細胞染色專題

關鍵詞：DAPI，胞漿，胞核，示蹤，細胞器飛躍的載體干貨|一眼就讓人愛了愛了的各色熒光染料合集在實驗中，為了能夠清楚地觀察到目標組織或細胞，通常會采用染色的方式進行直觀驗證。面對形態(tài)各異的組織和細胞，研究學者們想到了多種多樣的染色方法以佐證自己的實驗結果。但是實際操作中也會遇到各種各樣的的困難：選購的染料類不符合染色的細胞區(qū)域和應用類型；歷經(jīng)數(shù)月/年保存下來的樣本形式不符合預期染色實驗的要求；實驗儀器不符合熒光染料的拍攝要求，導致樣本和染料的浪費；染料的配色不準確，導致不能實現(xiàn)細胞的多方位染色。通常，細胞染色類型主要分為如下五大類，對應的染料類型如下：染色類型染料類型細胞核染色核染料胞漿染色胞漿染料胞膜染色膜染料細胞示蹤染色細胞示蹤染料區(qū)室和細胞器染色細胞器染料分類品名貨號描述核酸染料Ethidium

Homodimer-1

(EthD-1)

BMD0060溴乙啡錠二聚體是一種紅色的高親和性熒光核酸染料,檢測溶液中或者解體細胞中的核酸（DNA/RNA），不能穿過活細胞膜。Hoechst

33258BMD0061細胞核染色（DNA）

一般是細胞固定后再染色。Hoechst

33342

BMD0062細胞核染色（DNA）毒性更小，可活細胞直接染色。DAPI

BMD00634',6-二脒基-2-苯基吲哚是細胞核染色（DNA）。細胞質染料Calcein

AM

BMD0064活細胞染色5(6)-CFDA/5(6)-CFDA,

SE

BMD0066可對活細胞進行熒光標記的細胞示蹤染料，不僅可用于細胞增殖的體外實驗，還可用于追蹤細胞在體內的分裂增殖過程(酯酶活性)。細胞膜染料DiI

(DiIC18(3))

BMD0071橙色，親脂性膜染料DiO(DiOC18(3))

BMD0072綠色，親脂性膜染料DiD

(DiIC18(5))

BMD0073紅色，親脂性膜染料DiR

(DiIC18(7))

BMD0074深紅色，親脂性、近紅外膜染料，配合其他多色使用示蹤染料LiveCellTrackingKitKTA1002對活細胞示蹤，記錄細胞的生長、分裂和移動等活動區(qū)室細胞器染料TraKine?線粒體染色試劑盒KTC4003，KTC4004線粒體染色

TraKine?F-actin染色試劑盒及其染料KTC4008/9，BMD0082/83/84細胞骨架染色TraKine?

Pro

活細胞微管染色試劑盒(紅色、綠色)KTC4100，KTC4110活細胞微管探針TraKine?

Pro

活細胞溶酶體染色試劑盒(紅色、綠色)KTC4200，KTC4210活細胞溶酶體探針而樣本制備對于細胞染色效果也是至關重要，如下為四種樣本類型的主要處理方法：對于貼壁細胞，有2種方法：

先將潔凈的蓋玻片在70%乙醇中進行浸泡處理，然后用干凈無菌的鑷子放置到培養(yǎng)皿中，用無菌PBS洗去殘留的乙醇。待細胞接近長成單層后取出蓋玻片，操作小心，防止細胞脫片（可用多聚賴氨酸浸泡蓋玻片）。將細胞在培養(yǎng)皿或者孔板內鋪板，控制細胞生長密度后進行染色。對于懸浮細胞，有2種方法：先在懸浮液中進行固定步驟，然后把細胞滴加在載玻片上，干燥后細胞會緊貼在載玻片上。先在懸浮液中進行固定和染色步驟，離心洗脫，然后用移液管移至盒式玻片進行后續(xù)染色步驟。對于冷凍切片：切片放置在載玻片上后，可以直接進行固定等后續(xù)操作。

對于石蠟切片：免疫熒光中石蠟切片較少，要先進行脫蠟和抗原修復處理。不同染料對儀器類型的選擇性也是千差萬別的，如下為細胞染色實驗的常用儀器：為了實現(xiàn)細胞的多方位染色，我們常常需要進行多種染料的配合染色，其中最為經(jīng)典的是細胞器與細胞核染料的多重染色，如下圖所示：Q1:TraKine?Pro活細胞微管染色試劑盒（綠色熒光）與Hoechst33342配合染色：1.Hoechst33342與該染料可以配合使用，且都幾乎無毒性，不影響細胞存活；2.這個tubulin-green染料熒光是比較穩(wěn)定的，熒光激發(fā)累計時長可以到達350s以上，拍200幀以上的圖片。Hoechst33342的穩(wěn)定性更高一些。Q2:Trakine?pro染料是否可以和普通的染料一起染？是否會影響探針透膜？如果可以，建議染色順序怎樣，染色步驟是否需要調整？Trakine?pro探針可以和普通探針一起染色，但針對需要用到buffer的探針，要先孵育需要用到buffer的探針，再孵育其它探針。針對不需要buffer的透膜探針，可以和客戶想用的其它探針一起孵育。總結：當想要兩個或三個探針共標一個細胞的時候，所有用到buffer的探針可以一起先孵育（可共用buffer），自身透膜的探針后孵育。細胞染色技術還有很大的發(fā)展空間，將來會應用到更多的實驗領域，在生物行業(yè)發(fā)展中具有舉足輕重的地位，正持續(xù)獲得越來越多生物學家的關注。abbkine的技術專家為了給廣大讀者提供學習生物知識的平臺，經(jīng)過不懈努力，將多種高端生物實驗的干貨整理出來，后期陸續(xù)在微信公眾號中刊登，請廣大熱愛科學的讀者持續(xù)關注Abbkine公眾號。Abbkine專注于蛋白學和細胞學領域，致力于創(chuàng)新和研發(fā)各類抗體、蛋白質、分析試劑與試劑盒，以期成為生命科學研究發(fā)展、藥物研發(fā)等領域的關鍵推動者。我們?yōu)槟峁┑鞍缀兔庖哐芯坑脩糇钕矏鄣漠a(chǎn)品，從免疫學基礎產(chǎn)品，如蛋白提取定量，到免疫學實驗的內參標簽抗體、一抗及二抗等；細胞研究用戶最喜愛的產(chǎn)品，從用于檢測細胞狀態(tài)的染料及試劑盒，細胞器提取試劑盒，細胞亞結構染色示蹤及細胞代謝檢測產(chǎn)品，到用于細胞培養(yǎng)的細胞因子及蛋白類檢測試劑盒，只為助力您的研究事業(yè)！產(chǎn)品推薦BMD0060，BMD0061，BMD0062，BMD0063，BMD0064，B