2025年高考生物一輪復(fù)習(xí)之基因工程

第1頁（共1頁）2025年高考生物一輪復(fù)習(xí)之基因工程一．選擇題（共15小題）1．γ﹣氨基丁酸在醫(yī)藥等領(lǐng)域有重要的應(yīng)用價值。利用L﹣谷氨酸脫羧酶（GadB）催化L﹣谷氨酸脫羧是高效生產(chǎn)γ﹣氨基丁酸的重要途徑之一。研究人員采用如圖方法將釀酒酵母S的L﹣谷氨酸脫羧酶基因（gadB）導(dǎo)入生產(chǎn)菌株E.coliA，構(gòu)建了以L﹣谷氨酸鈉為底物高效生產(chǎn)γ﹣氨基丁酸的菌株E.coliB。下列敘述正確的是（）A．上圖表明，可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadB B．E.coliB發(fā)酵生產(chǎn)γ﹣氨基丁酸時，L﹣谷氨酸鈉的作用是供能 C．E.coliA和E.coliB都能高效降解γ﹣氨基丁酸 D．可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ構(gòu)建重組質(zhì)粒2．下列關(guān)于“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗的敘述，錯誤的是（）A．實(shí)驗中如果將研磨液更換為蒸餾水，DNA提取的效率會降低 B．利用DNA和蛋白質(zhì)在酒精中的溶解度差異，可初步分離DNA C．DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同，該原理可用于純化DNA粗提物 D．將溶解的DNA粗提物與二苯胺試劑反應(yīng)，可檢測溶液中是否含有蛋白質(zhì)雜質(zhì)3．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗，下列說法正確的是（）A．整個提取過程中可以不使用離心機(jī) B．研磨液在4℃冰箱中放置幾分鐘后，應(yīng)充分搖勻再倒入燒杯中 C．鑒定過程中DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變 D．僅設(shè)置一個對照組不能排除二苯胺加熱后可能變藍(lán)的干擾4．制備熒光標(biāo)記的DNA探針時，需要模板、引物、DNA聚合酶等。在只含大腸桿菌DNA聚合酶、擴(kuò)增緩沖液、H2O和4種脫氧核苷酸（dCTP、dTTP、dGTP和堿基被熒光標(biāo)記的dATP）的反應(yīng)管①～④中，分別加入如表所示的適量單鏈DNA。已知形成的雙鏈DNA區(qū)遵循堿基互補(bǔ)配對原則，且在本實(shí)驗的溫度條件下不能產(chǎn)生小于9個連續(xù)堿基對的雙鏈DNA區(qū)。能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針的反應(yīng)管有（）反應(yīng)管加入的單鏈DNA①5′﹣GCCGATCTTTATA﹣3′3′﹣GACCGGCTAGAAA﹣5′②5′﹣AGAGCCAATTGGC﹣3′③5′﹣ATTTCCCGATCCG﹣3′3′﹣AGGGCTAGGCATA﹣5′④5′﹣TTCACTGGCCAGT﹣3′A．①② B．②③ C．①④ D．③④5．某同學(xué)擬用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應(yīng)限制酶的識別序列和切割位點(diǎn)）和質(zhì)粒進(jìn)行切割、連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體。限制酶的切割位點(diǎn)如圖所示。下列重組表達(dá)載體構(gòu)建方案合理且效率最高的是（）A．質(zhì)粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA連接酶連接 B．質(zhì)粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA連接酶連接 C．質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA連接酶連接 D．質(zhì)粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA連接酶連接6．用氨芐青霉素抗性基因（AmpR）、四環(huán)素抗性基因（TetR）作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒，構(gòu)建基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒），并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述錯誤的是（）A．若用HindⅢ酶切，目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同 B．若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四環(huán)素）培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有目的基因 C．若用SphⅠ酶切，可通過DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否 D．若用SphⅠ酶切，攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芐青霉素）和Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落7．某小組通過PCR（假設(shè)引物長度為8個堿基短于實(shí)際長度）獲得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶進(jìn)行酶切（如圖），再用所得片段成功構(gòu)建了基因表達(dá)載體。下列敘述錯誤的是（）A．其中一個引物序列為5'﹣TGCGCAGT﹣3' B．步驟①所用的酶是SpeⅠ和CfoⅠ C．用步驟①的酶對載體進(jìn)行酶切，至少獲得了2個片段 D．酶切片段和載體連接時，可使用E.coli連接酶或T4連接酶8．抗蟲作物對害蟲的生存產(chǎn)生壓力，會使害蟲種群抗性基因頻率迅速提高，導(dǎo)致作物的抗蟲效果逐漸減弱。為使轉(zhuǎn)基因抗蟲棉保持抗蟲效果，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上會采取一系列措施。以下措施不能實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)的是（）A．在轉(zhuǎn)基因抗蟲棉種子中混入少量常規(guī)種子 B．大面積種植轉(zhuǎn)基因抗蟲棉，并施用殺蟲劑 C．轉(zhuǎn)基因抗蟲棉與小面積的常規(guī)棉間隔種植 D．轉(zhuǎn)基因抗蟲棉大田周圍設(shè)置常規(guī)棉隔離帶9．某研究小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將綠色熒光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如圖甲所示。實(shí)驗得到能正常表達(dá)兩種蛋白質(zhì)的雜合子雌雄小鼠各1只，交配以期獲得Gata3﹣GFP基因純合子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生小鼠的基因型，設(shè)計了引物1和引物2用于PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖乙所示。下列敘述正確的是（）A．Gata3基因的啟動子無法控制GFP基因的表達(dá) B．翻譯時先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白 C．2號條帶的小鼠是野生型，4號條帶的小鼠是Gata3﹣GFP基因純合子 D．若用引物1和引物3進(jìn)行PCR，能更好地區(qū)分雜合子和純合子10．抗蟲和耐除草劑玉米雙抗12﹣5是我國自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因品種。為給監(jiān)管轉(zhuǎn)基因生物安全提供依據(jù)，采用PCR方法進(jìn)行目的基因監(jiān)測，反應(yīng)程序如圖所示。下列敘述正確的是（）A．預(yù)變性過程可促進(jìn)模板DNA邊解旋邊復(fù)制 B．后延伸過程可使目的基因的擴(kuò)增更加充分 C．延伸過程無需引物參與即可完成半保留復(fù)制 D．轉(zhuǎn)基因品種經(jīng)檢測含有目的基因后即可上市11．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗，下列說法錯誤的是（）A．過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解 B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀 C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色 D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)12．關(guān)于生物技術(shù)的安全與倫理問題在我國相關(guān)法規(guī)明令禁止的是（）A．試管動物的培育 B．轉(zhuǎn)基因食品的生產(chǎn) C．治療性克隆的研究 D．生物武器的發(fā)展和生產(chǎn)13．以哺乳動物為研究對象的生物技術(shù)已獲得了長足的進(jìn)步。對生物技術(shù)應(yīng)用于人類，在安全與倫理方面有不同的觀點(diǎn)，下列敘述正確的是（）A．試管嬰兒技術(shù)應(yīng)全面禁止 B．治療性克隆不需要監(jiān)控和審查 C．生殖性克隆不存在倫理道德方面的風(fēng)險 D．我國不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗14．下列相關(guān)實(shí)驗操作正確的是（）A．配制PCR反應(yīng)體系時，加入等量的4種核糖核苷酸溶液作為擴(kuò)增原料 B．利用添加核酸染料的凝膠對PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳后，在紫外燈下觀察結(jié)果 C．將配制的酵母培養(yǎng)基煮沸并冷卻后，在酒精燈火焰旁倒平板 D．將接種環(huán)燒紅，迅速蘸取酵母菌液在培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，獲得單菌落15．關(guān)于采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物的實(shí)驗，下列敘述正確的是（）A．瓊脂糖凝膠濃度的選擇需考慮待分離DNA片段的大小 B．凝膠載樣緩沖液中指示劑的作用是指示DNA分子的具體位置 C．在同一電場作用下，DNA片段越長，向負(fù)極遷移速率越快 D．瓊脂糖凝膠中的DNA分子可在紫光燈下被檢測出來二．解答題（共5小題）16．