì)照管中373-4小時(shí)。血漿凝固呈陽(yáng)性。12、13、14、OPT(操作測(cè)試)，1。原理：肺炎鏈球菌對(duì)視托欽(乙基氫化去甲喹)非常敏感2.方法：將待測(cè)A溶血后的鏈球菌均勻涂于血片上，貼上光托欽紙(含5毫克藥物)35小時(shí)，孵育18-24小時(shí)，觀(guān)察抑菌圈大小。3.從結(jié)果來(lái)看，肺炎鏈球菌為14毫米抑菌圈，綠色鏈球菌為狹窄抑菌圈。15，16，衛(wèi)星測(cè)試，1。原理：流感

6、嗜血桿菌生長(zhǎng)時(shí)需要兩個(gè)因子X(jué)和V，在血盤(pán)上形成微小、圓形和透明的菌落。如果與金黃色葡萄球菌同時(shí)培養(yǎng)，金黃色葡萄球菌產(chǎn)生因子V，促進(jìn)流感嗜血桿菌的生長(zhǎng)，金黃色葡萄球菌周?chē)木浯?，形成衛(wèi)星生長(zhǎng)現(xiàn)象。它不能在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。2.方法：用采菌環(huán)挑取可疑菌落，分別接種于血平板和MH平板，然后用采菌針挑取金黃色葡萄球菌，與原標(biāo)記線(xiàn)垂直交叉，接種于平板。3524小時(shí)觀(guān)察結(jié)果。3.從結(jié)果判斷：金黃色葡萄球菌周?chē)木漭^大，衛(wèi)星檢測(cè)呈陽(yáng)性。4.意義：只有衛(wèi)星現(xiàn)象流感嗜血桿菌出現(xiàn)在血盤(pán)上；血片和MH都顯示出衛(wèi)星現(xiàn)象副流感嗜血桿菌。從而用于區(qū)分流感和副流感嗜血桿菌。17，18，19，CAMP測(cè)試，1。原理：b組

7、鏈球菌可在血平板上產(chǎn)生camp因子，促進(jìn)金黃色葡萄球菌溶血素的活性，從而增強(qiáng)血平板上兩種細(xì)菌結(jié)合處的溶血能力，形成箭頭形透明溶血區(qū)。其他鏈球菌一般不產(chǎn)生環(huán)磷酸腺苷因子，因此該試驗(yàn)可作為乙組鏈球菌的鑒定指標(biāo)之一。2.方法：在血平板上，用金黃色葡萄球菌畫(huà)一條水平線(xiàn)，然后用相隔5毫米左右的被測(cè)菌接種一條或兩條垂直短線(xiàn)，觀(guān)察3524小時(shí)。3.結(jié)果觀(guān)察：受試菌的接種線(xiàn)與金黃色葡萄球菌的接種線(xiàn)之間有一個(gè)箭頭形或半月形的透明溶血區(qū)，可推斷為B群鏈球菌。無(wú)溶血區(qū)為陰性。20，21，桿菌肽敏感性試驗(yàn)，1。原理：A組鏈球菌對(duì)桿菌肽非常敏感，而其他鏈球菌通常對(duì)桿菌肽有耐藥性，因此該試驗(yàn)可以鑒別鏈球菌。2.方法：將待

8、測(cè)鏈球菌緊密涂于血片上，將桿菌肽紙片貼于血片表面，觀(guān)察3524小時(shí)。3.桿菌肽周?chē)黠@的抑菌圈為10毫米，為陽(yáng)性，則推斷為A群鏈球菌，10毫米為陰性，為其他群鏈球菌。22，23，硝酸鹽還原試驗(yàn)，1。原理：有些細(xì)菌可以減少培養(yǎng)基中的硝酸鹽，生成亞硝酸鹽、氨和氮。亞硝酸鹽與乙酸反應(yīng)生成亞硝酸，亞硝酸再與對(duì)氨基苯磺酸反應(yīng)生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸可與-萘胺結(jié)合生成紅色的N-氨基苯磺酸。2.方法：將待測(cè)菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基中3524小時(shí)，加入1滴硝酸鹽還原劑A(對(duì)氨基苯磺酸和乙酸)和1滴溶液B(-萘胺和乙酸)，觀(guān)察結(jié)果。3.判斷結(jié)果：紅色為陽(yáng)性。如果沒(méi)有出現(xiàn)紅色，添加一點(diǎn)鋅粉。如果紅色仍然沒(méi)有出現(xiàn)，它將是積極的，紅色將是消極的。4.顯著性：腸桿菌科細(xì)菌，硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性，24，25，脫氧核糖核酸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，1。原理：一些細(xì)菌能產(chǎn)生脫氧核糖核酸酶。脫氧核糖核酸酶可以將長(zhǎng)的脫氧核糖核酸鏈水解成由幾個(gè)單核苷酸組成的寡核苷酸鏈。水解形成的寡核苷酸可溶于酸。在脫氧核糖核酸平板上加入酸后，菌落周?chē)?/p>