人血漿脂蛋白相關(guān)磷脂酶A學(xué)習(xí)課件.ppt

1、人血漿脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2,血管內(nèi)皮炎癥的獨立危險因子 促進(jìn)動脈粥樣硬化（AS），是新的AS的危險因子 能夠獨立預(yù)測AS的風(fēng)險 心腦血管疾病的提示性指標(biāo) 獨立預(yù)測心腦血管栓塞性疾病,1,1.研發(fā)背景,1.1 中國主要疾病死亡率,來源：2010中國衛(wèi)生統(tǒng)計年鑒,2,1.2 美國主要疾病死亡率,Source :National Center for Health Statistics 2010,3,心腦血管疾病是造成人類死亡的主要疾病，預(yù)防檢測和治療心腦血管疾病一直是全世界醫(yī)學(xué)工作者努力不懈的目標(biāo)。而心腦血管疾病的病理基礎(chǔ)就是動脈粥樣硬化，那么，動脈粥樣硬化是怎樣形成的呢？,4,1.3 1976年

2、RRoss提出了損傷反應(yīng)學(xué)說,近年來研究的最大成就是認(rèn)識到動脈粥樣硬化是一種炎性反應(yīng)性疾病，炎性細(xì)胞及其釋放的產(chǎn)物已經(jīng)被認(rèn)為是最主要的促動脈粥樣硬化的因素。 在粥樣斑塊形成、進(jìn)展和最終破裂的過程中均有炎性反應(yīng)介質(zhì)的參與。,5,因此，尋找一個能夠反應(yīng)這種動態(tài)變化過程的介質(zhì)就尤為重要了，目前國際上已經(jīng)把脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2 （Lipoprotein- Associated Phospholipase A2 Lp-PLA2)作為一種新的炎性反應(yīng)標(biāo)志物。,6,2.作用機制及臨床意義,2.1 作用機制 2.2 作用示意圖 2.3 臨床意義 2.4 目前檢查的局限性,7,2.1 作用機制,脂蛋白相關(guān)磷脂酶

3、A2，英文簡寫Lp-PLA2 又稱血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH） 分子量為45K Da 由成熟的巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞合成和分泌，并 受炎性介質(zhì)的調(diào)節(jié) 80%與低密度脂蛋白（LDL）結(jié)合 能水解低密度脂蛋白上的氧化卵磷脂，生成促 炎物質(zhì)，因此具有促炎癥和促動脈粥樣硬化的 作用,8,9,血管內(nèi)腔,氧化的 LDL,內(nèi)膜,介質(zhì),粘附因子,單核細(xì)胞,細(xì)胞因子,斑塊形成,泡沫細(xì)胞,巨噬細(xì)胞,溶血卵磷脂,氧化游離脂肪酸,2.2 作用示意圖,10,穩(wěn)定粥樣斑塊 Lp-PLA2 含量低 可能有嚴(yán)重管腔狹窄 較少的炎癥細(xì)胞,不穩(wěn)定粥樣斑塊 Lp-PLA2 含量高 可能輕微的管腔狹窄 大量的炎癥細(xì)胞,Sou

4、rce： Davidson MH, Jones PH. Am J Card Suppl 2008,11,穩(wěn)定粥樣斑塊,斑塊破裂形成血栓,不穩(wěn)定粥樣斑塊,粥樣斑塊早期,Source： Davidson MH, Jones PH. Am J Card Suppl 2008,12,動脈粥樣硬化的炎癥發(fā)展到嚴(yán)重程度，將要或者已經(jīng)出現(xiàn)向血管內(nèi)腔破裂時，Lp-PLA2將會被大量釋放入血液，致使其血液內(nèi)的水平會大幅增高，因此Lp-PLA2在血液中的濃度就能夠反映動脈粥樣斑塊的炎癥程度。,13,2.3 臨床意義,通過檢測血液中的Lp-PLA2,可以有效地了解動脈粥樣硬化斑塊的炎癥程度及其穩(wěn)定性。這樣就可預(yù)警心