研究者用以蔗糖為唯一碳源的液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)真菌A的野生型（含NV基因）、突變體（NV基因突變）和轉(zhuǎn)基因菌株（轉(zhuǎn)入NV基因），檢測三種菌株NV酶的生成與培養(yǎng)液中的葡萄糖含量，結(jié)果如表所示（表中“+”表示有，“—”表示無）。檢測用菌株蔗糖NV酶葡萄糖（培養(yǎng)液中）野生型+++野生型———突變體+——轉(zhuǎn)基因菌株+++回答下列問題。（1）據(jù)表可推測誘導(dǎo)了NV基因表達(dá)。NV酶的作用是。檢測NV酶活性時，需測定的指標(biāo)是（答出1點(diǎn)即可）。（2）表中突變體由T﹣DNA隨機(jī)插入野生型菌株基因組DNA篩選獲得。從野生型與突變體中分別提取基因組DNA作為模板，用與（選填“T﹣DNA”或“NV基因”）配對的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。若突變體擴(kuò)增片段長度（選填“＞”“＝”或“＜”）野生型擴(kuò)增片段長度，則表明突變體構(gòu)建成功，從基因序列分析其原因是。（3）為進(jìn)一步驗證NV基因的功能，表中的轉(zhuǎn)基因菌株是將NV基因?qū)爰?xì)胞獲得的。在構(gòu)建NV基因表達(dá)載體時，需要添加新的標(biāo)記基因，原因是。17．學(xué)習(xí)以下材料，回答（1）～（4）題。篩選組織特異表達(dá)的基因篩選組織特異表達(dá)的基因，對研究細(xì)胞分化和組織、器官的形成機(jī)制非常重要?！霸鰪?qiáng)子捕獲”是篩選組織特異表達(dá)基因的一種有效方法。真核生物的基本啟動子位于基因5′端附近，沒有組織特異性，本身不足以啟動基因表達(dá)。增強(qiáng)子位于基因上游或下游，與基本啟動子共同組成基因表達(dá)的調(diào)控序列?；蚬こ趟帽磉_(dá)載體中的啟動子，實(shí)際上包含增強(qiáng)子和基本啟動子。很多增強(qiáng)子具有組織特異的活性，它們與特定蛋白結(jié)合后激活基本啟動子，驅(qū)動相應(yīng)基因在特定組織中表達(dá)（圖A）。基于上述調(diào)控機(jī)理，研究者構(gòu)建了由基本啟動子和報告基因組成的“增強(qiáng)子捕獲載體”（圖B），并轉(zhuǎn)入受精卵。捕獲載體會隨機(jī)插入基因組中，如果插入位點(diǎn)附近存在有活性的增強(qiáng)子，則會激活報告基因的表達(dá)（圖C）。獲得了一系列分別在不同組織中特異表達(dá)報告基因的個體后，研究者提取每個個體的基因組DNA，通過PCR擴(kuò)增含有捕獲載體序列的DNA片段。對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序后，與相應(yīng)的基因組序列比對，即可確定載體的插入位點(diǎn)，進(jìn)而鑒定出相應(yīng)的基因。研究者利用各種遺傳學(xué)手段，對篩選得到的基因進(jìn)行突變、干擾或過表達(dá)，檢測個體表型的改變，研究其在細(xì)胞分化和個體發(fā)育中的作用，從而揭示組織和器官形成的機(jī)理。（1）在個體發(fā)育中，來源相同的細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生的過程稱為細(xì)胞分化，分化是基因的結(jié)果。（2）對文中“增強(qiáng)子”的理解，錯誤的是（單選）。A．增強(qiáng)子是含有特定堿基序列的DNA片段B．增強(qiáng)子、基本啟動子和它們調(diào)控的基因位于同一條染色體上C．一個增強(qiáng)子只能作用于一個基本啟動子D．很多增強(qiáng)子在不同組織中的活性不同（3）研究者將增強(qiáng)子捕獲技術(shù)應(yīng)用于斑馬魚，觀察到報告基因在某幼體的心臟中特異表達(dá)。鑒定出捕獲載體的插入位點(diǎn)后，發(fā)現(xiàn)位點(diǎn)附近有兩個基因G和H，為了確定這兩個基因是否為心臟特異表達(dá)的基因，應(yīng)檢測。（4）真核生物編碼蛋白的序列只占基因組的很少部分，因而在絕大多數(shù)表達(dá)報告基因的個體中，增強(qiáng)子捕獲載體的插入位點(diǎn)位于基因外部，不會造成基因突變。研究者對圖B所示載體進(jìn)行了改造，期望改造后的載體隨機(jī)插入基因組后，在“捕獲”增強(qiáng)子的同時，也造成該增強(qiáng)子所調(diào)控的基因發(fā)生突變，以研究基因功能。請畫圖表示改造后的載體，并標(biāo)出各部分名稱（略）。18．新城疫病毒可引起家禽急性敗血性傳染病，我國科學(xué)家將該病毒相關(guān)基因改造為r2HN，使其在水稻胚乳特異表達(dá)，制備獲得r2HN疫苗，并對其免疫效果進(jìn)行了檢測?；卮鹣铝袉栴}：（1）實(shí)驗所用載體的部分結(jié)構(gòu)及其限制酶識別位點(diǎn)如圖1所示。其中GtP為啟動子，若使r2HN僅在水稻胚乳表達(dá)，GtP應(yīng)為啟動子。Nos為終止子，其作用為。r2HN基因內(nèi)部不含載體的限制酶識別位點(diǎn)。因此，可選擇限制酶和對r2HN基因與載體進(jìn)行酶切，用于表達(dá)載體的構(gòu)建。（2）利用方法將r2HN基因?qū)胨居鷤M織。為檢測r2HN表達(dá)情況，可通過PCR技術(shù)檢測，通過技術(shù)檢測是否翻譯出r2HN蛋白。（3）獲得轉(zhuǎn)基因植株后，通常選擇單一位點(diǎn)插入目的基因的植株進(jìn)行研究。此類植株自交一代后，r2HN純合體植株的占比為。選擇純合體進(jìn)行后續(xù)研究的原因是。（4）制備r2HN疫苗后，為研究其免疫效果，對實(shí)驗組雞進(jìn)行接種，對照組注射疫苗溶劑。檢測兩組雞體內(nèi)抗新城疫病毒抗體水平和特異應(yīng)答的CD8+T細(xì)胞（細(xì)胞毒性T細(xì)胞）水平，結(jié)果如圖2所示。據(jù)此分析，獲得的r2HN疫苗能夠成功激活雞的免疫和免疫。（5）利用水稻作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)r2HN疫苗的優(yōu)點(diǎn)是。（答出兩點(diǎn)即可）19．研究發(fā)現(xiàn)基因L能夠通過脫落酸信號途徑調(diào)控大豆的逆境響應(yīng)。利用基因工程技術(shù)編輯基因L，可培育耐鹽堿大豆品系。在載體上的限制酶BsaⅠ切點(diǎn)處插入大豆基因L的向?qū)NA序列，將載體導(dǎo)入大豆細(xì)胞后，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可引導(dǎo)核酸酶特異性結(jié)合基因組上的目標(biāo)序列并發(fā)揮作用。載體信息、目標(biāo)基因L部分序列及相關(guān)結(jié)果等如圖所示。（1）用PCR技術(shù)從大豆基因組DNA中擴(kuò)增目標(biāo)基因L時，所用的引物越短，引物特異性越（填“高”或“低”）。限制酶在切開DNA雙鏈時，形成的單鏈突出末端為黏性末端，若用BsaⅠ酶切大豆基因組DNA，理論上可產(chǎn)生的黏性末端最多有種。載體信息如圖甲所示，經(jīng)BsaⅠ酶切后，載體上保留的黏性末端序列應(yīng)為5′﹣﹣3′和5′﹣﹣3′。（2）重組載體通過農(nóng)桿菌導(dǎo)入大豆細(xì)胞，使用抗生素篩選到具有該抗生素抗性的植株①～④。為了鑒定基因編輯是否成功，以上述抗性植株的DNA為模板，通過PCR擴(kuò)增目標(biāo)基因L，部分序列信息及可選用的酶切位點(diǎn)如圖乙所示，PCR產(chǎn)物完全酶切后的電泳結(jié)果如圖丙所示。據(jù)圖可判斷選用的限制酶是，其中純合的突變植株是（填序號）。（3）實(shí)驗中獲得1株基因L成功突變的純合植株，該植株具有抗生素抗性，檢測發(fā)現(xiàn)其體細(xì)胞中只有1條染色體有T﹣DNA插入。用抗生素篩選這個植株的自交子代，其中突變位點(diǎn)純合且對抗生素敏感的植株所占比例為，篩選出的敏感植株可用于后續(xù)的品種選育。20．將天然Ti質(zhì)粒改造成含有Vir基因的輔助質(zhì)粒（輔助T﹣DNA轉(zhuǎn)移）和不含有Vir基因、含有T﹣DNA的穿梭質(zhì)粒，共同轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，可提高轉(zhuǎn)化效率。細(xì)菌和棉花對密碼子偏好不同，為提高翻譯效率，增強(qiáng)棉花抗病蟲害能力，進(jìn)行如下操作?；卮鹣铝袉栴}。注：F1﹣F3，R1﹣R3表示引物；T﹣DNA﹣LB表示左邊界；T﹣DNA﹣RB表示右邊界；Ori表示復(fù)制原點(diǎn)；KanR表示卡那霉素抗性基因；HygBR表示潮霉素B抗性基因。（1）從蘇云金桿菌提取DNA時，需加入蛋白酶，其作用是。提取過程中加入體積分?jǐn)?shù)為95%的預(yù)冷酒精，其目的是。（2）本操作中獲取目的基因的方法是和。（3）穿梭質(zhì)粒中p35s為啟動子，其作用是，驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄；插入兩個p35s啟動子，其目的可能是。（4）根據(jù)圖中穿梭質(zhì)粒上的KanR和HygBR兩個標(biāo)記基因的位置，用基因?qū)?yīng)的抗生素初步篩選轉(zhuǎn)化的棉花愈傷組織。（5）為檢測棉花植株是否導(dǎo)入目的基因，提取棉花植株染色體DNA作模板，進(jìn)行PCR，應(yīng)選用的引物是和。（6）本研究采用的部分生物技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程，理由是（單選）。A.通過含有雙質(zhì)粒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化棉花細(xì)胞B.將蘇云金桿菌Bt基因?qū)朊藁?xì)胞中表達(dá)C.將1﹣1362基因序列改變?yōu)槊藁?xì)胞偏好密碼子的基因序列D.用1﹣1362合成基因序列和1363﹣1848天然基因序列獲得改造的抗蟲蛋白

