實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目槐米中蕓香苷的提取精制及檢識(shí)課件

實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目槐米中蕓香苷的提取精制及檢識(shí)1.槐米中蕓香苷的提?。?學(xué)時(shí)）2.蕓香苷的精制（2學(xué)時(shí)）3.水解蕓香苷得到槲皮素（4學(xué)時(shí)）4.蕓香苷和槲皮素的檢識(shí)（4學(xué)時(shí)）主要內(nèi)容槐花槐米槐米系豆科植物槐SophorajaponicaL.的干燥花蕾。能涼血止血，清肝瀉火。用于便血，痔瘡出血，血痢，尿血，吐血，高血壓癥等。蕓香苷槲皮素（苷元）

槐米中有效成分為蕓香苷,又稱蘆丁(rutin)。含量可高達(dá)12～20％，藥理實(shí)驗(yàn)證明蕓香苷有調(diào)節(jié)毛細(xì)血管滲透作用，臨床上可作為毛細(xì)血管脆弱引起的出血癥，常作為高血壓的輔助治療藥。實(shí)訓(xùn)內(nèi)容

1.槐米中蕓香苷的提取

實(shí)訓(xùn)目的掌握黃酮及其苷類化合物的性質(zhì)及提取分離方法。學(xué)會(huì)運(yùn)用堿溶酸沉法對(duì)槐米中的蕓香苷進(jìn)行提取分離。實(shí)訓(xùn)原理蕓香苷分子中含具有酚羥基，顯弱酸性，能與堿成鹽而溶于堿液中，加酸酸化后又可沉淀析出，因此可用堿溶酸沉法提取蕓香苷。操作步驟加入0.4%硼砂水溶液200ml，攪拌下加入石灰乳調(diào)節(jié)pH8-9，加熱保持微沸20min（注意補(bǔ)充水分，保證pH值），趁熱用棉花過(guò)濾槐米（20g）合并濾液殘?jiān)脻恹}酸調(diào)pH3-4，蓋好，靜置加入150ml0.4%硼砂水溶液同法操作再提取15min，趁熱用棉花過(guò)濾殘?jiān)壢ゲ灰V液提示1.提取時(shí)加入0.4%硼砂水溶液的目的：既能調(diào)節(jié)pH，又可以與蘆丁中的鄰二酚羥基絡(luò)合，保護(hù)鄰二酚羥基不被氧化。2.

加石灰乳既可達(dá)到調(diào)pH值的目的，還可以除去槐米中的多糖類、粘液質(zhì)等雜質(zhì)。注意1.加石灰乳時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制在pH8～9，不得超過(guò)10，如堿性太強(qiáng)，鈣離子易與酚羥基、羰基形成難溶于水的鰲合物，降低收率。2.酸化時(shí)加鹽酸控制pH在3～4，如果pH＜2，容易使蕓香苷的醚鍵形成

鹽，不易析出沉淀，降低收率。實(shí)訓(xùn)內(nèi)容

2.蕓香苷的精制實(shí)訓(xùn)目的掌握重結(jié)晶法的原理。學(xué)會(huì)運(yùn)用重結(jié)晶法對(duì)蕓香苷粗品進(jìn)行精制。實(shí)訓(xùn)原理根據(jù)雜質(zhì)難溶于水，而蕓香苷在冷、熱水中溶解度相差懸殊的性質(zhì)采用重結(jié)晶法進(jìn)行精制。蕓香苷性狀：淺黃色粉末或極細(xì)微淡黃色針狀結(jié)晶。溶解度：在冷水中1:10000，沸水中1:200；冷乙醇中1:200，沸乙醇中1:60。沸甲醇中1:7。第一次實(shí)驗(yàn)所得液體濾液沉淀（粗品蘆?。┏闉V置300ml蒸餾水中，煮沸，至蕓香苷完全溶解，趁熱抽濾殘?jiān)鼮V液蓋好，靜置操作步驟減壓抽濾裝置思考1.以熱水重結(jié)晶法精制蘆丁的依據(jù)是什么？2.重結(jié)晶的操作要點(diǎn)有哪些？實(shí)訓(xùn)內(nèi)容