5、肌梗死和腦血栓的發(fā)生，對預(yù)防心腦血管突發(fā)事件具有相當(dāng)重要的意義。 臨床意義： 1、預(yù)測心腦血管栓塞性疾病的發(fā)生。 2、判斷心腦血管栓塞性疾病的轉(zhuǎn)歸。,14,2.4 目前臨床檢測都存在著一定的局限,（1）血管造影，可以顯示血管的狹窄程度，但這是一種有創(chuàng)性檢查，不適用于普檢、預(yù)防和監(jiān)測。 （2）許多的血液生化檢測，比如膽固醇與低密度脂蛋白升高，體內(nèi)脂質(zhì)代謝異常，還是無法預(yù)警動脈粥樣斑塊的炎癥程度，對判斷爆發(fā)心腦血管意外危險性的特異性不好。,15,（3）各種心肌酶的檢測，這些酶是發(fā)生了心肌梗死以后才出現(xiàn)的指標(biāo)異常，因而也失去了預(yù)防和監(jiān)測意義。 （4）CRP在各種急性炎癥時出現(xiàn)，其升高幅度與感染的程度

6、呈正相關(guān) ，對于動脈粥樣硬化炎癥缺乏特異性。 只有Lp-PLA2的檢測能直接準(zhǔn)確的反映血管內(nèi)膜的炎癥程度，也就是動脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度，并且它是動態(tài)的變化。,16,3.醫(yī)學(xué)評價,3.1 醫(yī)學(xué)正常值 根據(jù)臨床試驗數(shù)據(jù)與統(tǒng)計學(xué)分析，對照組Lp-PLA2(ng/ml)檢測數(shù)據(jù)為正態(tài)分布，在a=0.05檢驗水準(zhǔn)下，制定單側(cè)95%醫(yī)學(xué)正常值為175 ng/ml。 依據(jù)這個正常值，檢測靈敏度為93.40%，特異度為92.8%，準(zhǔn)確度為97.0%。,17,3.2 產(chǎn)品評價,產(chǎn)品是中國首家，國內(nèi)第一個上市產(chǎn)品，也是國家863高科技成果。,18,檢測方法簡易、快捷（3h）、準(zhǔn)確、靈敏度高，重復(fù)性好。 價格優(yōu)勢：

7、同類產(chǎn)品在美國普遍應(yīng)用，臨床的檢測收費在250美元（人民幣1500），天津市物價局批復(fù)每人份380元。,19,4.適應(yīng)科室及人群4.1 醫(yī)院科室,門診部：內(nèi)科、外科。 住院部：心內(nèi)科、神經(jīng)內(nèi)科、內(nèi)分泌科、神經(jīng)外科、老干科。 急診部：內(nèi)科、外科。 健康管理中心。,20,4.2 適用人群,高危人群：冠心病、腦血栓、高血壓、高血脂癥、高粘血癥等患者及肥胖、煙酒過度、缺乏運動等人群的門診常規(guī)血液檢測。 住院病人的常規(guī)血液檢測。 40歲以上人群體檢的常規(guī)血液檢測項目。,21,5.樣本的采集,用肝素或EDTA抗凝管或者不抗凝取血管抽取適應(yīng)癥患者靜脈血2-5ml送檢即可。,22,6.ELISA原理,6.1

8、原理：ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的新型免疫檢測技術(shù)。,23,24,6.2 操作流程,a. 將試劑盒從冰箱中取出，在室溫中平衡片刻； b. 加入20微升待測樣品（血清或血漿）或標(biāo)準(zhǔn)品于反應(yīng)孔內(nèi)，然后加入30微升稀釋液混和后覆膜，37溫育20分鐘(建議血清樣本可按比例先在離心管中充分混勻后再取50微升加入到反應(yīng)孔內(nèi)）； c. 加入150微升酶標(biāo)記物，混和后覆膜37溫育120分鐘； d.除去孔內(nèi)液體，每孔加入300微升洗滌液，振蕩20-30秒后除去洗滌液，重復(fù)4次；,25,e.每孔加入顯色液100微升，混勻，37避光溫育20分鐘； f.加入50微升終止液； g.立即用酶標(biāo)儀在450納米波長條件下測定各孔的OD值； h.以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），Lp-PLA2標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的Lp-PLA2含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。,26,研究展望,人血漿脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2的檢