2025年高考生物一輪復(fù)習(xí)之基因工程參考答案與試題解析一．選擇題（共15小題）1．γ﹣氨基丁酸在醫(yī)藥等領(lǐng)域有重要的應(yīng)用價值。利用L﹣谷氨酸脫羧酶（GadB）催化L﹣谷氨酸脫羧是高效生產(chǎn)γ﹣氨基丁酸的重要途徑之一。研究人員采用如圖方法將釀酒酵母S的L﹣谷氨酸脫羧酶基因（gadB）導(dǎo)入生產(chǎn)菌株E.coliA，構(gòu)建了以L﹣谷氨酸鈉為底物高效生產(chǎn)γ﹣氨基丁酸的菌株E.coliB。下列敘述正確的是（）A．上圖表明，可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadB B．E.coliB發(fā)酵生產(chǎn)γ﹣氨基丁酸時，L﹣谷氨酸鈉的作用是供能 C．E.coliA和E.coliB都能高效降解γ﹣氨基丁酸 D．可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ構(gòu)建重組質(zhì)粒【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用．【專題】模式圖；基因工程．【答案】A【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：1、目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——PCR檢測等技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA——PCR檢測等技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原—抗體雜交技術(shù)。（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！窘獯稹拷猓篈、根據(jù)圖示可知，運(yùn)用PCR技術(shù)可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadB，A正確；B、L﹣谷氨酸脫羧酶（GadB）催化L﹣谷氨酸脫羧是高效生產(chǎn)γ﹣氨基丁酸，E.coliB中表達(dá)L﹣谷氨酸脫羧酶（GadB），從而發(fā)酵生產(chǎn)γ﹣氨基丁酸，該過程中L﹣谷氨酸鈉是反應(yīng)原料，而非起供能作用，B錯誤；C、題干中E.coliA和E.coliB均為產(chǎn)生γ﹣氨基丁酸的菌種，而不是高效降解γ﹣氨基丁酸的菌種，C錯誤；D、根據(jù)圖示，利用NcoⅠ和KpnⅠ對質(zhì)粒和目的基因進(jìn)行雙酶切，從而構(gòu)建重組質(zhì)粒，不一定可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ構(gòu)建重組質(zhì)粒（視質(zhì)粒和目的基因所在DNA分子中酶切位點(diǎn)的情況而定），D錯誤。故選：A?！军c(diǎn)評】本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生理解識記有關(guān)技術(shù)的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能將教材中的知識結(jié)合題中信息進(jìn)行遷移應(yīng)用。2．下列關(guān)于“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗的敘述，錯誤的是（）A．實(shí)驗中如果將研磨液更換為蒸餾水，DNA提取的效率會降低 B．利用DNA和蛋白質(zhì)在酒精中的溶解度差異，可初步分離DNA C．DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同，該原理可用于純化DNA粗提物 D．將溶解的DNA粗提物與二苯胺試劑反應(yīng)，可檢測溶液中是否含有蛋白質(zhì)雜質(zhì)【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定．【專題】正推法；基因工程．【答案】D【分析】DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精；DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍(lán)色。【解答】解：A、研磨液加入了NaCl溶液，有利于DNA的溶解，換為蒸餾水，DNA提取的效率會降低，A正確；B、DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精，因此，利用DNA和蛋白質(zhì)在酒精中的溶解度差異，可初步分離DNA，B正確；C、DNA在NaCl溶液中的溶解度隨著NaCl濃度的變化而改變，因此可用不同濃度的NaCl溶液對DNA進(jìn)行粗提取，C正確；D、在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍(lán)色，二苯胺試劑用于鑒定DNA，D錯誤。故選：D?！军c(diǎn)評】本題考查DNA的粗提取與鑒定的相關(guān)知識，意在考查考生理解所學(xué)知識的要點(diǎn)，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。3．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗，下列說法正確的是（）A．整個提取過程中可以不使用離心機(jī) B．研磨液在4℃冰箱中放置幾分鐘后，應(yīng)充分搖勻再倒入燒杯中 C．鑒定過程中DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變 D．僅設(shè)置一個對照組不能排除二苯胺加熱后可能變藍(lán)的干擾【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定．【專題】實(shí)驗基本操作；基因工程．【答案】A【分析】DNA的粗提取與鑒定的實(shí)驗原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同，利用這一特點(diǎn)可以選擇適當(dāng)濃度的鹽溶液可以將DNA溶解或析出，從而達(dá)到分離的目的；②DNA不溶于酒精溶液，細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶解于酒精，利用這一原理可以將蛋白質(zhì)和DNA進(jìn)一步分離；③在沸水浴的條件下DNA遇二苯胺會呈現(xiàn)藍(lán)色。【解答】解：A、研磨后，可以用過濾的方法得到上清液，可以不使用離心機(jī)，A正確；B、研磨液在4℃冰箱中放置的目的是為了獲得上清液，不應(yīng)再充分搖勻，B錯誤；C、鑒定過程中的沸水浴加熱可能使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，C錯誤；D、該實(shí)驗中，為排除二苯胺加熱后可能變藍(lán)對實(shí)驗結(jié)果的干擾，設(shè)置加二苯胺不加DNA一個對照組即可，D錯誤。故選：A?！军c(diǎn)評】本題考查“DNA的粗提取和鑒定”的相關(guān)知識，意在考查考生的理解能力和實(shí)驗與探究能力，進(jìn)一步考查生命觀念、科學(xué)思維和科學(xué)探究等核心素養(yǎng)。4．制備熒光標(biāo)記的DNA探針時，需要模板、引物、DNA聚合酶等。在只含大腸桿菌DNA聚合酶、擴(kuò)增緩沖液、H2O和4種脫氧核苷酸（dCTP、dTTP、dGTP和堿基被熒光標(biāo)記的dATP）的反應(yīng)管①～④中，分別加入如表所示的適量單鏈DNA。已知形成的雙鏈DNA區(qū)遵循堿基互補(bǔ)配對原則，且在本實(shí)驗的溫度條件下不能產(chǎn)生小于9個連續(xù)堿基對的雙鏈DNA區(qū)。能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針的反應(yīng)管有（）反應(yīng)管加入的單鏈DNA①5′﹣GCCGATCTTTATA﹣3′3′﹣GACCGGCTAGAAA﹣5′②5′﹣AGAGCCAATTGGC﹣3′③5′﹣ATTTCCCGATCCG﹣3′3′﹣AGGGCTAGGCATA﹣5′④5′﹣TTCACTGGCCAGT﹣3′A．①② B．②③ C．①④ D．③④【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】對比分析法；PCR技術(shù)．【答案】D【分析】多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段：1、PCR原理：目的基因DNA受熱變性后解為單鏈，引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合；然后以單鏈DNA為模板，在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸，即將4種脫氧核苷酸加到引物的3'端，如此重復(fù)循環(huán)多次。由于延伸后得到的產(chǎn)物又可以作為下一個循環(huán)的模板，因而每一次循環(huán)后目的基因的量可以增加一倍，即呈指數(shù)形式擴(kuò)增（約為2n，其中n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）。2、PCR反應(yīng)過程是：變性→復(fù)性→延伸。3、結(jié)果：上述三步反應(yīng)完成后，一個DNA分子就變成了兩個DNA分子，隨著重復(fù)次數(shù)的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反應(yīng)過程都是在PCR擴(kuò)增儀中完成的?！窘獯稹拷猓篈BCD、分析反應(yīng)管①～④中分別加入的適量單鏈DNA可知，①中兩條單鏈DNA分子之間具有互補(bǔ)的序列，但雙鏈DNA區(qū)之外的3'端無模板，因此無法進(jìn)行DNA合成，不能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針；②中單鏈DNA分子內(nèi)具有自身互補(bǔ)的序列，由于在本實(shí)驗的溫度條件下不能產(chǎn)生小于9個連續(xù)堿基對的雙鏈DNA區(qū)，故一條單鏈DNA分子不發(fā)生自身環(huán)化，但兩條鏈可以形成雙鏈DNA區(qū)，由于DNA合成的鏈中不含堿基A，不能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針；③中兩條單鏈DNA分子之間具有互補(bǔ)的序列，且雙鏈DNA區(qū)之外的3'端有模板和堿基T，因此進(jìn)行DNA合成能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針；④中單鏈DNA分子內(nèi)具有自身互補(bǔ)的序列，一條單鏈DNA分子不發(fā)生自身環(huán)化，兩條鏈可以形成雙鏈DNA區(qū)，且雙鏈DNA區(qū)之外的3'端有模板和堿基T，因此進(jìn)行DNA合成能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針。綜上，能得到帶有熒光標(biāo)記的DNA探針的反應(yīng)管有：③④。故選：D。【點(diǎn)評】本題考查PCR的相關(guān)知識，意在考查考生的理解能力、獲取信息的能力和綜合運(yùn)用能力，進(jìn)一步考查生命觀念和科學(xué)思維。5．某同學(xué)擬用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應(yīng)限制酶的識別序列和切割位點(diǎn)）和質(zhì)粒進(jìn)行切割、連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體。限制酶的切割位點(diǎn)如圖所示。下列重組表達(dá)載體構(gòu)建方案合理且效率最高的是（）A．質(zhì)粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA連接酶連接 B．質(zhì)粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA連接酶連接 C．質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA連接酶連接 D．質(zhì)粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA連接酶連接【考點(diǎn)】基因表達(dá)載體的構(gòu)建．【專題】正推法；基因工程．