人類免疫缺陷病毒抗體檢測（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

人類免疫缺陷病毒抗體檢測（酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程**生物操作方法：將試劑盒平衡至室溫，取出所需的條板，剩余的即時封存。用去離子水合蒸餾水25倍稀釋濃縮洗滌液。將所需數(shù)量的條板固定于支架按順序編號設(shè)置樣品孔、外部對照孔、陽性對照孔和陰性對照孔每次實驗需設(shè)外部對照陽性對照2孔、陰性對照1孔。在樣品孔中加入100ul待測樣品，陰性、陽性對照及外部對照每孔加入100ul，輕拍混勻。置37℃溫育60分鐘。置洗板機用洗滌液充分洗滌5遍，扣干。每孔加入100ul酶標(biāo)記物，輕拍混勻，置37℃溫育30分鐘。重復(fù)步驟⑥。在所有孔內(nèi)加顯色A、顯色B劑各50ul，輕拍混勻，置37℃避光溫育30分鐘。每孔加入50ul終止液終止顯色反應(yīng)，用酶標(biāo)儀（雙波長450nm/630nm）測定各孔A值。結(jié)果判定：臨界值Cutoff＝0.1﹢陰性對照的平均A值（陰性對照的平均A值小于0.08按0.08計算，大于0.08按實際值計算），樣品的A值≥Cutoff值為艾滋病抗體陽性；樣品的A值〈Cutoff值為艾滋病抗體陰性。同時滿足以下條件的實驗是有效的。NC<0.080PCx>0.8，抗-艾滋病-2陽性對照OD值>0.3雙波長讀數(shù)，顯色劑空白≦0.040，單波長讀數(shù)，顯色劑空白≦0.080.計算COV：COV=PCxX10%（若PCx>2.5按2.5計算）初篩陽性者應(yīng)重新取樣進行雙盲復(fù)試，復(fù)試陽性者應(yīng)按照“全國艾滋病檢測管理規(guī)范”送艾滋病確認(rèn)實驗室進行相關(guān)確認(rèn)試驗。

**生物操作方法：配液：將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋。編號：將樣品對應(yīng)微孔板按序號編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照3孔，陽性對照1型，2型各1孔，空白對照1孔。（用雙波長檢測，可不設(shè)空白對照孔）。加樣：分別在相應(yīng)孔中加入待測樣品或陰性，陽性對照100ul.溫育：用封板膜封板后，置37±1℃溫育60±2分鐘。洗板：小心揭掉封板膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量擰干。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100ul，空白孔除外。溫育：用封板膜封板后，置37±1℃溫育30±1分鐘。洗板：操作同步驟5.顯色：每孔加入顯色劑A，B液各50ul，輕輕振蕩混勻，37±1℃避光顯色30±1分鐘。測定：每孔加終止液50ul，輕輕振蕩混勻，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。設(shè)定酶標(biāo)儀波長于450nm處（建議用雙波長450nm/600-650nm），用空白孔凋零后測定各孔A值。結(jié)果判讀：陰性對照孔A值≤0.10，陽性對照孔A值≥0.80，否則實驗無效。若有1孔陰性對照A值大于0.1應(yīng)舍棄；若兩孔或兩孔以上陰性對照A值大于0.1，實驗無效。陰性判定：樣品A值＜臨界值（CUTOFF）者為艾滋病抗體陰性。陽性判定：樣品A值≥臨界值（CUTFF）者為艾