病理組織切片制作步驟

匯報人：文小庫2024-12-16病理組織切片制作步驟目錄CONTENTS病理組織準(zhǔn)備組織包埋與切片蘇木精-伊紅（H-E）染色流程顯微鏡下的病變觀察與診斷常見問題與解決方案實驗安全與衛(wèi)生管理01病理組織準(zhǔn)備病變部位的選擇應(yīng)選擇具有病變代表性的部位，盡可能包含病灶及周圍組織，以便全面了解病變情況。病變程度的選擇根據(jù)病變的發(fā)展階段，選擇適當(dāng)?shù)牟∽兂潭?，以便?zhǔn)確反映疾病的本質(zhì)。組織類型的選擇不同組織類型的病變具有不同的特點和診斷價值，因此應(yīng)選擇最能反映疾病特點的組織類型。選取合適病變組織通常采用10%福爾馬林溶液進(jìn)行固定，以保持組織的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。固定方法固定時間應(yīng)根據(jù)組織大小和厚度進(jìn)行調(diào)整，一般需數(shù)小時至數(shù)十小時不等。固定時間固定后的組織應(yīng)放置于適宜的保存液中，如70%乙醇等，以防止組織腐敗和變質(zhì)。保存方法組織固定與保存方法010203切割成適宜大小及形狀切割形狀根據(jù)實驗需要和觀察目的，切割成不同的形狀，如長方形、正方形、梯形等。切割大小根據(jù)顯微鏡的放大倍數(shù)和組織的大小，切割成適宜大小的切片，一般為數(shù)毫米至數(shù)厘米不等。切割工具使用鋒利的刀具或切片機(jī)進(jìn)行切割，以確保切片的完整性和清晰度。02組織包埋與切片組織選取與處理將處理好的組織塊放入液態(tài)石蠟中，使石蠟逐漸滲透進(jìn)入組織內(nèi)部，然后用石蠟包埋組織，形成蠟塊。石蠟滲透與包埋包埋注意事項石蠟溫度要適中，過高易使組織燙壞，過低則難以切片；包埋時要確保組織塊完全浸沒在石蠟中，避免產(chǎn)生氣泡。選取適當(dāng)大小的病變組織，進(jìn)行固定、脫水、透明等處理，以便更好地保持組織形態(tài)。石蠟包埋技術(shù)要點切片機(jī)操作規(guī)范及注意事項010203切片前準(zhǔn)備檢查切片機(jī)各部件是否完好，調(diào)整切片厚度和切片角度，確保切片質(zhì)量。切片操作將包埋好的組織塊固定在切片機(jī)上，搖動切片機(jī)手柄進(jìn)行切片，切片時要保持勻速、平穩(wěn)，避免切片過厚或切到組織邊緣。切片后處理將切好的薄片放入溫水中展平，然后用載玻片輕輕撈起，放入烤片機(jī)中烘烤至水分完全蒸發(fā)。切片厚度應(yīng)均勻一致，無明顯的厚薄差異，一般控制在4-6微米之間。薄片厚度切片應(yīng)完整無缺，無斷裂、皺褶等現(xiàn)象，能夠清晰地顯示出組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。薄片完整性薄片應(yīng)經(jīng)過適當(dāng)?shù)娜旧幚?，使組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)更加清晰可見，染色要均勻、適度，無過染或不足現(xiàn)象。染色效果薄片質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)03蘇木精-伊紅（H-E）染色流程蘇木精染色原理及步驟染色原理蘇木精不能直接染色，必須暴露在通氣的地方，變成氧化蘇木精（又叫蘇木素）后才能使用。染色步驟將組織切片放入蘇木精染液中，使細(xì)胞核著色。媒染劑的作用媒染劑能促進(jìn)蘇木精與細(xì)胞核的結(jié)合，使染色更加牢固。染色時間染色時間根據(jù)組織類型和切片厚度而定，一般在幾分鐘至半小時之間。伊紅染色原理及步驟染色原理伊紅是一種酸性染料，能將細(xì)胞質(zhì)染成紅色。染色步驟將組織切片從蘇木精染液中取出，放入伊紅染液中，使細(xì)胞質(zhì)著色。染色時間染色時間較短，一般在幾分鐘內(nèi)完成。染色效果伊紅染色后，細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)紅色，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對比。