【答案】C【分析】限制酶選擇原則：（1）根據(jù)目的基因兩端的限制酶識別和切割位點(diǎn)確定限制酶種類具體原則：應(yīng)選擇切點(diǎn)位于目的基因兩端的，不能位于目的基因內(nèi)部，防止破壞目的基因，同時為避免目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化或反向連接，可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒。（2）根據(jù)質(zhì)粒特點(diǎn)確定限制酶種類具體原則：①保證切割的黏性末端與目的基因的相同，以便兩者能夠連接。②保證切割后的質(zhì)粒至少保留一個標(biāo)記基因，以便進(jìn)行篩選；保留復(fù)制原點(diǎn)，以便在受體細(xì)胞中維持穩(wěn)定和表達(dá)?！窘獯稹拷猓篈、限制酶3切割后的末端是平末端，E.coliDNA連接酶連接的是黏性末端應(yīng)用T4DNA連接酶連接，A錯誤；B、據(jù)圖可知，限制酶3切割后的末端是平末端，而限制酶1切割后的末端是黏性末端，若用兩種酶分別切割質(zhì)粒和目的基因，會導(dǎo)致DNA連接酶無法連接，B錯誤；C、質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割，可避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和反向連接，且兩者均形成黏性末端，此后再用T4DNA連接酶連接，可構(gòu)建重組表達(dá)載體，效率較高，C正確；D、限制酶4會破壞質(zhì)粒上的標(biāo)記基因（抗生素抗性基因），故不能選擇該酶進(jìn)行切割，D錯誤。故選：C?！军c(diǎn)評】本題考查限制酶及基因表達(dá)載體構(gòu)建的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的理解能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。6．用氨芐青霉素抗性基因（AmpR）、四環(huán)素抗性基因（TetR）作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒，構(gòu)建基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒），并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述錯誤的是（）A．若用HindⅢ酶切，目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同 B．若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四環(huán)素）培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有目的基因 C．若用SphⅠ酶切，可通過DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否 D．若用SphⅠ酶切，攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芐青霉素）和Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落【考點(diǎn)】基因表達(dá)載體的構(gòu)建．【專題】模式圖；基因工程．【答案】D【分析】據(jù)圖分析可知，氨芐青霉素抗性基因（AmpR）內(nèi)含有ScaⅠ和PvuⅠ的酶切位點(diǎn)，四環(huán)素抗性基因（TetR）內(nèi)含有HindⅢ、SphⅠ和SalⅠ的酶切位點(diǎn)?！窘獯稹拷猓篈、若只用HindⅢ一種酶切質(zhì)粒和目的基因，則產(chǎn)生相同的黏性末端，可能導(dǎo)致目的基因正向連接或反向連接，故目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同，A正確；B、若用PvuⅠ酶切，則會破壞氨芐青霉素抗性基因（AmpR），而重組質(zhì)粒和空質(zhì)粒中都有四環(huán)素抗性基因（TetR），因此在含Tet（四環(huán)素）培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有目的基因，B正確；C、若用SphⅠ酶切，則目的基因插入到四環(huán)素抗性基因（TetR）中，重組質(zhì)粒的大小與空質(zhì)粒不同，故可通過DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否，C正確；D、若用SphⅠ酶切，則會破壞四環(huán)素抗性基因（TetR），氨芐青霉素抗性基因（AmpR）不受影響，則重組質(zhì)粒中含氨芐青霉素抗性基因（AmpR），因此攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芐青霉素）的培養(yǎng)基中能形成菌落，在含Tet的培養(yǎng)基中不能形成菌落，D錯誤。故選：D?！军c(diǎn)評】本題考查基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程中限制酶的選擇原則等知識，意在考查考生對知識的理解和應(yīng)用能力。7．某小組通過PCR（假設(shè)引物長度為8個堿基短于實(shí)際長度）獲得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶進(jìn)行酶切（如圖），再用所得片段成功構(gòu)建了基因表達(dá)載體。下列敘述錯誤的是（）A．其中一個引物序列為5'﹣TGCGCAGT﹣3' B．步驟①所用的酶是SpeⅠ和CfoⅠ C．用步驟①的酶對載體進(jìn)行酶切，至少獲得了2個片段 D．酶切片段和載體連接時，可使用E.coli連接酶或T4連接酶【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】模式圖；PCR技術(shù)．【答案】B【分析】E.coliDNA連接酶只能連接黏性末端；T4DNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端。【解答】解：A、由于引物只能引導(dǎo)子鏈從5'到3'，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則，其中一個引物序列為5'TGCGCAGT﹣3'，A正確；B、根據(jù)三種酶的酶切位點(diǎn)，左側(cè)的黏性末端是使用NheI切割形成的，右邊的黏性末端是用CfoI切割形成的，B錯誤；C、用步驟①的酶對載體進(jìn)行酶切，使用了NheI和CfoI進(jìn)行切割，根據(jù)他們的識別位點(diǎn)以及原本DNA的序列，切割之后至少獲得了2個片段，C正確；D、圖中形成的是黏性末端，而E.coliDNA連接酶只能連接黏性末端；T4DNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端，D正確。故選：B?！军c(diǎn)評】本題主要考查的是DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生對基礎(chǔ)知識的理解掌握，難度適中。8．抗蟲作物對害蟲的生存產(chǎn)生壓力，會使害蟲種群抗性基因頻率迅速提高，導(dǎo)致作物的抗蟲效果逐漸減弱。為使轉(zhuǎn)基因抗蟲棉保持抗蟲效果，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上會采取一系列措施。以下措施不能實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)的是（）A．在轉(zhuǎn)基因抗蟲棉種子中混入少量常規(guī)種子 B．大面積種植轉(zhuǎn)基因抗蟲棉，并施用殺蟲劑 C．轉(zhuǎn)基因抗蟲棉與小面積的常規(guī)棉間隔種植 D．轉(zhuǎn)基因抗蟲棉大田周圍設(shè)置常規(guī)棉隔離帶【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用．【答案】B【分析】轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)、過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響），對待轉(zhuǎn)基因技術(shù)的利弊，正確的做法應(yīng)該是趨利避害，不能因噎廢食?！窘獯稹拷猓篈、在轉(zhuǎn)基因抗蟲棉種子中混入少量常規(guī)種子，則常規(guī)種子長成的普通植株能為敏感性（不抗蟲）個體提供生存空間，增加與抗蟲個體的競爭，避免抗性基因頻率升高過快，提高了抗蟲棉的抗蟲持久性，A正確；B、大面積種植轉(zhuǎn)基因抗蟲棉、施用殺蟲劑，都會進(jìn)一步選擇并保存抗性強(qiáng)的個體，導(dǎo)致敏感性個體死亡，從而加快害蟲種群抗性基因頻率提高，不利于抗蟲棉的抗蟲持久性，B錯誤；CD、將轉(zhuǎn)基因抗蟲棉與小面積的常規(guī)棉間隔種植以及轉(zhuǎn)基因抗蟲棉大田周圍設(shè)置常規(guī)棉隔離帶，作用機(jī)理相似：可以使敏感型個體存活，敏感性個體能與抗性強(qiáng)的棉鈴蟲進(jìn)行競爭，不會導(dǎo)致抗性基因頻率升高過快，提高了抗蟲棉的抗蟲持久性，CD正確。故選：B?！军c(diǎn)評】本題主要以抗蟲棉抗蟲效果的保持為情境，考查轉(zhuǎn)基因作物的安全性問題，要求考生明確相關(guān)內(nèi)容，能結(jié)合題意分析作答。9．某研究小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將綠色熒光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如圖甲所示。實(shí)驗得到能正常表達(dá)兩種蛋白質(zhì)的雜合子雌雄小鼠各1只，交配以期獲得Gata3﹣GFP基因純合子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生小鼠的基因型，設(shè)計了引物1和引物2用于PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖乙所示。下列敘述正確的是（）A．Gata3基因的啟動子無法控制GFP基因的表達(dá) B．翻譯時先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白 C．2號條帶的小鼠是野生型，4號條帶的小鼠是Gata3﹣GFP基因純合子 D．若用引物1和引物3進(jìn)行PCR，能更好地區(qū)分雜合子和純合子【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】模式圖；基因工程．【答案】B【分析】1、PCR技術(shù)是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫，是一項根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。2、PCR技術(shù)需要的條件：目的基因、引物、四種脫氧核苷酸、耐高溫DNA聚合酶?！