尿中硫氰酸鹽的吡啶巴比妥分光光度法

尿中硫氰酸鹽的吡啶巴比妥分光光度法1.原理微酸性條件下，尿中硫氰酸鹽和氯胺T反應生成氯化氰。它使吡啶環(huán)裂開，產(chǎn)生戊烯二醛。戊烯二醛于巴比妥酸作用，生成紫紅色染料，其色度與硫氰酸鹽含量成正比，在580nm波長處比色定量。2.儀器2.1聚蓋聚乙烯塑料瓶，500ml。2.2尿比重計。2.3具塞比色管，10ml。2.4分光光度計。3.試劑實驗用水為蒸餾水。3.1鹽酸溶液，1+3。3.2磷酸鹽緩沖液（pH=7）：溶解2.79g磷酸二氫鉀和4.14g磷酸氫二鈉于少量水中，并稀釋至1L。3.3氯胺T溶液，10g/L。3.4吡啶—巴比妥酸溶液：溶解0.18g巴比妥酸于3ml吡啶及10ml鹽酸溶液中，用水稀釋至100ml（臨用前配置）。3.5硫氰酸鹽標準溶液：準確稱取0.1673g已烘干的硫氰酸鉀（KSCN），溶于少量水中，定量轉(zhuǎn)移入100ml容量瓶中，并稀釋至刻度。此溶液1.0mg/ml硫氰酸鹽標準儲備液。存放普通冰箱中，可使用1個月。臨用前，用水分別稀釋為10.0?μg/ml標準溶液（A）和2.0g/μgl標準溶液（B）。4.樣品的采集、運輸和保存用具蓋聚乙烯塑料瓶采集班后尿，搖勻，盡快測量比重。于4h內(nèi)測定完畢。5.分析步驟5.1樣品處理：吸取0.1ml新鮮尿液樣于具塞比色管中，供測定。5.2標準曲線的繪制：取7個具塞比色管，分別加入0、0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml標準溶液（A），第1管除外，各管加0.10ml正常人混合尿，配置成0、0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0μg硫氰酸鹽標準系列。各管加入2ml吡啶—巴比妥酸溶液，混勻，于室溫（室溫低于25℃時，置于25℃恒溫箱中）放置20min，加水至5ml，混勻。于580nm波長處，用10nm比色杯，以第一管為參比，測量吸光度。以硫酸氫鹽的含量（μg）對相應吸光度繪制標準曲線。5.3樣品測定：用測定標準系列的操作條件，測定樣品溶液。由標準曲線得硫氰酸鹽的含量（μg）。6.計算按式（9-42）計算尿中硫氰酸鹽的濃度：C=m/V×k（9-42）式中：C——尿中硫氰酸鹽的濃度，mg/L；m——由標準曲線得硫氰酸鹽的含量，μg；V——分析時所用的尿樣體積，ml；k——尿樣換算成標準比重下濃度的校正系數(shù)。7.說明7.1本法的最低檢測濃度為1mg/L（按取0.1ml尿樣計）；測定范圍為0.1-2.0μg；相對標準偏差為3.25%-6.73%（硫氰酸鹽的含量為0.2-2.0μg，n=6）；尿樣加標回收率為97.1%-99.8%（加標量為0.2、0.5、1.0μg，n=6）。7.2顯色溫度應保持在25℃以上。吡啶-巴比妥酸溶液應于臨用前配置，放置時間長會影響吸光度。氰化物進入人體后，大部分與體內(nèi)的硫結(jié)合為硫氰酸鹽，從尿中排除，一小部分仍以CNˉ的形式排除。CNˉ也同樣顯色