使用分化液將蘇木精和伊紅混合染色的切片進(jìn)行分色處理，使細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的顏色更加清晰。將切片放入梯度酒精中脫水，以去除多余的水分和染料。用中性樹膠封片，然后在顯微鏡下觀察染色效果，注意細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的顏色對比以及組織結(jié)構(gòu)的清晰度。根據(jù)染色效果和觀察結(jié)果，評估染色是否達(dá)到預(yù)期目的，以及是否存在染色不均或著色過深等問題。染色后處理與觀察技巧分色處理脫水處理封片與觀察染色效果評估04顯微鏡下的病變觀察與診斷調(diào)整顯微鏡的焦距和光線，確保觀察的組織切片清晰、層次分明。顯微鏡的調(diào)節(jié)選擇具有代表性的病變區(qū)域，并確定病變部位的具體位置。切片的選擇與定位按照由低倍到高倍、由表及里的順序進(jìn)行觀察，并詳細(xì)記錄病變特點。觀察順序與記錄顯微鏡操作方法及注意事項010203病變的形態(tài)學(xué)特征包括病變細(xì)胞的形態(tài)、大小、染色質(zhì)變化等，以及病變組織的結(jié)構(gòu)特點。病變的分級與分類根據(jù)病變的嚴(yán)重程度和累及范圍，對病變進(jìn)行分級和分類。鑒別診斷與誤區(qū)避免與其他類似病變進(jìn)行鑒別診斷，避免誤診或漏診。病變特征識別與分類標(biāo)準(zhǔn)病理診斷的依據(jù)結(jié)合臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查、實驗室檢查及病理切片觀察等多方面資料，進(jìn)行綜合分析。病理診斷的流程初步診斷→病理會診→最終診斷，必要時還需進(jìn)行免疫組化等輔助診斷。病理報告的撰寫準(zhǔn)確、客觀地描述病變特點，給出病理診斷結(jié)論，并提出治療建議。病理診斷依據(jù)和流程05常見問題與解決方案切片厚薄不均可能是由于切片刀角度不當(dāng)或切片速度過快所致，需調(diào)整切片角度和速度。切片卷曲或折疊切片丟失或破碎可能是由于組織處理不當(dāng)或切片時操作不慎所致，需重新取材制作切片?？赡苁怯捎谇衅恫粔蜾h利或切片時力度不均勻所致，需及時磨刀或調(diào)整切片力度。切片質(zhì)量問題及改進(jìn)措施需根據(jù)染色劑的種類和濃度，掌握適當(dāng)?shù)娜旧珪r間。染色時間過短或過長需更換質(zhì)量好的染色劑，并注意染色劑的保存期限。染色劑質(zhì)量不佳或過期可能是由于染色后沖洗不徹底或染色劑濃度過高所致，需加強(qiáng)沖洗或降低染色劑濃度。脫色問題染色不均勻或脫色問題處理顯微鏡觀察中的誤差分析切片染色不均或脫色需重新染色或加強(qiáng)染色劑的濃度，確保切片染色均勻且不易脫色。切片位置不當(dāng)需重新調(diào)整切片位置，使病變組織處于視野中央。焦距未調(diào)好需調(diào)整顯微鏡的焦距，使物像清晰。06實驗安全與衛(wèi)生管理應(yīng)急處理措施制定應(yīng)急預(yù)案，包括應(yīng)急電話、應(yīng)急設(shè)備和應(yīng)急處理程序，確保在緊急情況下能夠迅速、有效地采取應(yīng)對措施。實驗室準(zhǔn)入制度確保只有經(jīng)過培訓(xùn)和授權(quán)的人員才能進(jìn)入實驗室?；瘜W(xué)品管理儲存和使用化學(xué)品時，必須遵循相關(guān)安全規(guī)定和程序，防止化學(xué)品泄漏和意外事故發(fā)生。實驗室安全規(guī)范及應(yīng)急處理措施手套選擇耐化學(xué)品、耐腐蝕的手套，確保手部皮膚不受化學(xué)品侵害。防護(hù)服穿著長袖、長褲和防護(hù)服，防止化學(xué)品濺到皮膚上。呼吸防護(hù)在有毒氣體或粉塵環(huán)境中，應(yīng)佩戴防毒面具或呼吸器，以保護(hù)呼吸道。眼部防護(hù)佩戴安全眼鏡或面罩，防止化學(xué)品濺入眼睛。個人防護(hù)裝備選擇與使用指南將廢棄物按照有害、無害、感染性等分類收集，防止交叉感染和環(huán)境