窘獯稹拷猓篈、分析圖中可知，啟動子在編碼區(qū)的左側(cè)，GFP基因整合Gata3基因的右側(cè)，啟動子啟動轉(zhuǎn)錄后，可以在Gata3基因轉(zhuǎn)錄后，使GFP基因轉(zhuǎn)錄，Gata3基因的啟動子也能控制GFP基因的表達(dá)，A錯誤；B、基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯均是從5′→3′，因啟動子在左側(cè)，轉(zhuǎn)錄和翻譯方向均為從左向右，Gata3蛋白在GFP蛋白的左側(cè)，所以翻譯時先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白，B正確；C、整合GFP基因后，核酸片段變長，2號個體只有大片段，所以是Gata3﹣GFP基因純合子，4號個體只有小片段，是野生型，C錯誤；D、若用引物1和引物3進(jìn)行PCR，雜合子和Gata3﹣GFP基因純合子都能擴(kuò)增出相應(yīng)的片段則不能區(qū)分雜合子和純合子，D錯誤；故選：B?！军c(diǎn)評】本題主要考查PCR和基因表達(dá)的相關(guān)內(nèi)容，需要學(xué)生理解掌握PCR和基因表達(dá)的過程，并具有一定的識圖能力，屬于理解應(yīng)用層次的考查。10．抗蟲和耐除草劑玉米雙抗12﹣5是我國自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因品種。為給監(jiān)管轉(zhuǎn)基因生物安全提供依據(jù)，采用PCR方法進(jìn)行目的基因監(jiān)測，反應(yīng)程序如圖所示。下列敘述正確的是（）A．預(yù)變性過程可促進(jìn)模板DNA邊解旋邊復(fù)制 B．后延伸過程可使目的基因的擴(kuò)增更加充分 C．延伸過程無需引物參與即可完成半保留復(fù)制 D．轉(zhuǎn)基因品種經(jīng)檢測含有目的基因后即可上市【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；轉(zhuǎn)基因食品的安全性．【專題】坐標(biāo)曲線圖；基因工程；生物技術(shù)的安全性和倫理問題．【答案】B【分析】PCR技術(shù)：1、概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。2、原理：DNA復(fù)制。3、前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物。4、條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。5、過程：①高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開）；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈?！窘獯稹拷猓篈、預(yù)變性過程可促進(jìn)模板DNA解旋，沒有促進(jìn)復(fù)制，A錯誤；B、后延伸過程可使目的基因的擴(kuò)增更加充分，B正確；C、延伸過程仍需引物參與才能完成半保留復(fù)制，C錯誤；D、轉(zhuǎn)基因品種經(jīng)檢測含有目的基因并能穩(wěn)定表達(dá)，且有生物活性后才能上市，D錯誤。故選：B。【點(diǎn)評】本題考查PCR技術(shù)的相關(guān)知識，要求考生識記PCR技術(shù)的概念、原理、條件、過程等基礎(chǔ)知識，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確判斷各選項。11．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗，下列說法錯誤的是（）A．過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解 B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀 C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色 D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定．【專題】正推法；從生物材料提取特定成分．【答案】B【分析】DNA粗提取和鑒定的原理：1、DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精。2、DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性不同。3、DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍(lán)色。【解答】解：A、過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行可以使酶的活性降低，可以防止DNA降解，A正確；B、離心研磨液是為了加速細(xì)胞膜、細(xì)胞器、一些較大雜質(zhì)等的沉淀，B錯誤；C、在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色，C正確；D、粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)，D正確。故選：B。【點(diǎn)評】本題考查DNA的粗提取和鑒定，對于此類試題，需要考生注意的細(xì)節(jié)較多，如實(shí)驗的原理、實(shí)驗材料、實(shí)驗現(xiàn)象等，需要考生在平時的學(xué)習(xí)過程中注意積累。12．關(guān)于生物技術(shù)的安全與倫理問題在我國相關(guān)法規(guī)明令禁止的是（）A．試管動物的培育 B．轉(zhuǎn)基因食品的生產(chǎn) C．治療性克隆的研究 D．生物武器的發(fā)展和生產(chǎn)【考點(diǎn)】轉(zhuǎn)基因食品的安全性；生物技術(shù)引發(fā)的倫理問題；生物武器對人類的威脅．【專題】正推法；生物技術(shù)的安全性和倫理問題．【答案】D【分析】轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)、過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。對待轉(zhuǎn)基因技術(shù)的利弊，正確的做法應(yīng)該是趨利避害，不能因噎廢食?！窘獯稹拷猓篈、試管動物的培育可用于培育優(yōu)良動物、用于解決不孕不育等問題，不屬于我國明令禁止的項目，A不符合題意；B、轉(zhuǎn)基因食品的生產(chǎn)雖然具有一定的爭議，但不屬于我國明令禁止的項目，B不符合題意；C、治療性克隆可用于疾病的治療，不屬于我國明令禁止的項目，C不符合題意；D、生物武器危害性大，為了國家安全，應(yīng)在任何情況下不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲存生物武器，并反對生物武器及其技術(shù)和設(shè)備的擴(kuò)散，D符合題意。故選：D?！军c(diǎn)評】本題主要考查生物技術(shù)安全性與倫理性，考生識記相關(guān)知識即可分析作答，屬于識記與辨識能力的考查。13．以哺乳動物為研究對象的生物技術(shù)已獲得了長足的進(jìn)步。對生物技術(shù)應(yīng)用于人類，在安全與倫理方面有不同的觀點(diǎn)，下列敘述正確的是（）A．試管嬰兒技術(shù)應(yīng)全面禁止 B．治療性克隆不需要監(jiān)控和審查 C．生殖性克隆不存在倫理道德方面的風(fēng)險 D．我國不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗【考點(diǎn)】生物技術(shù)引發(fā)的倫理問題．【專題】生物技術(shù)的安全性和倫理問題．【答案】D【分析】1、生殖性克隆是指通過克隆技術(shù)產(chǎn)生獨(dú)立生存的新個體。2、治療性克隆是指利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定的細(xì)胞、組織和器官，用它們來修復(fù)或替代受損的細(xì)胞、組織和器官，從而達(dá)到治療疾病的目的?！窘獯稹拷猓篈、試管嬰兒技術(shù)必須獲得政府部門的相關(guān)批準(zhǔn)證書，以防該技術(shù)的濫用，但不是全面禁止，A錯誤；B、治療性克隆需在有效監(jiān)控和嚴(yán)格審查下實(shí)施，B錯誤；C、生殖性克隆人沖擊了現(xiàn)有的一些有關(guān)婚姻、家庭和兩性關(guān)系的倫理道德觀念，存在倫理道德方面的風(fēng)險，C錯誤；D、我國政府對生殖性克隆的態(tài)度是：不贊成、不允許、不支持、不接受，D正確。故選：D?！军c(diǎn)評】本題考查生物技術(shù)引發(fā)的倫理問題，比較基礎(chǔ)，只要考生識記我國政府對相關(guān)技術(shù)的態(tài)度即可正確答題，屬于考綱識記層次的考查。14．下列相關(guān)實(shí)驗操作正確的是（）A．配制PCR反應(yīng)體系時，加入等量的4種核糖核苷酸溶液作為擴(kuò)增原料 B．利用添加核酸染料的凝膠對PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳后，在紫外燈下觀察結(jié)果 C．將配制的酵母培養(yǎng)基煮沸并冷卻后，在酒精燈火焰旁倒平板 D．將接種環(huán)燒紅，迅速蘸取酵母菌液在培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，獲得單菌落【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）．【專題】微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用；基因工程．【答案】B【分析】PCR技術(shù)反應(yīng)的條件：①穩(wěn)定的緩沖溶液環(huán)境；②DNA模板；③2種引物；④四種脫氧核苷酸；⑤耐高溫的DNA聚合酶等?！窘獯稹拷猓篈、PCR的原理是DNA復(fù)制，DNA的單體是脫氧核糖核苷酸，配制PCR反應(yīng)體系時，加入4種脫氧核糖核苷酸的等量混合液作為擴(kuò)增原料，A錯誤；B、瓊脂糖凝膠制備中加入的核酸染料能與DNA分子結(jié)合，凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長為300nm的紫外燈下被檢測出來，B正確；C、將配制的酵母培養(yǎng)基高溫滅菌并冷卻到不燙手（50℃左右）后，在酒精燈火焰旁倒平板，C錯誤；D、將接種環(huán)燒紅，待冷卻后（避免菌種被燙死），蘸取酵母菌液在培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，獲得單菌落，D錯誤。故選：B?！军c(diǎn)評】本題考查DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定、微生物的培養(yǎng)等相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。15．關(guān)于采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物的實(shí)驗，下列敘述正確的是（）A．瓊脂糖凝膠濃度的選擇需考慮待分離DNA片段的大小 B．凝膠載樣緩沖液中指示劑的作用是指示DNA分子的具體位置 C．在同一電場作用下，DNA片段越長，向負(fù)極遷移速率越快 D．