3.蕓香苷的水解實(shí)訓(xùn)目的掌握苷類的酸水解方法。能夠熟練操作蕓香苷的酸水解。實(shí)訓(xùn)原理蕓香苷可被稀酸水解生成苷元槲皮素及葡萄糖、鼠李糖。蕓香苷槲皮素葡萄糖鼠李糖精制所得液體濾液沉淀抽濾操作步驟精制蕓香苷置60～70℃烘箱中烘干（稱重）提取率=所得重量（g）20g*100%精制蕓香苷（1g）置250ml圓底燒瓶中，加入2%硫酸80ml，加3粒沸石，加熱回流40min，放冷，抽濾。沉淀濾液水洗至中性，抽干水分，烘干槲皮素注意觀察現(xiàn)象：未加熱時(shí)，瓶?jī)?nèi)為混懸液（蘆丁不溶于冷水），加熱后，混懸液逐漸變?yōu)槌吻逡海ㄌJ丁易溶于熱水），繼續(xù)加熱，有鮮黃色沉淀析出（槲皮素不溶于水）實(shí)訓(xùn)內(nèi)容

4.蕓香苷和槲皮素的檢識(shí)實(shí)訓(xùn)目的掌握黃酮類化合物、酚羥基、苷的化學(xué)檢識(shí)方法。掌握硅膠色譜和聚酰胺色譜的分離原理。能夠熟練進(jìn)行薄層色譜操作。實(shí)訓(xùn)原理硅膠薄層色譜分離黃酮類成分的原理為極性吸附，極性大的物質(zhì)吸附強(qiáng)。聚酰胺薄層色譜是利用聚酰胺分子內(nèi)存在的許多酰胺基，能與酚類的羥基、酸類的羧基及醌類的醌基形成氫鍵而產(chǎn)生吸附，能夠形成氫鍵的基團(tuán)越多，吸附越強(qiáng)。黃酮類化合物的顯色反應(yīng)；酚羥基的顯色反應(yīng)；苷的鑒定。1.色譜檢識(shí)樣品溶液的制備：

蕓香苷樣品溶液：取精制蕓香苷少量，加10ml乙醇溶解，備用。

槲皮素樣品溶液：取槲皮素少量，加10ml乙醇溶解，備用。硅膠薄層色譜操作（1）點(diǎn)樣：取硅膠薄層板，在下端約1.5-2cm處用鉛筆畫一直線，作為起始線，點(diǎn)上下列樣品:

①自制蕓香苷乙醇液②蕓香苷對(duì)照品乙醇液③自制槲皮素乙醇液④槲皮素對(duì)照品乙醇液（2）展開(kāi)：展開(kāi)劑乙酸乙酯：甲醇：冰醋酸（15：1：0.5）；用量10ml；

展距

10cm（3）顯色：展開(kāi)完→取出硅膠板→劃前沿線→晾干→可見(jiàn)光觀察→紫外光觀察→氨水熏→觀察記錄斑點(diǎn)顏色和位置（4）結(jié)果：計(jì)算Rf值，并比較。10cm①②

③④

聚酰胺薄層色譜（1）點(diǎn)樣：取聚酰胺薄膜，在下端約0.8cm處用鉛筆畫一直線，作為起始線，點(diǎn)上下列樣品:

①自制蕓香苷乙醇液②蕓香苷對(duì)照品乙醇液③自制槲皮素乙醇液④槲皮素對(duì)照品乙醇液自制樣品要求：澄清透明，完全溶解（2）展開(kāi)展開(kāi)劑乙醇：水：乙酸乙酯（3：1：0.5）用量4ml展距5cm（3）顯色：展開(kāi)完→取出薄膜→劃前沿線→溶劑揮干→可見(jiàn)光觀察→紫外光觀察→氨水熏→記錄斑點(diǎn)顏色和位置聚酰胺色譜紫外燈下結(jié)果（4）結(jié)果：計(jì)算Rf值，并比較。2.化學(xué)檢識(shí)樣品：點(diǎn)樣后剩下的

自制蕓香苷乙醇液

自制槲皮素乙醇液試劑：鎂粉、濃鹽酸、10%α-萘酚溶液、濃硫酸、1%三氯化鐵乙醇溶液、1%三氯化鋁乙醇溶液試管8支（蕓香苷4支、槲皮素4支）將蕓香苷乙醇液和槲皮素乙醇液，分別平分到4支試管中，分別做以下實(shí)驗(yàn)。樣品溶液+α-萘酚20d→振搖后傾斜45°→沿管壁加濃硫酸20d→靜置→觀察并記錄液面交界處顏色變化（不要搖動(dòng)）黃酮鹽酸-鎂粉反應(yīng)樣品溶液+Mg少許+濃HCl2-3d觀察顏色變化。黃酮三氯化鋁反應(yīng)樣品溶液+AlCl32-3d→觀察顏色變化→1d于濾紙上→紫