瓊脂糖凝膠中的DNA分子可在紫光燈下被檢測出來【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】正推法；PCR技術(shù)．【答案】A【分析】PCR技術(shù)：（1）概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。（2）原理：DNA雙鏈復(fù)制。（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物。（4）條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、ATP、一對引物、耐高溫的DNA聚合酶。（5）過程：高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開）；低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；中溫延伸：合成子鏈?！窘獯稹拷猓篈、在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)，瓊脂糖凝膠濃度的選擇需考慮待分離DNA片段的大小，A正確；B、凝膠載樣緩沖液中指示劑可起標(biāo)記的作用，是指示DNA分子對應(yīng)長度所出現(xiàn)位置，B錯誤；C、DNA分子具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷，在電場的作用下，這些帶電分子會向著與它所帶電荷相反的電極移動，通常DNA片段越長，遷移速率越慢，C錯誤；D、凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長為300nm的紫外燈下被檢測出來，D錯誤。故選：A。【點(diǎn)評】本題考查了PCR技術(shù)的相關(guān)知識，意在考查考生理解所學(xué)知識要點(diǎn)，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識，對生物學(xué)問題作出準(zhǔn)確的判斷，難度適中。二．解答題（共5小題）16．研究者用以蔗糖為唯一碳源的液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)真菌A的野生型（含NV基因）、突變體（NV基因突變）和轉(zhuǎn)基因菌株（轉(zhuǎn)入NV基因），檢測三種菌株NV酶的生成與培養(yǎng)液中的葡萄糖含量，結(jié)果如表所示（表中“+”表示有，“—”表示無）。檢測用菌株蔗糖NV酶葡萄糖（培養(yǎng)液中）野生型+++野生型———突變體+——轉(zhuǎn)基因菌株+++回答下列問題。（1）據(jù)表可推測蔗糖誘導(dǎo)了NV基因表達(dá)。NV酶的作用是參與蔗糖分解代謝，將蔗糖分解生成葡萄糖。檢測NV酶活性時，需測定的指標(biāo)是單位時間內(nèi)葡萄糖的生成量（或蔗糖的減少量等）（答出1點(diǎn)即可）。（2）表中突變體由T﹣DNA隨機(jī)插入野生型菌株基因組DNA篩選獲得。從野生型與突變體中分別提取基因組DNA作為模板，用與NV基因（選填“T﹣DNA”或“NV基因”）配對的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。若突變體擴(kuò)增片段長度＜（選填“＞”“＝”或“＜”）野生型擴(kuò)增片段長度，則表明突變體構(gòu)建成功，從基因序列分析其原因是T﹣DNA插入導(dǎo)致NV基因部分序列缺失。（3）為進(jìn)一步驗證NV基因的功能，表中的轉(zhuǎn)基因菌株是將NV基因?qū)胪蛔凅w細(xì)胞獲得的。在構(gòu)建NV基因表達(dá)載體時，需要添加新的標(biāo)記基因，原因是便于篩選出成功導(dǎo)入NV基因的細(xì)胞?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】表格數(shù)據(jù)類簡答題；基因工程．【答案】（1）蔗糖；參與蔗糖分解代謝，將蔗糖分解生成葡萄糖；單位時間內(nèi)葡萄糖的生成量（或蔗糖的減少量等）（2）NV基因；＜；T﹣DNA插入導(dǎo)致NV基因部分序列缺失（3）突變體；便于篩選出成功導(dǎo)入NV基因的細(xì)胞【分析】基因工程，又稱基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)，是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計，通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品?！窘獯稹拷猓海?）根據(jù)表格，野生型菌株加入蔗糖就會合成NV酶，不加就不會合成，推測蔗糖誘導(dǎo)了NV基因表達(dá)。分析表可知有NV酶，菌株就能將蔗糖分解出葡萄糖，因此NV酶可能參與蔗糖的分解代謝過程，將蔗糖分解生成葡萄糖。檢測NV酶活性時，可以測定單位時間內(nèi)葡萄糖的生成量或蔗糖的減少量等。（2）從題目中可知，突變體是通過T﹣DNA隨機(jī)插入野生型菌株基因組DNA篩選獲得的。在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，使用的引物需要與特定的DNA序列配對結(jié)合，才能啟動DNA的擴(kuò)增。野生型菌株的基因組DNA中沒有T﹣DNA的插入，所以用NV基因配對的引物進(jìn)行擴(kuò)增時，可以擴(kuò)增出完整的NV基因片段。而突變體由于T﹣DNA的隨機(jī)插入，導(dǎo)致NV基因的部分序列發(fā)生了缺失。這樣一來，使用同樣的引物進(jìn)行擴(kuò)增時，擴(kuò)增片段的長度就會小于野生型擴(kuò)增片段的長度。因此若突變體擴(kuò)增片段長度＜野生型擴(kuò)增片段長度，則表明突變體構(gòu)建成功。從基因序列分析其原因是T﹣DNA插入導(dǎo)致NV基因部分序列缺失。（3）為進(jìn)一步驗證NV基因的功能，表中的轉(zhuǎn)基因菌株是將NV基因?qū)胪蛔凅w細(xì)胞獲得的。突變體由于NV基因發(fā)生突變，無法正常表達(dá)NV酶，導(dǎo)致相關(guān)生理功能缺失或異常。通過將正常的NV基因?qū)胪蛔凅w細(xì)胞，如果能夠恢復(fù)原本在突變體中缺失或異常的生理功能，就可以有力地證明NV基因確實(shí)具有特定的功能。在構(gòu)建NV基因表達(dá)載體時，需要添加新的標(biāo)記基因，原因是便于篩選出成功導(dǎo)入NV基因的細(xì)胞。故答案為：（1）蔗糖；參與蔗糖分解代謝，將蔗糖分解生成葡萄糖；單位時間內(nèi)葡萄糖的生成量（或蔗糖的減少量等）（2）NV基因；＜；T﹣DNA插入導(dǎo)致NV基因部分序列缺失（3）突變體；便于篩選出成功導(dǎo)入NV基因的細(xì)胞【點(diǎn)評】本題考查基因工程的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和判斷能力，具備運(yùn)用所學(xué)知識綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。17．學(xué)習(xí)以下材料，回答（1）～（4）題。篩選組織特異表達(dá)的基因篩選組織特異表達(dá)的基因，對研究細(xì)胞分化和組織、器官的形成機(jī)制非常重要?！霸鰪?qiáng)子捕獲”是篩選組織特異表達(dá)基因的一種有效方法。真核生物的基本啟動子位于基因5′端附近，沒有組織特異性，本身不足以啟動基因表達(dá)。增強(qiáng)子位于基因上游或下游，與基本啟動子共同組成基因表達(dá)的調(diào)控序列?；蚬こ趟帽磉_(dá)載體中的啟動子，實(shí)際上包含增強(qiáng)子和基本啟動子。很多增強(qiáng)子具有組織特異的活性，它們與特定蛋白結(jié)合后激活基本啟動子，驅(qū)動相應(yīng)基因在特定組織中表達(dá)（圖A）?；谏鲜稣{(diào)控機(jī)理，研究者構(gòu)建了由基本啟動子和報告基因組成的“增強(qiáng)子捕獲載體”（圖B），并轉(zhuǎn)入受精卵。捕獲載體會隨機(jī)插入基因組中，如果插入位點(diǎn)附近存在有活性的增強(qiáng)子，則會激活報告基因的表達(dá)（圖C）。獲得了一系列分別在不同組織中特異表達(dá)報告基因的個體后，研究者提取每個個體的基因組DNA，通過PCR擴(kuò)增含有捕獲載體序列的DNA片段。對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序后，與相應(yīng)的基因組序列比對，即可確定載體的插入位點(diǎn)，進(jìn)而鑒定出相應(yīng)的基因。研究者利用各種遺傳學(xué)手段，對篩選得到的基因進(jìn)行突變、干擾或過表達(dá)，檢測個體表型的改變，研究其在細(xì)胞分化和個體發(fā)育中的作用，從而揭示組織和器官形成的機(jī)理。（1）在個體發(fā)育中，來源相同的細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程稱為細(xì)胞分化，分化是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果。（2）對文中“增強(qiáng)子”的理解，錯誤的是C（單選）。A．增強(qiáng)子是含有特定堿基序列的DNA片段B．增強(qiáng)子、基本啟動子和它們調(diào)控的基因位于同一條染色體上C．一個增強(qiáng)子只能作用于一個基本啟動子D．很多增強(qiáng)子在不同組織中的活性不同（3）研究者將增強(qiáng)子捕獲技術(shù)應(yīng)用于斑馬魚，觀察到報告基因在某幼體的心臟中特異表達(dá)。鑒定出捕獲載體的插入位點(diǎn)后，發(fā)現(xiàn)位點(diǎn)附近有兩個基因G和H，為了確定這兩個基因是否為心臟特異表達(dá)的基因，應(yīng)檢測其他器官細(xì)胞中，G和H兩個基因是否轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA或是否翻譯出相應(yīng)的蛋白質(zhì)。（4）真核生物編碼蛋白的序列只占基因組的很少部分，因而在絕大多數(shù)表達(dá)報告基因的個體中，增強(qiáng)子捕獲載體的插入位點(diǎn)位于基因外部，不會造成基因突變。研究者對圖B所示載體進(jìn)行了改造，期望改造后的載體隨機(jī)插入基因組后，在“捕獲”增強(qiáng)子的同時，也造成該增強(qiáng)子所調(diào)控的基因發(fā)生突變，以研究基因功能。請畫圖表示改造后的載體，并標(biāo)出各部分名稱（略）?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡答題；細(xì)胞的分化、衰老和凋亡；基因工程．【答案】（1）穩(wěn)定性差異選擇性表達(dá)（2）C（3）其他器官細(xì)胞中，G和H兩個基因是否轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA或是否翻譯出相應(yīng)的蛋白質(zhì)（4）【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。（4）目的基因的檢測與鑒定。【解答】解：（1）細(xì)胞分化是指在個體發(fā)育中由一個或一種細(xì)胞增殖產(chǎn)生的后代，在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程，其實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)。（2）AB、根據(jù)題干信息“增強(qiáng)子位于基因上游或下游，與基本啟動子共同組成基因表達(dá)的調(diào)控序列”分析，增強(qiáng)子是含有特定堿基序列的DNA片段，增強(qiáng)子、基本啟動子和它們調(diào)控的基因位于同一條染色體上，AB正確；C、根據(jù)圖C分析可知，一個增強(qiáng)子可作用于多個基因的基本啟動子，如圖中的報告基因與內(nèi)源基因，C錯誤；D、根據(jù)題干信息“很多增強(qiáng)子具有組織特異活性”，很多增強(qiáng)子在不同組織中的活性不同，D正確。故選：C。（3）鑒定出捕獲載體的插入位點(diǎn)后，發(fā)現(xiàn)位點(diǎn)附近有兩個基因G和H，若要確定這兩個基因是否為心臟特異表達(dá)的基因，可以對其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物或翻譯產(chǎn)物進(jìn)行檢測，即通過PCR等技術(shù)檢測其他器官細(xì)胞中G和H兩個基因是否轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA，或通過抗原—抗體雜交技術(shù)檢測是否翻譯出相應(yīng)的蛋白質(zhì)。（4）“增強(qiáng)子位于基因上游或下游，與基本啟動子共同組成基因表達(dá)的調(diào)控序列”，基因工程所用表達(dá)載體中的啟動子，包含增強(qiáng)子和基本啟動子。增強(qiáng)子捕獲載體的插入位點(diǎn)位于基因外部，因而不會造成基因突變。當(dāng)增強(qiáng)子捕獲載體的插入位點(diǎn)位于基因內(nèi)部，會造成該增強(qiáng)子所調(diào)控的基因發(fā)生突變。研究某目的基因的功能，需要將增強(qiáng)子插入到目的基因內(nèi)部，改造后的載體如圖：。故答案為：（1）穩(wěn)定性差異選擇性表達(dá)（2）C（3）其他器官細(xì)胞中，G和H兩個基因是否轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA或是否翻譯出相應(yīng)的蛋白質(zhì)（4）【點(diǎn)評】本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生理解識記有關(guān)技術(shù)的原理及操作步驟，還涉及細(xì)胞分化的概念等知識內(nèi)容，要求學(xué)生能將教材中的知識結(jié)合題中信息進(jìn)行遷移應(yīng)用。18．新城疫病毒可引起家禽急性敗血性傳染病，我國科學(xué)家將該病毒相關(guān)基因改造為r2HN，使其在水稻胚乳特異表達(dá)，制備獲得r2HN疫苗，并對其免疫效果進(jìn)行了檢測。回答下列問題：（1）實(shí)驗所用載體的部分結(jié)構(gòu)及其限制酶識別位點(diǎn)如圖1所示。其中GtP為啟動子，若使r2HN僅在水稻胚乳表達(dá)，GtP應(yīng)為水稻胚乳細(xì)胞特異表達(dá)的基因的啟動子。Nos為終止子，其作用為終止轉(zhuǎn)錄。r2HN基因內(nèi)部不含載體的限制酶識別位點(diǎn)。因此，可選擇限制酶HindⅢ和EcoRⅠ對r2HN基因與載體進(jìn)行酶切，用于表達(dá)載體的構(gòu)建。（2）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化方法將r2HN基因?qū)胨居鷤M織。為檢測r2HN表達(dá)情況，可通過PCR技術(shù)檢測r2HN基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA，通過抗原—抗體雜交技術(shù)檢測是否翻譯出r2HN蛋白。（3）獲得轉(zhuǎn)基因植株后，通常選擇單一位點(diǎn)插入目的基因的植株進(jìn)行研究。此類植株自交一代后，r2HN純合體植株的占比為。選擇純合體進(jìn)行后續(xù)研究的原因是純合體自交后代不發(fā)生性狀分離。（4）制備r2HN疫苗后，為研究其免疫效果，對實(shí)驗組雞進(jìn)行接種，對照組注射疫苗溶劑。檢測兩組雞體內(nèi)抗新城疫病毒抗體水平和特異應(yīng)答的CD8+T細(xì)胞（細(xì)胞毒性T細(xì)胞）水平，結(jié)果如圖2所示。據(jù)此分析，獲得的r2HN疫苗能夠成功激活雞的體液免疫和細(xì)胞免疫。（5）利用水稻作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)r2HN疫苗的優(yōu)點(diǎn)是不受性別的限制、可大量種植、成本低、安全性高。（答出兩點(diǎn)即可）【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖像坐標(biāo)類簡答題；免疫調(diào)節(jié)；基因工程．【答案】（1）水稻胚乳細(xì)胞特異表達(dá)的基因的終止轉(zhuǎn)錄HindⅢ；EcoRⅠ（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化r2HN基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA抗原—抗體雜交（3）純合體自交后代不發(fā)生性狀分離（4）體液細(xì)胞（5）不受性別的限制、可大量種植、成本低、安全性高【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA——分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原—抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！窘獯稹拷猓海?）利用水稻細(xì)胞培育能表達(dá)r2HN的水稻胚乳細(xì)胞生物反應(yīng)器，需要使用在水稻胚乳細(xì)胞中特異性表達(dá)的基因的啟動子。Nos為終止子，終止子所起作用為終止轉(zhuǎn)錄。r2HN基因內(nèi)部不含載體的限制酶識別位點(diǎn)，KpnⅠ會破壞啟動子序列，因而不能選用；SacⅠ位于終止子序列之外，因而不能選用。故為了將目的基因插入到載體的啟動子和終止子之間，需要選用HindⅢ和EcoRⅠ對r2HN基因與載體進(jìn)行酶切。（2）獲得水稻愈傷組織后，通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的方法使目的基因進(jìn)入水稻細(xì)胞。為檢測r2HN表達(dá)情況，可通過PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)錄所產(chǎn)生的相應(yīng)的mRNA，可從轉(zhuǎn)基因水稻中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交檢測是否翻譯出r2HN蛋白。（3）單一位點(diǎn)插入目的基因的植株，相當(dāng)于雜合子，其自交后代含有r2HN基因的純合子為。由于純合體自交后代不發(fā)生性狀分離，所以選擇純合體進(jìn)行后續(xù)研究。（4）據(jù)圖可知，實(shí)驗組的抗體水平和CD8+T細(xì)胞水平都比對照組高，說明通過體液免疫產(chǎn)生了抗體，通過細(xì)胞免疫產(chǎn)生了細(xì)胞毒性T細(xì)胞，即r2HN疫苗能夠成功激活雞的體液免疫和細(xì)胞免疫。（5）通過水稻作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)r2HN疫苗具有不受性別的限制、可大量種植、成本低、安全性高等優(yōu)點(diǎn)。故答案為：（1）水稻胚乳細(xì)胞特異表達(dá)的基因的終止轉(zhuǎn)錄HindⅢ；EcoRⅠ（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化r2HN基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA抗原—抗體雜交（3）純合體自交后代不發(fā)生性狀分離（4）體液細(xì)胞（5）不受性別的限制、可大量種植、成本低、安全性高【點(diǎn)評】本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能將教材中的知識結(jié)合題中信息進(jìn)行遷移應(yīng)用。19．研究發(fā)現(xiàn)基因L能夠通過脫落酸信號途徑調(diào)控大豆的逆境響應(yīng)。利用基因工程技術(shù)編輯基因L，可培育耐鹽堿大豆品系。在載體上的限制酶BsaⅠ切點(diǎn)處插入大豆基因L的向?qū)NA序列，將載體導(dǎo)入大豆細(xì)胞后，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可引導(dǎo)核酸酶特異性結(jié)合基因組上的目標(biāo)序列并發(fā)揮作用。載體信息、目標(biāo)基因L部分序列及相關(guān)結(jié)果等如圖所示。（1）用PCR技術(shù)從大豆基因組DNA中擴(kuò)增目標(biāo)基因L時，所用的引物越短，引物特異性越低（填“高”或“低”）。限制酶在切開DNA雙鏈時，形成的單鏈突出末端為黏性末端，若用BsaⅠ酶切大豆基因組DNA，理論上可產(chǎn)生的黏性末端最多有256種。載體信息如圖甲所示，經(jīng)BsaⅠ酶切后，載體上保留的黏性末端序列應(yīng)為5′﹣GTTT﹣3′和5′﹣CAAT﹣3′。（2）重組載體通過農(nóng)桿菌導(dǎo)入大豆細(xì)胞，使用抗生素卡那霉素篩選到具有該抗生素抗性的植株①～④。為了鑒定基因編輯是否成功，以上述抗性植株的DNA為模板，通過PCR擴(kuò)增目標(biāo)基因L，部分序列信息及可選用的酶切位點(diǎn)如圖乙所示，PCR產(chǎn)物完全酶切后的電泳結(jié)果如圖丙所示。據(jù)圖可判斷選用的限制酶是SacⅠ，其中純合的突變植株是④（填序號）。（3）實(shí)驗中獲得1株基因L成功突變的純合植株，該植株具有抗生素抗性，檢測發(fā)現(xiàn)其體細(xì)胞中只有1條染色體有T﹣DNA插入。用抗生素篩選這個植株的自交子代，其中突變位點(diǎn)純合且對抗生素敏感的植株所占比例為，篩選出的敏感植株可用于后續(xù)的品種選育?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡答題；PCR技術(shù)；基因工程．【答案】（1）低；256；GTTT；CAAT（2）卡那霉素；SacⅠ；④（3）【分析】1、基因工程的基本操作步驟主要有：目的基因的篩選和獲取；基因表達(dá)載體的構(gòu)建；將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；目的基因的檢測與鑒定。2、PCR技術(shù)的原理是DNA復(fù)制。PCR技術(shù)實(shí)際上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過程。DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3'端延伸DNA鏈?！窘獯稹拷猓海?）引物通過堿基互補(bǔ)配對與目標(biāo)基因結(jié)合，若引物越短，可能的結(jié)合位點(diǎn)越多，特異性越低。根據(jù)題意，限制酶在切開DNA雙鏈時，形成的單鏈突出末端為黏性末端，由圖中可知，若用BsaⅠ酶切大豆基因組DNA，產(chǎn)生的黏性末端有4個堿基，并且可以是任意堿基，因此理論上可以產(chǎn)生的黏性末端有44＝256種。由載體上的已知序列可知，兩條鏈上都有BsaⅠ酶的識別序列，故經(jīng)BsaⅠ酶切后，去掉一個片段，剩下的載體兩側(cè)各有一個黏性末端，根據(jù)BsaⅠ酶的酶切位點(diǎn)可知，載體上保留的黏性末端序列應(yīng)為5′﹣GTTT﹣3′和5′﹣CAAT﹣3′。（2）觀察載體信息，T﹣DNA片段內(nèi)只有抗卡那霉素抗性基因，而且農(nóng)桿菌侵染植物時，T﹣DNA能整合到宿主細(xì)胞的染色體DNA上，隨染色體DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯，因此可以使用卡那霉素篩選到具有該抗生素抗性的植株。觀察目標(biāo)序列及突變序列，突變后，多了一個SacⅠ的酶切位點(diǎn)，即使用限制酶SacⅠ，在目標(biāo)序列上沒有酶切位點(diǎn)，電泳后只有一個條帶；在突變序列上有一個酶切位點(diǎn)，酶切后電泳，可以看到兩個條帶，故只看到兩個條帶的電泳結(jié)果④表示純合突變植株。（3）用L'表示T﹣DNA插入成功的染色體，則該植株基因型可記為LL'，其自交子代基因型為LL：LL'：L'L'＝1：2：1，其中突變位點(diǎn)純合且對抗生素敏感的植株L'L'占。故答案為：（1）低；256；GTTT；CAAT（2）卡那霉素；SacⅠ；④（3）【點(diǎn)評】本題結(jié)合電泳圖考查了PCR及限制酶的特性及功能，還考查了基因工程的應(yīng)用，旨在考查考生對基因工程相關(guān)知識的掌握情況，及對所學(xué)知識的理解能力及相互聯(lián)系的能力。20．將天然Ti質(zhì)粒改造成含有Vir基因的輔助質(zhì)粒（輔助T﹣DNA轉(zhuǎn)移）和不含有Vir基因、含有T﹣DNA的穿梭質(zhì)粒，共同轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，可提高轉(zhuǎn)化效率。細(xì)菌和棉花對密碼子偏好不同，為提高翻譯效率，增強(qiáng)棉花抗病蟲害能力，進(jìn)行如下操作?；卮鹣铝袉栴}。注：F1﹣F3，R1﹣R3表示引物；T﹣DNA﹣LB表示左邊界；T﹣DNA﹣RB表示右邊界；Ori表示復(fù)制原點(diǎn)；KanR表示卡那霉素抗性基因；HygBR表示潮霉素B抗性基因。（1）從蘇云金桿菌提取DNA時，需加入蛋白酶，其作用是水解蘇云金桿菌細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，使菌體釋放DNA。提取過程中加入體積分?jǐn)?shù)為95%的預(yù)冷酒精，其目的是初步分離DNA和蛋白質(zhì)。（2）本操作中獲取目的基因的方法是PCR技術(shù)和人工合成法。（3）穿梭質(zhì)粒中p35s為啟動子，其作用是RNA聚合酶識別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄；插入兩個p35s啟動子，其目的可能是促進(jìn)目的基因更多的轉(zhuǎn)錄。（4）根據(jù)圖中穿梭質(zhì)粒上的KanR和HygBR兩個標(biāo)記基因的位置，用HygBR基因?qū)?yīng)的抗生素初步篩選轉(zhuǎn)化的棉花愈傷組織。（5）為檢測棉花植株是否導(dǎo)入目的基因，提取棉花植株染色體DNA作模板，進(jìn)行PCR，應(yīng)選用的引物是F3和R2。（6）本研究采用的部分生物技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程，理由是D（單選）。A.通過含有雙質(zhì)粒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化棉花細(xì)胞B.將蘇云金桿菌Bt基因?qū)朊藁?xì)胞中表達(dá)C.將1﹣1362基因序列改變?yōu)槊藁?xì)胞偏好密碼子的基因序列D.用1﹣1362合成基因序列和1363﹣1848天然基因序列獲得改造的抗蟲蛋白【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡答題；基因工程．【答案】（1）水解蘇云金桿菌細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，使菌體釋放DNA初步分離DNA和蛋白質(zhì)（2）PCR技術(shù)人工合成法（3）RNA聚合酶識別和結(jié)合位點(diǎn)促進(jìn)目的基因更多的轉(zhuǎn)錄（4）HygBR（5）F3R2（6）D【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測與鑒定。【解答】解：（1）從蘇云金桿菌提取DNA時，加入蛋白酶的作用是水解蘇云金桿菌細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，使菌體釋放DNA。由于DNA不溶于酒精，有些蛋白質(zhì)溶于酒精，提取過程中加入體積分?jǐn)?shù)為95%的預(yù)冷酒精可初步分離DNA和蛋白質(zhì)。（2）由圖示可知，本操作中獲取目的基因的方法是PCR技術(shù)和人工合成法。（3）啟動子作用是RNA聚合酶識別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄；插入兩個p35s啟動子，其目的可能是促進(jìn)目的基因更多的轉(zhuǎn)錄。（4）由題干信息可知，T﹣DNA﹣LB表示左邊界；T﹣DNA﹣RB表示右邊界，根據(jù)圖中穿梭質(zhì)粒上的KanR和HygBR兩個標(biāo)記基因的位置可知，HygBR基因在T﹣DNA（重組DNA）上，用HygBR基因?qū)?yīng)的抗生素初步篩選轉(zhuǎn)化的棉花愈傷組織。（5）PCR擴(kuò)增目的基因時，引物應(yīng)在目的基因的兩端，所以為檢測棉花植株是否導(dǎo)入目的基因，應(yīng)選用的引物是F3和R2。（6）蛋白質(zhì)工程合成的蛋白質(zhì)為自然界中沒有的新蛋白質(zhì)，本研究中用1﹣1362合成基因序列和1363﹣1848天然基因序列獲得改造的抗蟲蛋白，所以屬于蛋白質(zhì)工程，D正確。故選：D。.故答案為：（1）水解蘇云金桿菌細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，使菌體釋放DNA初步分離DNA和蛋白質(zhì)（2）PCR技術(shù)人工合成法（3）RNA聚合酶識別和結(jié)合位點(diǎn)促進(jìn)目的基因更多的轉(zhuǎn)錄（4）HygBR（5）F3R2（6）D【點(diǎn)評】本題考查了基因工程的相關(guān)知識，意在考查考生理解所學(xué)知識要點(diǎn)，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識，對生物學(xué)問題作出準(zhǔn)確的判斷，難度適中。

考點(diǎn)卡片1．微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）【知識點(diǎn)的認(rèn)識】土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)：1．分離菌株的思路（1）自然界中目的菌株的篩選①依據(jù)：根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。②實(shí)例：PCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的TaqDNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來的Taq細(xì)菌中提取出來的。（2）實(shí)驗室中目的菌株的篩選①原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度．pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。②方法：能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素．配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌。2．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法（1）稀釋涂布平板法（間接）①當(dāng)樣品的稀釋庋足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。②通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中大約含有的活菌數(shù)。（2）利用顯微鏡直接計數(shù)3．分解尿素的細(xì)菌的鑒定細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。4．實(shí)驗流程土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長的菌落→鑒定?！久}方向】自生固氮菌是土壤中能獨(dú)立固定空氣中氮?dú)獾募?xì)菌，科研人員進(jìn)行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測定的研究，部分實(shí)驗流程如圖所示。下列敘述正確的是（）A.培養(yǎng)自生固氮菌時，可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，接種完成后培養(yǎng)皿應(yīng)倒置B.該純化培養(yǎng)的方法是稀釋涂布平板法，統(tǒng)計細(xì)菌數(shù)量時通常會低于真實(shí)值C.步驟①獲取土壤一般來自深層土壤，為防止其他雜菌污染可對獲取土壤滅菌處理D.若④的平板上菌落平均數(shù)為58個，則每克土壤中含有的固氮菌約5.8×105個分析：培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)；分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因為它們來源于動物原料，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)。在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對特殊營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的要求。解答：A、培養(yǎng)自生固氮菌時，一般不需要添加氮源，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基含有氮源，A錯誤；B、該純化培養(yǎng)的方法是稀釋涂布平板法，由于多個細(xì)菌連在一起時長出來的是單個菌落，因此統(tǒng)計細(xì)菌數(shù)量時通常會低于真實(shí)值，B正確；C、步驟①獲取土壤一般來自淺層土壤，對土壤滅菌處理時也殺死了固氮菌，C錯誤；D、10g土壤加到90mL無菌水后，稀釋了10倍，在④中相當(dāng)于